La signification de ce protocole réside dans la détectabilité en temps réel des tumeurs pulmonaires qui se sont développées spontanément dans ce modèle de souris, de l’initiation de tumeur à la progression de tumeur. L’avantage de cette technique sont qui est non invasive, est de ne nécessiter que des compétences de base et nous permettent de surveiller directement l’effet de la drogue et le traitement de l’intérêt. La progression de tumeur pulmonaire peut également être évaluée en présence ou en l’absence d’un gène d’intérêt.
À l’aide de cette analyse, de nouvelles stratégies de traitement peuvent être éventuellement étendues à la clinique. Sept et 18 semaines après l’intubation lentivirale, allumez la pompe de chauffage pour le gel à ultrasons et le moniteur de température et installez un incubateur de 33 degrés Celsius. Placez le moteur 3D sur le système ferroviaire intégré et confirmez que le système de montage du moteur et du transducteur est fixé en place.
Connectez un transducteur de fréquence de 40 hertz au moteur 3D et ouvrez une nouvelle étude dans le logiciel d’échographie. Dans la nouvelle fenêtre d’étude, entrez le nom de l’étude. Dans la fenêtre de nom de la série, entrez le nom de la série et toute autre information pertinente.
Après avoir cliqué, sélectionnez le type transducteur. Le programme passera en mode B. Placez une lampe chauffante dans une position pratique au-dessus de la plate-forme animale et confirmez un manque de réponse au réflexe de pédale chez la souris expérimentale anesthésiée.
Placez la souris sur la plate-forme animale dans le ventral cubitus et appliquez de l’onguent sur les yeux de l’animal. Fixez fermement les membres sur la plate-forme avec du ruban adhésif et appliquez une fine couche de gel à ultrasons réchauffé sur la poitrine de l’animal. Utilisez le bouton de contrôle de la hauteur pour abaisser la sonde d’acquisition jusqu’à ce qu’elle touche la surface de la poitrine de la souris et positionne la sonde de telle sorte que le cœur de la souris soit approximativement centré.
Ensuite, utilisez les micro-boutons pour acquérir des images de l’ensemble de la poitrine à partir des deux extrémités dans l’orientation transversale. Idéalement recueillir 500 images par souris. Lorsque toutes les images ont été capturées, nettoyez le gel de la poitrine de la souris et placez l’animal dans l’incubateur chauffant.
Pour l’analyse 2D des images ultrasoniques, ouvrez les cadres acquis dans le logiciel d’ultrason et numérisez manuellement les cadres pour les tumeurs. Pour les petites tumeurs initiatrices, comptez périodiquement le nombre d’êtres beelines tous les 10 cadres pour toute la longueur des 500 images acquises. Pour les mesures 2D des grandes tumeurs utilisent l’outil linéaire pour mesurer la largeur et la longueur de la tumeur présente, puis calculer le volume des tumeurs en utilisant la formule.
Sept semaines après l’infection intra-trachéale, l’imagerie ultrasonique est effectuée pour visualiser les différents types de lésions précurseurs qui se produisent dans le modèle expérimental de souris après l’injection. Ces lésions précurseurs identifiées par beeline peuvent être comptées par l’oeil et représentent de petites tumeurs à la surface des poumons. Le tracé de dispersion de ces données permet la quantification des tumeurs au sein des souris expérimentales pour permettre l’estimation du nombre relatif de tumeurs par animal.
À 18 semaines après l’infection, les grandes tumeurs apparaissent sous forme de fissures profondes interrompant la surface plurielle qui peuvent être mesurées dans le logiciel d’échographie. Le volume relatif de tumeur peut alors être quantifié pour l’analyse statistique. L’hématoxyline et la coloration d’éosine sur des sections pulmonaires récoltées à 20 semaines après infection confirment la formation de grandes tumeurs aussi bien que la formation de l’adénome et de l’adénocarcinome.
Il est important de ne pas confondre les tumeurs pulmonaires, qui sont dynamiques, avec de faux positifs, qui sont statiques. Puisque la qualification du nombre de tumeur du volume est relative dans cette méthode, nous proposons d’employer des méthodes additions, telles que la coloration de Petri. Ce modèle permet une évaluation directe des effets des aberrations génétiques ou des stratégies de traitement sur le développement du cancer du poumon chez la souris.
