JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מוצגת כאן הבשלת ביצית רקמת שחלה (OTO-IVM), טכניקה נגישה במעבדת רבייה בסיוע רפואי (MAR) המציעה אפשרויות מציאותיות נוספות לשימור פוריות למטופלות הזקוקות לשימור רקמת שחלה.

Abstract

ויטריפיקציה של ביציות בוגרות היא סטנדרט הטיפול לשימור פוריות אצל נשים בסיכון לאי פוריות. עם זאת, שימור רקמת שחלה בהקפאה (OTC) הוא עדיין האפשרות היחידה לשימור פוריות אצל נשים שצריכות להתחיל טיפול גונדוטוקסי בדחיפות או בילדים לפני גיל ההתבגרות. במהלך הכנת קליפת השחלה לשימור בהקפאה, מסירים רקמה מדולרית. זקיקים אנטרליים גדלים שוכנים בגבול הממשק של קליפת המוח-מדולר של השחלה ונשברים במהלך תהליך זה, ומשחררים את קומפלקס הקומולוס-ביצית שלהם (COC). על ידי בדיקה יסודית של הרקמה המדולרית הבינונית והמקוטעת, ניתן לזהות קומפלקסים לא בשלים אלה של קומולוס-ביציות מבלי להפריע להליך ה-OTC. הביציות הלא בשלות שמקורן ברקמת השחלה יכולות להבשיל בהצלחה במבחנה, וליצור מקור נוסף לגמטות לשימור פוריות. אם OTC מבוצע בתוך או ליד מעבדת רבייה בסיוע רפואי, כל הכלים הדרושים להבשלה חוץ גופית (IVM) וכלי ויטריפיקציה של ביציות יכולים להיות בהישג יד. יתר על כן, עם הפוגה ורצון הילד, עומדות בפני המטופלת אפשרויות מרובות לשיקום פוריות: השתלת רקמת שחלה או העברת עוברים לאחר הזרעת ביציות מזוגגות/מחוממות. לפיכך, התבגרות ביצית ברקמת השחלה (OTO-IVM) יכולה להיות טכניקה נלווית לשימור פוריות נלווית.

Introduction

אפשרויות שימור פוריות (FP) לנשים המתוכננות לטיפול גונדוטוקסי, טיפול לשינוי מין, או לנשים שיש להן נטייה גנטית לאי ספיקת שחלות מוקדמת, תלויות בבריאות ובגיל המטופלת, מסגרת הזמן הזמינה, סוג הטיפול, העדפת המטופלת ונהלי FP הזמינים במרכז הפוריות הנבחר. ויטריפיקציה של ביציות בוגרות המתקבלות לאחר גירוי שחלתי עם גונדוטרופינים ושאיבת ביציות במחזור מעבדה של רבייה בסיוע רפואי (MAR) נחשבת לאופציה המועדפת עבור FP 1,2. עם זאת, עבור נערות לפני גיל ההתבגרות, נשים שבהן נדרשת התחלה דחופה של טיפול גונדוטוקסי או כריתת גונדקטומיה, או נשים עם סיכון גבוה לאמנוריאה קבועה עקב טיפול גונדוטוקסי, מחזור של גירוי שחלתי עם גונדוטרופינים אינו אפשרי, ושימור רקמת שחלה בהקפאה (OTC), שהיא טכניקה מקובלת ותקפה עבור FP 1,2, 3, היא האפשרות היחידה. מטרת OTC היא לשמר בהקפאה אלפי זקיקים קדמוניים רדומים ברקמת קליפת השחלה, שיכולים לחדש את הצמיחה לאחר השתלת רקמה קפואה/מופשרת על השחלה הנותרת או בכיס הצפק לאחר סינון קפוא של מחלה שיורית מינימלית בשברי רקמה מייצגים.

על מנת להשיג שברים קליפת המוח בעובי 1-2 מ"מ המתאימים לשימור בהקפאה, יש להסיר את הרקמה המדולרית הרכה. רקמה מדולרית זו כרוכה בדרך כלל בגידול זקיקים בשלבי התפתחות שונים הנמלטים מקליפת השחלה הנוקשה כדי לאפשר את צמיחתם והתרחבותם4. במשך שנים רבות, מספר מעבדות חקרו את הפוטנציאל של ביציות אלה ששוחזרו מזקיקים השוכנים ברקמה המדולרית שנותרה לאחר הכנת שבר קליפת המוח השחלתי באמצעות התבגרות חוץ גופית (IVM)5,6,7, המכונה ביצית רקמת שחלה IVM (OTO-IVM). זקיקים אנטרליים, אפילו אלה שקוטרם פחות מ-6 מ"מ, מכילים ביציות לא בשלות המוקפות בתאי קומולוס שיכולים להתבגר, להפרות ולהתפתח לתינוקות בריאים באמצעות מערכת IVM 8,9. IVM נחשב לסטנדרט הטיפול לנשים בסיכון לתסמונת גירוי יתר שחלתי (OHSS), כגון חולות תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS). עם זאת, בתחום FP, ישנם נתונים מוגבלים זמינים עבור IVM במקרים עם התווית נגד לגירוי שחלתי; IVM של ביציות שנאספו דרך הנרתיק עדיין נחשב לחדשני, ו-OTO-IVM נחשב לניסיוני 2,10. עם זאת, הדיווחים על לידות החי הראשונות לאחר OTO-IVM11,12,13 מדגישים את הפוטנציאל של שימוש ב-OTO-IVM כטכניקה נוספת כאשר OTC נדרש ל-FP במטופלות14.

מחקר זה מספק פרטים טכניים לאימוץ OTO-IVM במעבדת MAR וממחיש את התוצאות שהתקבלו במרכז יחיד.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

המחקר הנוכחי על OTO-IVM אושר על ידי הוועדה האתית המקומית של UZ-Brussels (נספח לפרויקט 2008/068 ופרויקט 2022/303). כל המטופלים חתמו על הסכמה מדעת בכתב. כל מטופלת הוערכה באופן פרטני על ידי רופא מומחה לרפואת פוריות, אחות נווטת והאונקולוג המפנה כדי להרכיב את תוכנית הטיפול האופטימלית ב-FP, תוך התחשבות בהעדפות המטופל14. בקיצור, חולים הזכאים ל-OTC זקוקים בדחיפות ל-FP והם מתחת לגיל36 ו-14. כדי לשלב OTC עם OTO-IVM, לא ניתן היה לתת כימותרפיה או הקרנות בששת החודשים שקדמו ל-OTC.

1. סביבת מעבדה וכוח אדם

  1. בצע OTC בארון זרימה למינרי Class A.
  2. בצע OTC עם שני מפעילים: אחד עובד באופן אספטי בארון הזרימה הלמינלי, והשני מנקה את כל החומרים הלא סטריליים עם תרסיס מטהר קוטל חיידקים וקוטלי נבגים ומסירת חומרים ואספקה באופן אספטי למפעיל הראשון. מעבדים את קליפת השחלה על מכסה קירור ספסל (± 4 מעלות צלזיוס).
  3. בצע את חיפוש קומפלקס הביצית (COC) בארון זרימה למינרי שני עם סטריאומיקרוסקופ במעבדת MAR על במה מחוממת (37 מעלות צלזיוס).
  4. בצע אחזור של ה-COC משאריות המדולריות (סעיפים 3 ו-4) והתחל את תהליך ה-IVM (סעיף 5). זה נעשה על ידי מפעיל שלישי.

2. הכנת מדיה

הערה: חמישה סוגי מדיה משמשים להליך זה (מפורט להלן): מדיום טיפול ללא מרשם, מדיום הקפאה ללא מרשם, מדיום חיפוש, מדיום LAG ומדיום IVM. בעת הכנת מדיה, עבדו בצורה אספטית בארון הזרימה, כמפורט בסעיף 1. השתמש בריאגנטים חדשים שלא נפתחו לכל הליך ושמור על הסטריליות של כל החומרים החד פעמיים המשמשים לבירור הסטריליות של המדיה המיוצרת.

  1. מדיום טיפול ללא מרשם
    1. הוסיפו את מדיום L15 של לייבוביץ עם 4 מ"ג/מ"ל אלבומין בסרום אנושי (HSA), 100 U/mL פניצילין ו-100 מיקרוגרם/מ"ל סטרפטומיצין (ראו טבלת חומרים).
    2. שמור את אמצעי הטיפול ללא מרשם בקירור עד לשימוש (למשך יומיים לכל היותר).
      הערה: השתמש במדיום טיפול ללא מרשם כדי לשטוף ולעבד את רקמת השחלה ולהשתמש בה קרה (0-4 מעלות צלזיוס).
  2. מדיום הקפאה ללא מרשם
    1. תוסף את מדיום L15 של לייבוביץ עם 1.5 M דימתיל סולפוקסיד (DMSO) ו-4 מ"ג/מ"ל HSA.
    2. שמור את אמצעי ההקפאה ללא מרשם בקירור עד לשימוש (למשך יומיים לכל היותר).
  3. מדיום חיפוש
    הערה: מדיום החיפוש (מדיום חוצץ HEPES לטיפול בביציות) זמין מסחרית (ראה טבלת חומרים) ומוכן לשימוש. השתמש במדיום החיפוש כדי לשטוף את המסנן ולאסוף את ה-COC תוך חיפוש אחר COCs בין שברי המדולה (סעיף 4).
    1. מלאו שישה צינורות סטריליים עגולים של 14 מ"ל עם 6 מ"ל של מדיום חיפוש.
    2. מכינים צלחת של 4 בארות עם 500 מיקרוליטר מדיום חיפוש מכוסה ב-350 מיקרוליטר שמן (ראה טבלת חומרים).
    3. מחממים את הצינורות ואת צלחת 4 הבארות בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת לפחות לפני הגעת רקמת השחלה. מדיה עם חוצץ HEPES אינה דורשת דגירה של CO2 .
  4. בינוני LAG
    הערה: מערכת ה-IVM הזמינה מסחרית (ראה טבלת חומרים) מורכבת משני מדיות שונות: מדיום LAG ומדיום IVM, שיש להשלים כמפורט להלן. מדיום LAG משמש לשטיפת ה-COCs, אך ניתן להשתמש בו גם לתקופת דגירה של 2-3 שעות לפני IVM במדיום IVM, כפי שמוצע על ידי הכנסת מערכת IVM.
    1. השתמש במדיום ה-LAG הזמין מסחרית ומוכן לשימוש (ראה טבלת חומרים).
  5. IVM בינוני
    1. תוסף מדיום IVM זמין מסחרית עם 10 מ"ג/מ"ל HSA, 75 mIU/mL הורמון מגרה זקיק (FSH) ו-100 mIU/mL גונדוטרופין כוריוני אנושי (hCG).
    2. הכינו צלחת תרבית בת 4 בארות עם באר אחת של מדיום LAG ושלוש בארות של מדיום IVM משלים: 500 מיקרוליטר של מדיום מכוסה ב-350 מיקרוליטר של כיסוי שמן.
    3. אזנו את המנה למשך הלילה בחממה ב-37 מעלות צלזיוס ב-6% CO2 ו-20% O2, הסביבה האופטימלית לתרבית IVM.

3. הכנת קליפת השחלה

הערה: הסרת שחלות שלמות לפרוסקופית בוצעה כמתואר על ידי Jadoul et al.15.

  1. עם הגעת השחלה למעבדה, שטפו את השחלה במדיום הטיפול ללא מרשם (שלב 2.1) פעמיים על ידי העברת השחלה לצלחת פטרי 100 מ"מ עם מדיום הטיפול ללא מרשם.
  2. בעזרת אזמל, חותכים את השחלה לשניים לאורך (איור 1A).
  3. בצע מספר חתכים ברקמה המדולרית הן אנכית והן אופקית בעזרת אזמל טרי. הימנע מפגיעה בקליפת המוח. חורר בעדינות את הזקיקים האנטרליים המוצקים בגדלים שונים בתוך המדולה עם האזמל כדי לשחרר את הנוזל הזקיקי במדיום הטיפול ללא מרשם.
  4. צמצמו את רקמת המדולה הרכה בעזרת מספריים כירורגיים (איור 1B). הליך זה עשוי להימשך מספר דקות.
  5. הכניסו את קליפת השחלה לכלי חדש עם מדיום טיפול OTC טרי במהלך תהליך החיתוך.
  6. העבירו את המנה עם שברי מדולר ושחררו נוזל זקיקי (איור 1C) לארון הזרימה השני כדי להתחיל בחיפוש אחר COCs.
  7. חזור על שלבים 3.4 עד 3.6 עד לקבלת העובי הרצוי (1-2 מ"מ) של רקמת קליפת המוח.
  8. פורסים את קליפת המוח לחתיכות בגודל של כ -8 מ"מ על 5 מ"מ.
  9. דגרו את החתיכות 3 פעמים ברציפות במשך 10 דקות בכ-25 מ"ל של מדיום הקפאה ללא מרשם (שלב 2.2) בצלחות פטרי 100 מ"מ.
  10. מניחים חתיכה אחת ב-800 מיקרוליטר של מדיום הקפאה OTC בקריוביאל.
  11. שימור הקפאה של רקמת השחלה באמצעות פרוטוקול הקפאה איטית בתא קריו הנשלט על ידי בקר טמפרטורה (ראה טבלת חומרים): מ-4 מעלות צלזיוס עד -7 מעלות צלזיוס ב-2 מעלות צלזיוס לדקה, זריעה ידנית ב-7 מעלות צלזיוס, מ-7 מעלות צלזיוס עד -40 מעלות צלזיוס ב-0.3 מעלות צלזיוס לדקה, מ-40 מעלות צלזיוס עד -100 מעלות צלזיוס ב-10 מעלות צלזיוס לדקה, וב-100 מעלות צלזיוס טובלים את הקריוביאלים בחנקן נוזלי ומאחסנים אותם.

4. חפש COCs

  1. הכן את ארון הזרימה הלמינרי לחיפוש ה-COC.
    1. כלי תרבות חמים בגודל 60 מ"מ על הבמה המחוממת מתחת לסטריאומיקרוסקופ בארון הזרימה הלמינרית.
    2. שים את צינורות 14 מ"ל עם 6 מ"ל של מדיום חיפוש שחומם מראש (שלב 2.3.1) בבלוק מחומם, ואת המנה שחוממה מראש עם 4 בארות עם מדיום חיפוש על הבמה המחוממת מתחת למיקרוסקופ בארון הזרימה הלמינרית.
    3. הנח מסנן סטרילי (מסננת תאים, גודל רשת של 70 מיקרומטר; ראה טבלת חומרים) מלמטה למטה בצלחת תרבית.
    4. קח נימי זכוכית של 290-310 מיקרומטר לשימוש: אל תשתמש בנימים קטנים יותר מ-290-310 מיקרומטר, על מנת למנוע נזק לקישוריות תאי הביצית-קומולוס.
    5. ודא שקצות מסנן של 1 מ"ל ופיפט של 1 מ"ל זמינים.
  2. קח את המנה הראשונה עם שברים מדולריים מארון הזרימה הלמינרית OTC (4 מעלות צלזיוס) והניח את המנה על הבמה המחוממת (37 מעלות צלזיוס) בארון הזרימה הלמינרית של IVM בהקדם האפשרי.
    הערה: המנה הראשונה של שברי מדולר ונוזל זקיקי עלולה להיות מזוהמת בדם מזקיקי ביוץ מלאים בדם או מכלי הדם של השחלה עצמה. תאי דם אדומים מטשטשים ראייה ברורה ומסבכים את החיפוש אחר COCs. יש להסיר את המדיום המזוהם כדי לשטוף את כדוריות הדם האדומות (ראה שלב 4.3).
  3. הסר את זיהום תאי הדם על ידי ביצוע השלבים הבאים.
    1. פיפט 2 מ"ל של מדיום חיפוש מעל קרום המסנן (מסננת תאים של 70 מיקרומטר) כדי להרטיב את הממברנה ולהניח את הצלחת, שתפסה את המדיום, בצד על הבמה המחוממת.
    2. הפוך את המסנן הפוך והנח אותו עם הידית על שפת צלחת תרבות חדשה, ויוצר שיפוע עם תחתית המסנן.
    3. אסוף מדיום מזוהם בדם בין שברי מדולרה באמצעות קצה של 1 מ"ל ונשף אותו בעדינות על קרום המסנן (איור 1D) כדי ללכוד את ה-COCs הקיימים במדיום המזוהם.
    4. חזור על שלב 4.3.3 עד להסרת רוב המדיום המזוהם בדם.
    5. יוצקים מיד מדיום חיפוש טרי על השברים המדולריים כדי לשמור על ה-COC תלוי במדיום התרבות בכל עת.
    6. שטפו את קרום המסנן המשופע בעדינות עם 2 מ"ל של מדיום חיפוש כדי לשטוף את תאי הדם האדומים על קרום המסנן.
    7. מניחים את המסנן מלמטה למטה בכלי חדש ויוצקים 3-4 מ"ל של מדיום חיפוש לתוך המסנן כדי להוציא את ה-COC מקרום המסנן למדיום הממלא את המנה. הסר את המסנן. כדי להבטיח שקרום המסנן לא יתייבש (וכל COCs אפשריים שעדיין לא נפלטו ממנו), טבלו את המסנן מלמטה למטה בכלי הראשון, ששימש להרטבת המסנן בפעם הראשונה.
    8. בדוק מיד את המדיום שנפלט עבור COCs על ידי בדיקה ויזואלית תחת מיקרוסקופ סטריאו עם הגדלה של פי 10-50. חפש ביציות שקופות שקופות עם שפה של תאי קומולוס כהים וקומפקטיים מסביב (איור 1E). מערבבים את המדיום בכלי ובוחנים שוב את המדיום.
    9. שוטפים את המסנן פעם שנייה בכלי חדש ובודקים את המדיום שנפלט לאיתור COCs.
    10. בדוק את המדיום בצלחת בה טובל המסנן עבור שאר ה- COCs.
    11. העבירו COCs עם נימי זכוכית לצלחת 4 הבארות המכילה את מדיום החיפוש (איור 1E). שמור את הכלים על הבמה המחוממת בכל עת.
  4. חפש בין השברים המדולריים אחר COCs לאחר הוצאת תאי הדם המזהמים מהצלחת עם שברי מדולר וחידוש המנה במדיום חיפוש שקוף. השתמש בנימי הזכוכית כדי לנוע סביב השברים המדולריים ולסובב את המדיום בצלחת על מנת למצוא COCs. מפרקים שברי מדולר גדולים עם מחטי טוברקולין על מזרק של 1 מ"ל אם יש חשד לנוכחות ביצית.
  5. אוספים את כל ה-COC השלמים בצלחת 4 בארות עם מדיום חיפוש.
    הערה: בהליך OTC טיפוסי, רקמת קליפת המוח מצטמצמת מהמדולה באמצעות שלוש מנות רצופות של 100 מ"מ, כאשר מעטפת השחלה מועברת לכלי חדש עם מדיום טרי ושם השאריות מועברות לזרימת IVM לחיפוש COC. בדרך כלל, רק המנה הראשונה דורשת הסרת תאי דם; בכלים השני והשלישי נמצאים פחות שברים מדולריים, וחיפוש COC מתבצע ישירות בין השברים ובמדיום.

5. IVM של COCs

  1. שוטפים את ה- COC בבאר נקייה עם מדיום חיפוש.
  2. העבר את צלחת תרבית ה-IVM המאוזנת מראש (צלחת 4 הבארות המכילה באר אחת של מדיום LAG ושלוש בארות של מדיום IVM) מהאינקובטור לשלב המחומם בארון הזרימה של IVM.
  3. סמן את צלחת תרבית ה-IVM המכילה COCs עם מידע על המטופל.
  4. שטפו את ה-COCs במדיום LAG (2-3 שניות) והניחו אותם באחת משלוש הבארות עם מדיום IVM בתוסף. תרבית את ה-COCs בקבוצות של כ-10 COCs לבאר. השמיט ביציות עירומות - ביציות נטולות תאי קומולוס מחוברים - מהתרבית, מכיוון שידוע שיש להן פוטנציאל התפתחותי שנפגע קשות.
  5. מניחים את המנה בחממה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, 6% CO2 ו- 20% O2 למשך 30 שעות.

6. טיפול בביציות בוגרות

  1. הפשיט ביציות מתאי הקומולוס הסובבים אותן על ידי חשיפה קצרה ל-80 יחב"ל של היאלורונידאז (ראה טבלת חומרים) ופיפטינג מכני עדין לאחר 30 שעות של IVM.
  2. זיהוי ביציות בוגרות על ידי שחול הגוף הקוטבי הראשון.
  3. לזגג או להזריע את הביציות הבוגרות, בהתאם להעדפת המטופל.
    הערה: אם בדיקת ההבשלה לאחר 30 שעות של IVM נופלת מחוץ לשעות העבודה המקובלות, ניתן לקצר את משך ה-IVM ל-28 שעות או להאריך עד 42 שעות. אם מתקבלות רק כמה ביציות בוגרות לאחר 30 שעות, ניתן לתרבית ביציות לא בשלות בנוסף למשך הלילה בבאר ה-IVM המקורית, נטולת תאי קומולוס, ולהשתמש בהן למחרת בבוקר לזיגוג או הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI) כאשר הן בשלות.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

במהלך העשור האחרון, 98 מטופלות שעברו כריתת שחלות או ביופסיית שחלות ללא מרשם הוצעו גם OTO-IVM. התוצאות המוצגות כאן הן עדכון של התוכנית הקלינית כפי שפורסמה לפני 7,13. ביציות לא בשלות שהושגו במהלך עיבוד רקמת השחלה הבשילו במבחנה בעיקר במשך 30 שע?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

העדיפות של הליך FP היא תמיד לתפעל ולהקפיא את קליפת השחלה על פי פרוטוקול ההפעלה הסטנדרטי שתוקף במרפאה. החיסרון ב-FP הוא היעדר פרוטוקול סטנדרטי זמין בספרות שפורסמה לגבי OTC ו-OTO-IVM. קשה להעריך את היעילות והתוקף של הטכניקות וההתאמות מכיוון שיש פער זמן גדול בין הקפאה/ויטריפיקציה ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

למחברים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

Acknowledgements

עבודה זו נערכה במעבדת ההפריה החוץ גופית של בריסל IVF, אוניברסיטת זיקנהויס של VUB, בריסל. המחברים רוצים להודות לכל חברי צוות מעבדת ההפריה החוץ גופית בבריסל על כישוריהם הגבוהים, הדיוק והגמישות הדרושים להקמת יחידה לשימור פוריות במעבדת MAR.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1000 µL filter tipsEppendorf/VWR International613-6780COC search
Benchtop CoolerFisher Scientific15-350-54Benchtop Cooler lid is used to prepare the tissue, Benchtop Cooler tube holder to keep cryovials with freezing medium cooled
Corning Cell culture dish, non-treated, 100 mmCorning/VWR International430591Dish for ovarian tissue preparation
CryoSure-DMSOWAK Chemicals0482Cryoprotectant for ovarian tissue cryopreservation
CumulaseOrigio/CooperSurgical16125000Arecombinant human hyaluronidase enzyme for cumulus cell removal after IVM
Decontamination spray: SuproxMedipure LTDMP016Desinfectant solution for aseptic handling with bactericide and sporicide action
Disposable scalpelsSwann-Morton0511Ovarian tissue preparation
Falcon 14 mL Round Bottom Polystyrene Test Tube, with Snap Cap, SterileFalcon/VWR InternationalBDAA352057Medium container 
Falcon Cell strainer 70 µmFalcon/VWR International352350Filter for elimination of red blood cell contamination and COC search
Freeze control Ampoule Cryochamber and Temperature ControllerCryologicCL-8800i   CC60ASSlow freezing machine
FSH: Menopur 75 IUFerringBE197504Follicle Stimulating Hormone : Supplement for IVM medium
Handling pipette 290-310 µmVitrolife15538COC search: gentle transfer of COC without damaging oocyte-cumulus cell connectivity
hCG: Brevactid 5000 IEFerring5008001036Human Chorionic Gonadotropin : Supplement for IVM medium
High security tubeCryoBioSystem022252cryovial, heat-sealed for safe cryostorage
HSA-solutionVitrolife10064Human serum Albumin: supplement for IVM medium
Leibovitz's L-15 mediumLife Technologies Europe31415-029Handling medium for ovarian tissue preparation
MediCult IVM systemOrigio/CooperSurgical82214010medium for IVM containing both LAG and IVM medium. IVM medium needs to be supplemented as detailed in the protocol
METZENBAUM fino scissors 140 mmChirurgical MaintenanceVIZ08280314Medium size scissors for initial medulla removal
Nunc 4-well dishes for IVFNunc/VWR International144444COC collection during COC search and IVM culture
Nunc Invitro fertilization Petri Dish with Vented Lid, 60 mm, Non-Pyrogenic, SterileThermo Scientific/VWRNUNC150270Dish for COC search
Oocyte handling medium : Flushing Medium with heparinOrigio/CooperSurgical10765060Search medium for COC search
OvoilVitrolife10029oil for IVM culture
Penicillin/Streptomicin mixLife Technologies Europe15140-148Supplement for OTC handling medium
Scissors, curved, 150 mm long, 20 mm bladeChirurgical MaintenanceVIREBST999-SCSmall size scissors for residual medulla removal

References

  1. Practice Committee of the American Society for Reproductive Medicine. Fertility preservation in patients undergoing gonadotoxic therapy or gonadectomy: a committee opinion. Fertility and Sterility. 112 (6), 1022-1033 (2019).
  2. Anderson, R. A., et al. ESHRE guideline: female fertility preservation. Human Reproduction Open. 2020 (4), (2020).
  3. Karavani, G., et al. Chemotherapy-based gonadotoxicity risk evaluation as a predictor of reproductive outcomes in post-pubertal patients following ovarian tissue cryopreservation. BMC Women's Health. 21 (1), 201(2021).
  4. Fiorentino, G., et al. Biomechanical forces and signals operating in the ovary during folliculogenesis and their dysregulation: implications for fertility. Human Reproduction Update. 29 (1), 1-23 (2023).
  5. Revel, A., et al. Oocyte collection during cryopreservation of the ovarian cortex. Fertility and Sterility. 79 (5), 1237-1239 (2003).
  6. Fasano, G., Moffa, F., Dechène, J., Englert, Y., Demeestere, I. Vitrification of in vitro matured oocytes collected from antral follicles at the time of ovarian tissue cryopreservation. Reproductive Biology and Endocrinology. 9, 150(2011).
  7. Segers, I., et al. In vitro maturation (IVM) of oocytes recovered from ovariectomy specimens in the laboratory: a promising "ex vivo" method of oocyte cryopreservation resulting in the first report of an ongoing pregnancy in Europe. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 32 (8), 1221-1231 (2015).
  8. Guzman, L., et al. Developmental capacity of in vitro-matured human oocytes retrieved from polycystic ovary syndrome ovaries containing no follicles larger than 6 mm. Fertility and Sterility. 98 (2), e1-2 (2012).
  9. Mackens, S., et al. Outcome of in-vitro oocyte maturation in patients with PCOS: does phenotype have an impact. Human Reproduction. 35 (10), 2272-2279 (2020).
  10. Practice Committees of the American Society for Reproductive Medicine, the Society of Reproductive Biologists and Technologists, and the Society for Assisted Reproductive Technology. In vitro maturation: a committee opinion. Fertility and Sterility. 115 (2), 298-304 (2021).
  11. Prasath, E. B., et al. First pregnancy and live birth resulting from cryopreserved embryos obtained from in vitro matured oocytes after oophorectomy in an ovarian cancer patient. Human Reproduction. 29 (2), 276-278 (2014).
  12. Uzelac, P. S., Delaney, A. A., Christensen, G. L., Bohler, H. C. L., Nakajima, S. T. Live birth following in vitro maturation of oocytes retrieved from extracorporeal ovarian tissue aspiration and embryo cryopreservation for 5 years. Fertility and Sterility. 104 (5), 1258-1260 (2015).
  13. Segers, I., et al. Live births following fertility preservation using in-vitro maturation of ovarian tissue oocytes. Human Reproduction. 35 (9), 2026-2036 (2020).
  14. Delattre, S., et al. Combining fertility preservation procedures to spread the eggs across different baskets: a feasibility study. Human Reproduction. 35 (11), 2524-2536 (2020).
  15. Jadoul, P., et al. Laparoscopic ovariectomy for whole human ovary cryopreservation: technical aspects. Fertility and Sterility. 87 (4), 971-975 (2007).
  16. Vilela, J. dM. V., Dolmans, M. M., Amorim, C. A. Ovarian tissue transportation: a systematic review. Reproductive Biomedicine Online. 42 (2), 351-365 (2021).
  17. Vanhoutte, L., Cortvrindt, R., Nogueira, D., Smitz, J. Effects of chilling on structural aspects of early preantral mouse follicles. Biology of Reproduction. 70 (4), 1041-1048 (2004).
  18. Arav, A., Zvi, R. Do chilling injury and heat stress share the same mechanism of injury in oocytes. Molecular and Cellular Endocrinology. 282 (1-2), 150-152 (2008).
  19. Nikiforov, D., et al. Improving the maturation rate of human oocytes collected ex vivo during the cryopreservation of ovarian tissue. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 37 (4), 891-904 (2020).
  20. Vuong, L. N., et al. Live births after oocyte in vitro maturation with a prematuration step in women with polycystic ovary syndrome. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 37 (2), 347-357 (2020).
  21. Kirillova, A., et al. Improved maturation competence of ovarian tissue oocytes using a biphasic in vitro maturation system for patients with gynecological malignancy: a study on sibling oocytes. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 38 (6), 1331-1340 (2021).
  22. Segers, I., et al. In Vitro Maturation (IVM) culture conditions: the effect of oxygen tension and medium volume. Human Reproduction. 32, 126-127 (2017).
  23. De Munck, N., Santos-Ribeiro, S., Stoop, D., Van de Velde, H., Verheyen, G. Open versus closed oocyte vitrification in an oocyte donation programme: a prospective randomized sibling oocyte study. Human Reproduction. 31 (2), 377-384 (2016).
  24. Anderson, R. A., McLaughlin, M., Wallace, W. H. B., Albertini, D. F., Telfer, E. E. The immature human ovary shows loss of abnormal follicles and increasing follicle developmental competence through childhood and adolescence. Human Reproduction. 29 (1), 97-106 (2014).
  25. Karavani, G., et al. Age-dependent in vitro maturation efficacy of human oocytes-is there an optimal age. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 667682(2021).
  26. Bourg, M., et al. Is in vitro maturation of oocytes retrieved ex vivo from ovarian tissue an effective fertility preservation technique in the presence of organic ovarian cysts. European Journal of Obstetrics and Gynecology and Reproductive Biology. 281, 87-91 (2023).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved