Fabrication de grilles d’affinité de streptavidine pour la préparation d’échantillons de cryo-microscopie électronique

Il y a eu de nombreuses avancées technologiques récentes dans la cryo-EM, y compris des progrès dans le matériel du microscope lui-même qui améliorent la qualité globale des images, ainsi que des développements dans les logiciels utilisés pour traiter les images cryo-EM qui peuvent commencer à traiter les grandes quantités d’hétérogénéité présentes dans de nombreux échantillons. La préparation des échantillons reste l’un des plus grands goulots d’étranglement de la cryo-EM. La quantité d’échantillon peut être limitée et les protéines ont tendance à absorber l’interface air-eau hydrophobe pendant la vitrification.

Cela peut entraîner la dénaturation de l’échantillon, la rupture de complexes protéiques plus importants et l’orientation préférée des particules présentes dans les images cryo-EM. Ces grilles tirent parti de l’interaction de haute affinité entre la streptavidine et la biotine pour attacher les échantillons biotinylés et les protéger de l’interface hydrophobe air-eau. Nous pouvons travailler avec de très faibles quantités d’échantillons, et l’exaltation aléatoire de la biotine des échantillons offre une stratégie pour surmonter les problèmes d’orientation préférentielle qui peuvent être observés lors de l’utilisation d’autres couches de support.