JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

כאן, אנו מתארים את התקן מעבדה לתכנות יכול לשמש ליצירת תמציות של תרסיס עשן ואלקטרוניקה סיגריה סיגריה קונבנציונלי. שיטה זו מספקת כלי שימושי עבור ביצוע ההשוואה הישירה בין סיגריות קונבנציונאלי סיגריות אלקטרוניות, הוא נקודת כניסה נגישה לתוך המחקר סיגריה אלקטרונית.

Abstract

סיגריות אלקטרוניות מוצר טבק הפופולרי ביותר בקרב הביניים, התיכונים והם מוצר טבק חלופי הפופולרי ביותר בקרב מבוגרים. באיכות גבוהה, לשחזור מחקר על ההשלכות של שימוש סיגריה אלקטרונית היא חיונית להבנה המתעוררים בריאות הציבור חששות ובעיצוב ראיות מבוסס מדיניות רגולטורית. בעוד מספר גדל והולך של ניירות לדון סיגריות אלקטרוניות, יש מעט עקביות בשיטות על-פני קבוצות והסכמה מעט מאוד על תוצאות. כאן, אנו מתארים את התקן מעבדה לתכנות יכול לשמש ליצירת תמציות של תרסיס עשן ואלקטרוניקה סיגריה סיגריה קונבנציונלי. פרוטוקול זה מפרט הנחיות הרכבה והפעלה של התקן האמור, מדגים את השימוש תמצית שנוצרו ביישומים דוגמת שני: במבחנה תא הכדאיות assay, ו גז כרומטוגרפיה-ספקטרומטריית. שיטה זו מספקת כלי להכנת ההשוואה הישירה בין סיגריות קונבנציונאלי סיגריות אלקטרוניות, ויש נקודת כניסה נגישה לתוך המחקר סיגריה אלקטרונית.

Introduction

למרות מאמץ מרוכז על ידי ארגוני בריאות, השימוש בטבק המוצר עדיין הגורם המוביל למוות למניעה ברחבי העולם, עם רוב מקרי המוות המיוחס עישון סיגריה1. מאז כניסה לשוק בשנת 2003, סיגריות אלקטרוניות יש כבר גדל הפופולריות בקרב משתמשי המוצר טבק. נכון לעכשיו, סיגריות אלקטרוניות הם החלופה הכי פופולרי המקובלת סיגריות בקרב מבוגרים אמריקאי (~ 5%)2 לבין מערכת משלוח ניקוטין הפופולרי ביותר בין התיכון (~ 5.3%) והתיכונים (~ 16%)3. אם המגמה הנוכחית תמשיך, סיגריות אלקטרוניות צפוי להחליף סיגריות קונבנציונליים עבור הדורות הבאים. עם זאת, ההשלכות בריאות של סיגריה אלקטרונית שימוש נותרו בלתי ברורים.

מחקר על סיגריות אלקטרוניות לא התחיל ברצינות עד סיגריה אלקטרונית הפופולריות גדלה במהירות 20133,4. מאז, יש כבר מועסקים מספר מודלים שונים כדי לענות על השאלה הרעילות שלהם. עם זאת, תוצאות מחקרים רבים אינן סותרות, ולהשתמש בזמן נראה כי סיגריות אלקטרוניות הם בדרך כלל פחות רעיל מסיגריות הקונבנציונלית יש אין הסכמה הנוכחי על ההשלכות בריאות של סיגריה אלקטרונית5, 6 , 7. מחקרים קודמים שלנו מצביע על כך סיגריות אלקטרוניות הן באופן משמעותי פחות רעיל אנדותל כלי הדם מסיגריות קונבנציונאלי, למרות יכולתם לגרום נזק לדנ א ו של אינדוקציה של סטרס חמצוני ומוות תא8 . עם זאת, מחקר נוסף הכרחי לפני שאנחנו יכולים להסיק מסקנות המשרד על התוצאות תקינות השימוש סיגריה אלקטרונית.

כמו סיגריות קונבנציונליים הם הסיבה המובילה של מחלת כלי דם למניעה9, יש עניין הולך וגובר בסיכון לבריאות כלי הדם של סיגריה אלקטרונית השתמש10,11,12. על מנת לחקור את ההשפעות של סיגריות אלקטרוניות על מערכת כלי הדם, המעבדה שלנו פיתחה מכשיר עישון/vaping (איור 1) מיקרו-בקר פעלו8. מכשיר זה הוא מסוגל לייצר תמציות נוזלי או תרסיס סיגריה אלקטרונית או עשן הסיגריה המקובלת בממיסים אורגניים או מימית. כמו זרימת אוויר נשלטת על ידי השילוב של הרגולטור זרימת אוויר מתכוונן עם תוכנית תזמון PBASIC, המכשיר יכול לשמש כדי להפיק תמציות לפי מספר כלשהו של המשתמש הגדיר פרוטוקולים. כאן אנו מפרטים את הרכבה והפעלה של התקן זה, כמו גם שני יישומים פוטנציאליים: במבחנה הערכת הכדאיות תא, גז-כרומטוגרפיה-ספקטרומטריית.

figure-introduction-2482
איור 1: מכשיר עישון/Vaping. מפרטים טכניים עבור הרכבה פיזית של המכשיר ללא עישון/vaping את הסיגריה/הסיגריה כמו סיגריה אלקטרונית (e-סיגריה) תצורה (A) והן את תצורת סיגריה אלקטרונית של טנק (B). רכיב המפתח: 1) שאיפת יציאה; 2) אוסף ראשי impinger; 3) impinger גלישה; 4) בוכנר flask ואקום ההשמנה; 5) כלל פותח ברז חשמלי; 6) מיקרו BS1; 7) הרגולטור זרימת אוויר; 8) 510 השחיל סיגריה אלקטרונית טאנק לבסיס. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Protocol

1. הרכבה של המכשיר

  1. לאבטח 100 מ ל בוכנר שתייה צידניות (איור 1, #4) כדי טבעת פלדה לעמוד ולא ליצור מלכודת ואקום על-ידי ממלא אותו עם 50 גר' סידן כלורי לשמש חומר? סופג לחות. לאטום את הבקבוק עם פקק גומי דרך חור, לעטוף את הצומת בסימפטומים ולא במחלה עצמה עם סרט פרפין, ולהפעיל פיפטה דרך החור.
  2. באמצעות צינורות ויניל, לחבר את פיפטה המשתרעת הפקק כדי מחבר הצינור לצומת t.
  3. באמצעות צינורות ויניל, להתחבר אחד לשני את impinger שני (איור 1, #2 & #3) וחבר את הפלט של impinger השני המחבר צינור לצומת t.
  4. באמצעות צינורות ויניל, התחבר יציאת קלט של impinger הראשונה כדי לשמש יציאת אינהלציה (איור 1, #1).
  5. באמצעות צינורות ויניל, לחבר את הזרוע בצד של הבקבוק בוכנר יציאת קלט של הרגולטור זרימת האוויר (איור 1, #7) ואת היציאה של הרגולטורים זרימת אוויר משאבת ואקום.
  6. להרכיב את המעגל לפי איור2 א.
  7. להעלות את התוכנית PBASIC SVL.bs1 (איור 2B, זמין גם ב- https://github.com/ChastainAnderson/SVL) מיקרו-בקר BS1 (איור 1, #6) באמצעות מתאם טורי והתוכנה של היצרן.
  8. המקום 510 הליכי הבסיס (איור 1 #8) טבעת לעמוד קלאמפ.
  9. באמצעות צינורות ויניל, לחבר את ברז חשמלי (איור 1, #5) עד הסוף חינם של המחבר צינור לצומת t.
    הערה: המכשיר אמור להיות הושלמה והיא מוכנה לפעולה, לבדוק את כל המפרקים כדי לוודא כי הם אוויר חזק, להחיל hose מלחציים ושומנים ואקום לפי הצורך.

figure-protocol-1662
איור 2: חשמל מפרטים טכניים וקוד PBASIC. איור 2A מציג את הסכמה חשמל להרכבת המעגל החשמלי הדרושים להפעיל את שניהם פתוחים בדרך כלל ברז חשמלי את ומופעל סליל חימום כפתור סיגריות אלקטרוניות (דרך 510 משורשרות אלקטרונית סיגריות מיכל הבסיס). הפרמטרים חשמל סליל חימום (p: כוח; R: התנגדות; ו i: הנוכחי) מוקרנים ואני צריך לאמת מדעית עם אסיפה פוסט multimeter. איור 2B מציג PBASIC תזמון התוכנית הדרושה כדי לשלוט המעגל ב 2A איור (זמין גם ב- https://github.com/ChastainAnderson/SVL). הקבועים תזמון SVT & טכנולוגייה (מס ' 5 & #6) ביחידות של ms, מוגדרים לספק מועד ההפעלה של 2 שניות של זמן ההשבתה של 28 ס' אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

2. לטעום אחסון והכנה

  1. לאחסן כל סיגריה אלקטרונית קונבנציונאלי נפתחה דוגמאות בחושך בשקיות פלסטיק אטום בטמפרטורת החדר.
  2. לאחר שנפתח, אחסן דגימות בשקיות פלסטיק אטום-ºC 4, עם מגבת נייר סופג לחות עודפת.
  3. מראש equilibrate כל דוגמאות ב תיבת הלחות טמפרטורת החדר-~ 60% לחות לפחות 30 דקות לפני השימוש.

3. כללי הפעולה של סיגריה סיגריה אלקטרונית/עשן תרסיס החילוץ התקן

  1. לקבוע את המסה של כל סיגריה אלקטרוני cartomizer/מיכל pre-vaping באמצעות איזון האנליטי. ההבדל במשקל vaping קדם/פוסט פוסט ישמש לקביעת המינון המתאים.
    הערה: סיגריות הפניה 3R4F היא כי מכילים 0.7 מ ג ניקוטין, התוכן ניקוטין של מותגים מסחריים סיגריות יכול להיקבע על ידי שיטות אנליטיות קונבנציונאלי13.
  2. עבור יישום דוגמה 1, למלא המאגר של impinger ראשי מ 4.3 ל תא אנדותל תרבות בינוני. עבור יישום דוגמה 2, למלא המאגר 5 מ של אצטון.
  3. . תכינו את סיגריה אלקטרונית או סיגריה קונבנציונליים עבור החילוץ:
    1. אם משתמש סיגריה קונבנציונאלי, להחיל נייר-דבק ברורה סביב המסנן ולשים סימן גלויים בקלות איפה הנייר סיגריה מצטרף המסנן.
    2. אם משתמש סיגריה כמו סיגריה אלקטרוני, ודא שהסוללה טעונה היטב cartomizer דפק בחוזקה אל הסוללה.
    3. אם משתמש טנק סיגריה אלקטרונית, ודא כי אמצעי אחסון המתאים של סיגריה אלקטרונית נוזל נטען במיכל ולהתעסק למיכל על גבי הבסיס משורשרות 510.
  4. הוסף את קצה הסיגריה רגיל או אלקטרוני ליציאת אינהלציה (איור 1, #1) ולאבטח עם מהדק צינור.
  5. הפעל את משאבת ואקום.
  6. התאם את מד זרימה למשוך 1.65 L לדקה כדי להבטיח שאיפה 55 mL במשך 2 שניות.
  7. הפעל את מיקרו-בקר. אם משתמש סיגריה קונבנציונאלי, להדליק את הסיגריה על והגראס הראשון.
  8. ריצה עד מוקרן הרצוי ריכוז (בחלקים לכל מיליון או % משקל/נפח) מושגת.
  9. לקבוע את המסה של cartomizer/טנק אחד סיגריה אלקטרוני לאחר אידוי באמצעות איזון האנליטי. להשוות בין מדידה זו למדידה נלקח בשלב 3.1 כדי לקבוע את הסכום מסה נצרך. חשב את ריכוז המסה נצרך/הנפח של הממס. השתמש את ריכוז מולרי של ניקוטין נצרך כדי לנרמל בין מוצרים.
    1. אם מסה לא מספיקות היה נצרך, להחזיר את הסיגריה האלקטרונית על המכשיר, צורכים יותר.
    2. אם מסה מספיקה או עודף היה נצרך, המשך.

4. סינון ואחסון

  1. אם תמצית שישמש עבור תרבית תאים, לסנן דרך מסנן מזרק של PES 0.22 מיקרומטר.
  2. השתמש תמציות מיד או לאחסן ב-80 ºC. במסגרת ההכנה אנדרסון, et al. 8, סיגריה אלקטרונית תרסיס הודגם להיות יציבה במשך לפחות שבועיים, היציבות של סיגריות עד שתי שנים הוקם על ידי נוכלים, et al. 13.

5. ניקוי המכשיר

  1. לאחר כל החילוץ, לשטוף את הצנרת, מאגרים של המכשיר עם אתנול 70% מים יונים כדי למנוע לשאת מעבר בין דגימות.
  2. לאחר השטיפה, בקצרה להפעיל את המכשיר ריק כדי לאפשר זרימת אוויר לסייע הייבוש של הקווים.

6. דוגמה ליישום 1: ספיגת אדום ניטרלי תא הכדאיות Assay

  1. מבצע החילוץ לעיל לתוך מ 4.3 ל תא אנדותל הצמיחה בינונית.
  2. יום אחד מראש, זרע תאי אנדותל יפתור לוחות טוב 96-צפיפות של עונה 1 פרק 104 תאים וולין µL 100 של תאי אנדותל הצמיחה בינונית.
  3. מתייחסים לתאים על-ידי החלפת המדיום הישן של התרבות תאי אנדותל או µL 100 תאי אנדותל טרי בינוני תרבות לשמש פקד או µL 75 של מדיום הגידול תא אנדותל מעורבב עם 25 µL של תמצית ריכוז הניקוטין 2 מ מ נצרך (1.4 מ ג לצרוך ניקוטין לתוך מ 4.3 ל תא אנדותל הצמיחה בינונית) עבור ריכוז סופי של מיקרומטר 500 כדי לשמש לטיפול.
  4. כמו רבים מן המרכיבים של תרסיס הסיגריות עשן ואלקטרוניקה שתי סיגריות הם נדיפים, השתמש גושפנקה רדיד כדי לשמור את הבארות אטום.
  5. דגירה לוח 18 – 24 h-CO 37 ° C ו-5%2.
  6. הכן אדום ניטרלי מכתים פתרון:
    1. ליצור 100 x נייטרלי אדום מניות פתרון על ידי המסת 33 מ ג של צבע אדום ניטרלי לתוך 10 מ"ל של תמיסת מלח במאגר.
    2. זמן קצר לפני השימוש, לדלל 100 x פתרון המניה בטחונות במדיום התרבות תאים ליצירת 1 x אדום ניטרלי מכתים פתרון.
    3. דגירה אדום ניטרלי מכתים פתרון ב 37 מעלות צלזיוס במשך לפחות 30 דקות לפני השימוש, לשימוש מיידי.
      הערה: זה נורמלי עבור גבישים מסוימים לזרז בתקופת הדגירה. צריך לקחת כדי למנוע החלה גבישים אלו על הבארות התרבות תאים. אם יש צורך, מסנן מיקרומטר.22 ניתן להשתמש כדי לסנן את המניות אדום ניטרלי והפתרונות מכתימים.
  7. להסיר את תמצית ולהוסיף 100 µL של אדום ניטרלי מכתים פתרון לכל טוב, שימוש עודף כדי ליצור לפחות משלוש בארות ריק על כימות נאותה.
  8. דגירה לצלחת-2 – 4 h-CO 37 ° C ו-5%2.
  9. הסר אדום ניטרלי מכתים פתרון ולשטוף 3 x על ידי ועלייתו PBS.
  10. החלת אדום ניטרלי מבטל את כתם פתרון (יונים 50% מים, 49% אתנול, 1% חומצת חומץ).
  11. דגירה לפחות 10 דקות בטמפרטורת החדר ברעידות.
  12. לקרוא את ספיגת-540 nm.
  13. ניתוח נתונים על-ידי חיסור את הערך הממוצע של הבארות ריק, נורמליזציה לממוצע של הערך טוב שליטה מנוכי ריקה.

7. לדוגמה יישום 2: גז כרומטוגרפיה ספקטרומטר מסה

  1. מבצע חילוץ כמו מעל ל 5 מ של אצטון.
  2. הפעל את ההתקן כדי להשיג ריכוז סופי של חלקים ~ 100 מיליון (משקל נוזל נצרך/נפח של אצטון) הדוגמית שלכם.
  3. באמצעות מזרק זכוכית דיוק, להזריק 1 µL לתוך מזרק מכשיר GC-MS. להזריק ב 250 מעלות צלזיוס עם 1:20 לפצל יחס ספקטרומטר שמוצאים בשילוב/פאול למערך עם עמודה צ-5 עם פרוטוקול תנור הבאים: 1 דקות ב 50 מעלות צלזיוס; כבש 10 ° C/דקה עד 140 ° C; כבש 20 ° C/דקה עד 300 ° C והחזק למשך 10 דקות.
  4. התאמה וכתוצאה מכך המוני ספקטרה לספריית היעד כדי לזהות רכיבים תרסיס.

תוצאות

תוך 24 שעות מרגע החשיפה של יפתור תאי אנדותל תמצית סיגריות קונבנציונאלי (ס) או תרסיס סיגריה אלקטרונית לחלץ (EAE), שם הוא משמעותי (שליטה לעומת של ביה ס P < 0.001; שליטה לעומת EAE P < 0.01; n = 6) צמצום תא הכדאיות (איור 3 א). תמציות נוצרו עם פרופיל והמתנשף של 2, 2 שניות, פ...

Discussion

האלמנטים הקריטיים ביותר של פרוטוקול זה הם הבטחת שהמכשיר הוא נקי בתחילת וסיום כל החילוץ, ולהבטיח כי כל החותמות נשמרים כל כך את זרימת האוויר נשאר עקבי. אם ההתקן לא נוקה כראוי, יש סיכון של נושאים בין הדגימות. בנוסף, אם המכשיר הוא נשאר מלוכלך לתקופה ממושכת של זמן דחוס תרסיס יבש הממס יכולה לחסום ?...

Disclosures

תכנית העמיתים מחקר מדעי רגולטוריות מוצר טבק מנוהל על ידי תטיסרבינואב ממומן על ידי הלקוח Altria שירותי רגולציה.

Acknowledgements

המחברים להכיר את הסיוע של ד ר רוברט דוטסון של המחלקה באוניברסיטת טולאן של התא, ביולוגיה מולקולרית על סיועו בעריכת כתב היד, ד ר ג'יימס בולינג'ר של טולאן אוניברסיטת המחלקה לכימיה על עזרתו עם עיצוב פרוטוקול ספקטרומטר מסה. המחברים נוספת להכיר החוג באוניברסיטת טולאן של התא, ביולוגיה מולקולרית ו טולאן באוניברסיטה במחלקה לכימיה על תמיכתם ועל השימוש של שטח וציוד. עבודה זו נתמכה על ידי טבק המוצר רגולטוריות מדע מחקר לאגודה כדי ג אנדרסון מ הספר טולאן האוניברסיטה למדעים והנדסה.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
12 V AC/DC Wall Mount AdaptorDigi-KeyT1099-P5P-ND
2.2 Ohm ResistorsDigi-KeyA105635-NDUsed in tandem to generate the 4.4 Ohm resistance in Figure 2A
330 Ohm ResistorsDigi-Key330QBK-ND
510 Threaded BaseNJoyN/ARecovered by dismantalling a second generation NJoy electronic cigarette
Acetic Acid, GlacialSigma-AldritchA6283
Acetone (Chromatography Grade)Sigma-Aldritch34850
Basic Stamp Project BoardDigi-Key27112-NDThis board contains the BS1 Microcontroller, serial adaptor, power switch, and a barrel pin connector for the AC/DC Wall Mount Adaptor
Basic Stamp USB to Serial AdapterDigi-Key28030-NDAn optional component to allow the BS1 serial adaptor to communicate through USB
Buchner Flask (Vacuum Flask) 250 mLVWR10545-854
Clear Tape3MS-9783
Clear Vinyl Tubing, 3/8" IDWatts443064
EGM-2 Endothelial Cell Culture MediumLonzaCC-3162
EthanolPharmco-Aaper111000200
Flow RegulatorDwyerVFA-23-BV
Gas ChromatographVarian450-GC
Glass Syringe, 10 mLSigma-AldritchZ314552
Glass Syringe, 10 µLHamilton80300
High Vacuum Silicon GreaseDow Corning146355D
Hose ClampPrecision Brand35125
Human Umbilical Vein Endothelial CellsATCCPCS-100-013 
Mass SpectrometerVarian300-MS
Midget ImpingerChemglassCG-1820-01
Neutral RedSigma-AldritchN4638
Paraffin Film3MPM-992
Plate Seal RollerBioRadMSR0001
Plate Seal; FoilThermo276014
Ring Stand 20"American Educational Products7-G15-A
Solenoid Valve (normally open)US SolidUSS2-00081
Solid State RelayDigi-KeyCLA279-ND
Stand ClampEiscoCH0688
Syringe Filter, PES, 0.22 umMilliporeSLGP033RS
Syringe, 10 mLBD Syringe309604
Through Hole Stopper, Size 6VWR59581-287
Vacuum PumpKNF NeubergerN86KTP

References

  1. World Health Organization. . WHO Report on the Global Tobacco Epidemic, 2011. , (2011).
  2. Weaver, S. R., Majeed, B. A., Pechacek, T. F., Nyman, A. L., Gregory, K. R., Eriksen, M. P. Use of electronic nicotine delivery systems and other tobacco products among USA adults, 2014: results from a national survey. Int. J. Public Health. 61 (2), 177-188 (2016).
  3. Singh, T., et al. Tobacco Use Among Middle and High School Students - United States, 2011–2015. MMWR Morb. Mortal. Wkly. Rep. 65 (14), 361-367 (2016).
  4. Corey, C. G., Ambrose, B. K., Apelberg, B. J., King, B. A. Flavored Tobacco Product Use Among Middle and High School Students--United States, 2014. MMWR Morb. Mortal. Wkly. Rep. 64 (38), 1066-1070 (2015).
  5. Pisinger, C., Døssing, M. A systematic review of health effects of electronic cigarettes. Prev. Med. 69, 248-260 (2014).
  6. Callahan-Lyon, P. Electronic cigarettes: human health effects. Tob. Control. 23 (Suppl 2), ii36-ii40 (2014).
  7. Dinakar, C., O'Connor, G. T. The Health Effects of Electronic Cigarettes. N. Engl. J. Med. 375 (14), 1372-1381 (2016).
  8. Anderson, C., Majeste, A., Hanus, J., Wang, S. E-cigarette aerosol exposure induces reactive oxygen species, DNA damage, and cell death in vascular endothelial cells. Toxicol. Sci. Off. J. Soc. Toxicol. , (2016).
  9. U.S. Department of Health and Human Services. . The Health Consequences of Smoking: 50 Years of Progress. A Report of the Surgeon General. , (2014).
  10. Farsalinos, K., et al. Comparison of the Cytotoxic Potential of Cigarette Smoke and Electronic Cigarette Vapour Extract on Cultured Myocardial Cells. Int. J. Environ. Res. Public. Health. 10 (10), 5146-5162 (2013).
  11. Schweitzer, K. S., et al. Endothelial disruptive proinflammatory effects of nicotine and e-cigarette vapor exposures. Am. J. Physiol. - Lung Cell. Mol. Physiol. 309 (2), L175-L187 (2015).
  12. Putzhammer, R., et al. Vapours of US and EU Market Leader Electronic Cigarette Brands and Liquids Are Cytotoxic for Human Vascular Endothelial Cells. PLOS ONE. 11 (6), e0157337 (2016).
  13. Crooks, I., Dillon, D. M., Scott, J. K., Ballantyne, M., Meredith, C. The effect of long term storage on tobacco smoke particulate matter in in vitro genotoxicity and cytotoxicity assays. Regul. Toxicol. Pharmacol. 65 (2), 196-200 (2013).
  14. Roemer, E., et al. Mainstream Smoke Chemistry and in Vitro and In Vivo Toxicity of the Reference Cigarettes 3R4F and 2R4F. Beitr. Zur Tab. Contrib. Tob. Res. 25 (1), (2014).
  15. International Organization for Standards. . ISO 3088:2012 Routine analytical cigarette smoking machine – Definitions and standard conditions. , (2012).
  16. World Health Organization. . Standard Operating Procedure for Intense Smoking of Cigarettes. , (2012).
  17. Brown, C. J., Cheng, J. M. Electronic cigarettes: product characterisation and design considerations. Tob. Control. 23 (Suppl 2), ii4-ii10 (2014).
  18. Cooperation Centre for Scientific Research Relative to Tobacco. . CRM No. 81 - Routine Analytical Machine for E-Cigarette Aerosol Generation and Collection - Definitions and Standard Conditions. , (2015).
  19. Thorne, D., Adamson, J. A review of in vitro cigarette smoke exposure systems. Exp. Toxicol. Pathol. 65 (7-8), 1183-1193 (2013).
  20. Klus, H., Boenke-Nimphius, B., Müller, L. Cigarette Mainstream Smoke: The Evolution of Methods and Devices for Generation, Exposure and Collection. Beitr. Zur Tab. Contrib. Tob. Res. 27 (4), (2016).
  21. Baker, R. The Development and Significance of Standards for Smoking-Machine Methodology. Beitr. Zur Tab. Contrib. Tob. Res. 20 (1), (2014).
  22. Thorne, D., Crooks, I., Hollings, M., Seymour, A., Meredith, C., Gaca, M. The mutagenic assessment of an electronic-cigarette and reference cigarette smoke using the Ames assay in strains TA98 and TA100. Mutat. Res. Toxicol. Environ. Mutagen. 812, 29-38 (2016).
  23. Thorne, D., Larard, S., Baxter, A., Meredith, C., Gaҫa, M. The comparative in vitro assessment of e-cigarette and cigarette smoke aerosols using the γH2AX assay and applied dose measurements. Toxicol. Lett. 265, 170-178 (2017).
  24. Herrington, J. S., Myers, C. Electronic cigarette solutions and resultant aerosol profiles. J. Chromatogr. A. 1418, 192-199 (2015).
  25. Yu, V., et al. Electronic cigarettes induce DNA strand breaks and cell death independently of nicotine in cell lines. Oral Oncol. 52, 58-65 (2016).
  26. Ji, E. H., et al. Characterization of Electronic Cigarette Aerosol and Its Induction of Oxidative Stress Response in Oral Keratinocytes. PLOS ONE. 11 (5), e0154447 (2016).
  27. Morgan, D. L., et al. Chemical Reactivity and Respiratory Toxicity of the -Diketone Flavoring Agents: 2,3-Butanedione, 2,3-Pentanedione, and 2,3-Hexanedione. Toxicol. Pathol. 44 (5), 763-783 (2016).
  28. Cooperation Centre for Scientific Research Relative to Tobacco. . CRM No. 84 - Determination of Glycerin, Propylene Glycol, Water, and Nicotine in the Aerosol of E-Cigarettes by Gas Chromatographic Analysis. , (2017).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

131Vaping

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved