A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
אנו מתארים שיטה לאיסוף המולימפה הניתנת לכימות ביעילות מפרוקי רגליים קטנים לצורך ניתוח לאחר מכן.
פרוקי רגליים ידועים כמעבירים מגוון וירוסים בעלי חשיבות רפואית וחקלאית דרך ההמולימפה שלהם, החיונית להעברת הנגיף. אוסף Hemolymph הוא הטכנולוגיה הבסיסית לחקר אינטראקציות וירוס-וקטור. כאן, אנו מתארים שיטה חדשנית ופשוטה לאיסוף כמותי של המולימפה מפרוקי רגליים קטנים באמצעות Laodelphax striatellus (הפלנטהופר החום הקטן, SBPH) כמודל מחקר, שכן פרוק רגליים זה הוא הווקטור העיקרי של וירוס פס האורז (RSV). בפרוטוקול זה, התהליך מתחיל בצביטה עדינה של רגל אחת של פרוק הרגליים הקפוא בפינצטה עדינה ולחיצה על ההמולימפה מתוך הפצע. לאחר מכן, micropipette פשוט המורכב נימים נורה פיפטה משמש לאסוף את hemolymph transudative מן הפצע על פי העיקרון של כוחות נימים. לבסוף, ניתן להמיס את ההמולימפה שנאספה לתוך חיץ ספציפי למחקר נוסף. שיטה חדשה זו לאיסוף המולימפה מפרוקי רגליים קטנים היא כלי שימושי ויעיל למחקר נוסף על ארבו-וירוסים ואינטראקציות וקטור-וירוס.
וירוסים הן של בעלי חיים והן של צמחים יכולים להיות מועברים על ידי פרוקי רגליים, ונגיפים אלה מהווים איום חמור על בריאות האדם וגורמים להפסדים כלכליים עצומים בחקלאות 1,2,3. חשוב לציין כי המולימפה של פרוקי הרגליים, המשמשת כמערכת הדם וכמרכיב חיוני של מערכת החיסון בפרוקי רגליים, ממלאת תפקיד חשוב בוויסות ההעברה הארבו-ויראלית. וירוסים הנרכשים דרך מעי פרוקי הרגליים מועברים לרקמות אחרות רק לאחר בריחה מוצלחת מסביבת המולימפה השלילית 4,5,6,7. מחזור החיים של וירוס....
1. גידול חרקים
2. נתיחת SBPHs לאוסף המולימפה
דגם מיקרופיפטה וקולקציית המולימפה
פיתחנו מיקרופיפטה פשוטה שפעולתה מבוססת על הכוחות הקפילריים של צינור הנימים. המיקרופיפטה מורכבת מצינור נימי ומנורת פיפטה (איור 1A). צינורות נימים זמינים בגדלי נפח שונים הנעים בין 1 μL ל 20 μL, ונפחי הצינור הנימי נבחרים בהתאם לדרישו?.......
המולימפה הוא המדיום של מערכת הדם בפרוקי רגליים, וארבו-וירוסים יכולים לפלוש לרקמות פרוקי רגליים אחרות רק אם הם מסוגלים לשרוד את סביבת ההמולימפה העוינת. איסוף מדגם איכותי של המולימפה הוא הצעד הראשון בחקר אינטראקציות וקטור-וירוס המתרחשות בהמולימפה. דווח כי ניתן להשיג המולימפה של חרקים ממספ?.......
המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים.
עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית המו"פ הלאומית של סין (מס '2022YFD1401700) ועל ידי הקרן הלאומית למדע של סין (מס '32090013 ומס '32072385).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
10% SDS-PAGE protein gel | Bio-rad | 4561035 | Protein separation and detection |
4% paraformaldehyde | Solarbio | P1110 | For fixation of the cells or tissues |
Bradford dye reagent | Bio-rad | 5000205 | Protein concentration detection |
Capillary | Hirschmann | 9000101 | For collecting hemolymph |
Cell counting chamber | ACMEC | AYA0810 | Hemocytes counting |
Glass slide | Gitoglas | 10127105A | For holding insects |
Glass slide coated with silane | Sigma | S4651-72EA | For holding microscope samples |
Gold antifade reagent with DAPI | Invitrogen | P36935 | Nucleus staining |
Microscope cover glass | Gitoglas | 10212424C | For microscopic observation |
Pipette bulb | Hirschmann | 9000101 | For collecting hemolymph |
Prism 8.0 software | GraphPad Software | / | Statistical analyses |
Stereomicroscope | Motic | SMZ-168 | For insect dissection |
Tweezers | Tianld | P5622 | For insect dissection |
Zeiss inverted microscope | Zeiss | Observer Z1 | Hemocytes observation |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved