Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Мы описываем метод эффективного сбора поддающейся количественной оценке гемолимфы у мелких членистоногих для последующего анализа.

Аннотация

Известно, что членистоногие передают через свою гемолимфу различные вирусы, имеющие медицинское и сельскохозяйственное значение, что необходимо для передачи вируса. Сбор гемолимфы является базовой технологией изучения вирусно-векторных взаимодействий. Здесь мы описываем новый и простой метод количественного сбора гемолимфы у мелких членистоногих с использованием Laodelphax striatellus (маленький коричневый кузнечик, SBPH) в качестве исследовательской модели, поскольку это членистоногое является основным переносчиком вируса рисовой полосы (RSV). В этом протоколе процесс начинается с осторожного отщипывания одной ноги замороженного членистоногого пинцетом с тонким наконечником и выдавливания гемолимфы из раны. Затем простая микропипетка, состоящая из капилляра и колбы пипетки, используется для забора транссудативной гемолимфы из раны по принципу капиллярных сил. Наконец, собранная гемолимфа может быть растворена в определенном буфере для дальнейшего изучения. Этот новый метод сбора гемолимфы у мелких членистоногих является полезным и эффективным инструментом для дальнейших исследований арбовирусов и векторно-вирусных взаимодействий.

Введение

Как животные, так и растительные вирусы могут передаваться членистоногими, и эти вирусы представляют серьезную угрозу для здоровья человека и наносят огромные экономические потери в сельском хозяйстве 1,2,3. Важно отметить, что членистоногая гемолимфа, которая служит кровеносной системой и жизненно важным элементом иммунной системы у членистоногих, играет важную роль в регуляции арбовирусной передачи. Вирусы, приобретенные через кишечник членистоногих, транспортируются в другие ткани только после успешного выхода из неблагоприятной среды гемолимфы 4,5,....

протокол

1. Выращивание насекомых

  1. Поднимите SBPH, используемые в этом эксперименте, на проростках риса (Oryza sativa cv. Nipponbare). Посадите 20 саженцев риса в инкубатор (65 мм x 200 мм) и выращивайте при температуре 25 °C при 16-часовом светлом / 8-часовом темном фотопериоде.

2. Вскрытие SBPH для забора гемолимфы

  1. Поместите SBPH в центрифужную пробирку и поместите их на ледяную баню на 10-30 минут.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не помещайте SBPH в ледяную ванну менее чем на 10 минут, иначе насекомые могут оживиться.
  2. Поместите замороженный SBPH на предметное стекло (см. Таблицу....

Результаты

Модель микропипетки и коллекция гемолимф
Мы разработали простую микропипетку, действие которой основано на капиллярных силах капиллярной трубки. Микропипетка состоит из капиллярной трубки и колбы пипетки (рис. 1А). Капиллярные трубки доступны в различных об?.......

Обсуждение

Гемолимфа является средой кровеносной системы у членистоногих, и арбовирусы могут проникать в другие ткани членистоногих только в том случае, если они способны выжить во враждебной среде гемолимфы. Сбор высококачественного образца гемолимфы является первым шагом в изучении векторно-.......

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальной ключевой программой исследований и разработок Китая (No 2022YFD1401700) и Национальным научным фондом Китая (No 32090013 и No 32072385).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
10% SDS-PAGE protein gelBio-rad4561035Protein separation and detection
4% paraformaldehydeSolarbioP1110For fixation of the cells or tissues 
Bradford dye reagentBio-rad5000205Protein concentration detection
CapillaryHirschmann9000101For collecting hemolymph
Cell counting chamberACMECAYA0810Hemocytes counting
Glass slideGitoglas10127105AFor holding insects
Glass slide coated with silaneSigmaS4651-72EAFor holding microscope samples
Gold antifade reagent with DAPIInvitrogenP36935Nucleus staining
Microscope cover glassGitoglas10212424CFor microscopic observation
Pipette bulbHirschmann9000101For collecting hemolymph
Prism 8.0 softwareGraphPad Software/Statistical analyses
Stereomicroscope MoticSMZ-168For insect dissection
TweezersTianldP5622For insect dissection
Zeiss inverted microscopeZeissObserver Z1Hemocytes observation

Ссылки

  1. Hogenhout, S. A., Ammar el, D., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G. Insect vector interactions with persistently transmitted viruses. Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).
  2. Ray, S., Casteel, C. L. Effector-mediated plant-vir....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

194

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены