Établir des tumeurs comme la partie postérieure de l’œil est difficile. Cette méthode permet l’induction de tumeurs reproductibles du mélanome choroïdien chez la souris et l’imagerie en direct de la croissance tumorale pour évaluation. Ce protocole utilise l’imagerie en direct OCT pour évaluer l’emplacement des tumeurs déjà au moment de l’inoculation des cellules tumorales et pour suivre la croissance tumorale chez les animaux vivants.
Le mélanome uvéal est une maladie dévastatrice avec un taux de métastases de près de 50%. Le développement de modèles expérimentaux est essentiel pour faire avancer la recherche visant de nouvelles possibilités thérapeutiques. Un avantage de cette méthode est que l’évaluation immédiate du succès de l’injection permet d’atteindre des groupes d’étude avec des tumeurs homogènes et de les suivre en continu par imagerie en direct.
Examiner la progression tumorale. L’injection dans les yeux de la petite souris nécessite de la pratique. La possibilité de visualiser les cellules injectées vous permet d’évaluer votre succès immédiatement et de répéter avec plus de souris si nécessaire.
La démonstration de la procédure sera le Dr Dimitri Gaber du laboratoire de recherche en ophtalmologie du centre médical Kaplan. Pour commencer, appliquez un anesthésique ophtalmique topique à 0,4%, Oxybuprocaïne, sur les deux yeux de la souris anesthésiée. Ensuite, appliquez localement 0,5% de tropicamide sur les deux yeux pour dilater les pupilles, suivi de 1,4% d’hydroxyéthylcellulose comme lubrifiant pour éviter le dessèchement des yeux.
Observez un œil de la souris sous un microscope opératoire. Tenez les paupières ouvertes avec des pinces intraoculaires stériles. Tenez ensuite les limbes-conjonctives temporales supérieures et tirez vers une position infranasale.
Sécurisez cette position en maintenant les limbes-conjonctives tout au long de la procédure. À l’aide d’une pointe d’aiguille de calibre 30, faites une petite péritomie conjonctivale dans la région temporale dorsale d’environ un à deux millimètres en arrière du limbe. Retirez l’excès de capsule tendineuse de l’ouverture de la péritomie.
Insérez la pointe de l’aiguille pour pénétrer dans la sclérotique en créant une trace dans l’espace sous-choroïdien jusqu’à ce que la couleur brune de la choroïde apparaisse à travers la substance blanche exposée de la sclérotique. Chargez les cellules dans une seringue Hamilton en verre stérile de 10 microlitres montée avec une aiguille émoussée de calibre 32 torsadée à un angle de 45 degrés. Insérez l’aiguille de la seringue chargée d’environ deux millimètres dans le tractus créé et injectez deux microlitres de la suspension cellulaire.
Maintenez l’aiguille en place après l’injection pendant deux à trois secondes jusqu’à ce que tout le liquide se soit dissipé. Retirez l’aiguille en la tirant doucement pour éviter les fuites du tractus. Immédiatement après l’inoculation des cellules de mélanome, observer l’œil injecté de l’animal par des tomodensitogrammes.
Sur la base des scans, classez le décollement de la rétine ou les modèles RD selon trois catégories RD local, fuite dans le vitreux ou RD étendu. Ouvrez un logiciel d’analyse de segmentation OCT pour prédire la taille de la tumeur en fonction de la hauteur RD. Mesurez la hauteur de la RD locale dans les scans de l’OPO et classez-les en trois groupes. Dans la phase postopératoire, appliquer 0,3% d’ofloxacine par voie topique.
La prédiction de la croissance tumorale basée sur l’OCT après l’injection de cellules sous-choroïdiennes est représentée dans cette figure. Les souris présentaient trois modèles de RD, Focal, Leakage To The Vitreous et Extended RD. Il y avait une association entre le schéma de RD immédiatement après l’injection et la localisation des tumeurs cinq jours après l’injection. La RD focale était associée à la croissance des cellules tumorales limitée à la choroïde.
Cependant, l’observation de cellules dans le vitré après injection chez des animaux présentant une DR focale a indiqué une croissance tumorale dans la cavité vitréenne et la choroïde. lorsque la RD étendue a été observée après l’injection, les tumeurs ont été dispersées dans toute la choroïde et le vitré après cinq jours. La gamme de tailles de tumeurs induites dans ce modèle peut être divisée en petite, moyenne et grande.
On voit ici des images représentatives de la mesure OCT de la hauteur DR après injection, et l’image du fond d’œil correspondant, un scan OCT horizontal de la hauteur et de la largeur de la tumeur le cinquième jour après l’injection, et son image du fond d’œil correspondant, et la section oculaire colorée H & E correspondante démontrant des mesures tumorales comparables. Les mesures du volume tumoral de souris qui ont présenté une RD petite, moyenne ou grande immédiatement après l’injection cellulaire sont présentées ici. L’ajustement de la force d’injection peut affecter la taille et l’emplacement de la tumeur.
Il est important de calibrer cela et d’évaluer le schéma de décollement induit de la rétine par OCT après injection. L’imagerie en direct des tumeurs choroïdiennes est un outil expérimental important qui permet d’examiner l’effet de différents facteurs ou thérapies potentielles sur la progression tumorale.
