JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Здесь представлено созревание ткани яичников in vitro (OTO-IVM), доступная методика в лаборатории вспомогательной репродукции (MAR), предлагающая реалистичные дополнительные варианты сохранения фертильности для пациентов, нуждающихся в криоконсервации ткани яичников.

Аннотация

Витрификация зрелых ооцитов является стандартом лечения для сохранения фертильности у женщин с риском бесплодия. Тем не менее, криоконсервация ткани яичников (ОТК) по-прежнему является единственным вариантом сохранения фертильности у женщин, которым необходимо срочно начать гонадотоксическое лечение, или у детей препубертатного возраста. Во время подготовки коры яичников к криоконсервации происходит удаление костномозгового вещества. Растущие антральные фолликулы находятся на границе корково-мозгового интерфейса яичника и во время этого процесса разрушаются, высвобождая свой кумулюс-ооцитарный комплекс (КОК). При тщательном исследовании среды и фрагментированной медуллярной ткани эти незрелые кумулюс-ооцитарные комплексы могут быть идентифицированы без вмешательства в безрецептурную процедуру. Незрелые ооциты, полученные из ткани яичников, могут быть успешно зрелы in vitro, создавая дополнительный источник гамет для сохранения фертильности. Если безрецептурная терапия проводится в лаборатории вспомогательной репродукции или рядом с ней, все необходимые инструменты для созревания in vitro (IVM) и витрификации ооцитов могут быть под рукой. Кроме того, при наступлении ремиссии и желании ребенка у пациента есть несколько вариантов восстановления фертильности: трансплантация ткани яичника или перенос эмбриона после инсеминации витрифицированными/подогретыми ооцитами. Следовательно, созревание яйцеклеток яичниковой ткани in vitro (OTO-IVM) может быть ценным дополнительным методом сохранения фертильности.

Введение

Варианты сохранения фертильности (ФП) для женщин, которым запланировано гонадотоксическое лечение, терапия по смене пола, или женщин с генетической предрасположенностью к преждевременной недостаточности яичников, зависят от состояния здоровья и возраста пациентки, доступных сроков, типа лечения, предпочтений пациента и процедур ФП, доступных в центре лечения бесплодия по выбору. Витрификация зрелых ооцитов, полученных после стимуляции яичников гонадотропинами и извлечения ооцитов в лабораторном цикле с медицинской вспомогательной репродукцией (MAR), считается предпочтительным вариантом для FP 1,2. Однако для девочек препубертатного возраста, женщин, у которых требуется срочное начало гонадотоксического лечения или гонадэктомии, или женщин с высоким риском развития постоянной аменореи вследствие гонадотоксического лечения цикл стимуляции яичников гонадотропинами невозможен, а криоконсервация ткани яичников (ОТК), которая является принятой и валидной методикой для ФП 1,2, 3, является единственным вариантом. Целью безрецептурных препаратов является криоконсервация тысяч спящих примордиальных фолликулов в ткани коры яичников, которые могут возобновить рост после трансплантации замороженной/размороженной ткани на оставшийся яичник или в перитонеальный карман после тщательного скрининга минимального остаточного заболевания в репрезентативных фрагментах тканей.

Для получения фрагментов коры головного мозга толщиной 1-2 мм, пригодных для криоконсервации, необходимо удалить мягкую мозговую ткань. Эта мозговая ткань обычно влечет за собой растущие фолликулы на различных стадиях развития, которые выходят из жесткой коры яичников, чтобы обеспечить их рост и расширение. В течение многих лет несколько лабораторий изучали потенциал этих ооцитов, выделенных из фолликулов, находящихся в остаточной мозговой ткани, после препарирования фрагментов коры яичников с использованием созревания in vitro (IVM)5,6,7, называемого ооцитом яичниковой ткани IVM (ОТО-IVM). Антральные фолликулы, даже менее 6 мм в диаметре, содержат незрелые ооциты, окруженные кучевыми клетками, которые могут созревать, оплодотворяться и развиваться в здоровых детей с помощью системы IVM 8,9. ЭКО считается стандартом лечения женщин с риском синдрома гиперстимуляции яичников (СГЯ), таких как синдром поликистозных яичников (СПКЯ). Тем не менее, в области ФП имеются ограниченные данные по КБВ в случаях с противопоказанием к стимуляции яичников; ЭКО из ооцитов, собранных трансвагинально, до сих пор считается инновационным, а ОТО-КБВ – экспериментальным 2,10. Тем не менее, сообщения о первых живорождениях после ОТО-КБП11,12,13 подчеркивают потенциал использования ОТО-КБП в качестве дополнительного метода, когда требуется безрецептурный препарат для ФП у пациентов14.

В этом исследовании представлены технические детали внедрения OTO-IVM в лаборатории MAR и проиллюстрированы результаты, полученные в одном центре.

протокол

Настоящее исследование по ОТО-КБПБ было одобрено местным Этическим комитетом УЗ-Брюссель (приложение к проекту 2008/068 и проекту 2022/303). Все пациенты подписали письменное информированное согласие. Каждый пациент был индивидуально оценен врачом-репродуктологом, медсестрой-навигатором и направляющим онкологом для составления оптимального плана лечения ФП с учетом предпочтений пациента14. Короче говоря, пациенты, имеющие право на безрецептурные препараты, срочно нуждаются в ФП и моложе 36 лет в возрасте14 лет. Для сочетания безрецептурных препаратов с ОТО-IVM химио- или лучевая терапия не может быть назначена в течение 6 месяцев, предшествующих безрецептурному лечению.

1. Лабораторная среда и персонал

  1. Выполняйте безрецептурные препараты в шкафу с ламинарным потоком класса А.
  2. Выполнение безрецептурных операций с участием двух операторов: один работает асептически в ламинальном шкафу, а второй очищает все нестерильные материалы с помощью распыления обеззараживающих бактерий и спорицидов и асептически передает материалы и материалы первому оператору. Обработайте кору яичников на крышке настольного холодильника (± 4 °C).
  3. Выполните поиск кумулюс-ооцитарного комплекса (КОК) во втором ламинарном шкафу с помощью стереомикроскопа в лаборатории MAR на нагреваемом столе (37 °C).
  4. Выполните забор КОК из остатков мозгового мозга (разделы 3 и 4) и инициируйте процесс IVM (раздел 5). Это делает третий оператор.

2. Подготовка СМИ

ПРИМЕЧАНИЕ: Для этой процедуры используются пять типов сред (подробно описаны ниже): безрецептурная среда для обработки, безрецептурная среда для замораживания, среда для поиска, среда LAG и среда IVM. При подготовке среды работайте асептически в проточном шкафу, как описано в разделе 1. Используйте новые, невскрытые реагенты для каждой процедуры и поддерживайте стерильность всех одноразовых материалов, используемых для определения стерильности производимых сред.

  1. Безрецептурная среда для работы
    1. Дополните среду L15 Leibovitz 4 мг/мл сывороточного альбумина человека (HSA), 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (см. Таблицу материалов).
    2. Храните безрецептурную среду в холодильнике до использования (не более 2 дней).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте безрецептурную рабочую среду для промывания и обработки ткани яичника и используйте ее в холодном виде (0-4 °C).
  2. Безрецептурная замораживающая среда
    1. Дополните среду Leibovitz L15 1,5 М диметилсульфоксидом (ДМСО) и 4 мг/мл HSA.
    2. Храните безрецептурную среду для заморозки в холодильнике до использования (не более 2 дней).
  3. Среда поиска
    ПРИМЕЧАНИЕ: Среда Search (буферизованная HEPES-среда для работы с ооцитами) коммерчески доступна (см. Таблицу материалов) и готова к использованию. Используйте среду для поиска для промывки фильтра и сбора КОК при поиске КОК между фрагментами мозгового вещества (раздел 4).
    1. Наполните шесть стерильных пробирок с круглым дном по 14 мл 6 мл среды Search.
    2. Приготовьте чашку на 4 лунки с 500 μл среды Search, покрытую 350 μл масла (см. Таблицу материалов).
    3. Нагрейте трубки и 4-луночный стаканчик при температуре 37 °C в течение как минимум 1 часа до прибытия ткани яичника. Среды, буферизованные HEPES, не требуют инкубацииCO2 .
  4. LAG средний
    ПРИМЕЧАНИЕ: Коммерчески доступная система IVM (см. Таблицу материалов) состоит из двух различных сред: среды LAG и среды IVM, которые необходимо дополнить, как описано ниже. Среда LAG используется для промывки КОК, но также может использоваться в течение 2-3 часов инкубационного периода, предшествующего IVM в среде IVM, как предполагает вставка системы IVM.
    1. Используйте коммерчески доступную, готовую к использованию среду LAG (см. Таблицу материалов).
  5. КБПБ средний
    1. Дополните коммерчески доступную среду IVM 10 мг/мл HSA, 75 мМЕ/мл фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и 100 мМЕ/мл хорионического гонадотропина человека (ХГЧ).
    2. Приготовьте 4-луночную чашку для культивирования с одной лункой среды LAG и тремя лунками с добавленной средой IVM: 500 μL среды, покрытой 350 μL масляной налей.
    3. Уравновесьте чашку в течение ночи в инкубаторе при температуре 37 °C при 6%CO2 и 20%O2, что является оптимальной средой для культивирования IVM.

3. Подготовка коры яичников

ПРИМЕЧАНИЕ: Лапароскопическое удаление всего яичника проводили, как описано в Jadoul et al.15.

  1. По прибытии яичника в лабораторию дважды промойте яичник в среде для безрецептурных препаратов (шаг 2.1), перенеся яичник в чашку Петри диаметром 100 мм с безрецептурной средой.
  2. С помощью скальпеля разрежьте завязь пополам в продольном направлении (рисунок 1А).
  3. Сделайте несколько разрезов в мозговом мозге как по вертикали, так и по горизонтали свежим скальпелем. Избегайте повреждения коры головного мозга. Осторожно проколите скальпелем твердые антральные фолликулы различных размеров в мозговом веществе, чтобы высвободить фолликулярную жидкость из безрецептурной рабочей среды.
  4. Разрежьте мягкую ткань мозгового мозга хирургическими ножницами (Рисунок 1B). Эта процедура может занять несколько минут.
  5. Положите оболочку яичника в новую посуду со свежей средой для обработки безрецептурных препаратов во время процесса обрезки.
  6. Перенесите чашку с мозговыми фрагментами и высвободившейся фолликулярной жидкостью (рис. 1В) во второй проточный шкаф, чтобы начать поиск КОК.
  7. Повторяйте шаги с 3.4 по 3.6 до тех пор, пока не будет получена желаемая толщина (1-2 мм) ткани коры головного мозга.
  8. Разрежьте кору головного мозга на кусочки размером примерно 8 мм х 5 мм.
  9. Инкубируйте кусочки 3 раза подряд в течение 10 минут примерно в 25 мл безрецептурной среды для замораживания (шаг 2.2) в чашках Петри 100 мм.
  10. Поместите одну штуку в 800 μл безрецептурной замораживающей среды в криовиале.
  11. Криоконсервация ткани яичника с помощью протокола медленной заморозки в криокамере, контролируемой регулятором температуры (см. Таблицу материалов): от 4 °C до -7 °C при -2 °C/мин, ручной посев при -7 °C, от -7°C до -40 °C при -0,3 °C/мин, от -40 °C до -100 °C при -10 °C/мин, а при -100 °C погрузить криовиалы в жидкий азот и хранить их.

4. Поиск COC

  1. Подготовьте ламинарный шкаф для поиска COC.
    1. Теплые 60 мм посуды для культуры на нагреваемом столике под стереомикроскопом в ламинарном шкафу.
    2. Поместите пробирки объемом 14 мл с 6 мл предварительно подогретой среды Search (шаг 2.3.1) в нагреваемый блок, а предварительно нагретый 4-луночный стаканчик с средой Search на нагретый столик под микроскопом в ламинарном шкафу.
    3. Поместите стерильный фильтр (ячеистое ситечко, размер ячеек 70 мкм; см. Таблицу материалов) дном вниз в чашку для культур.
    4. Возьмите для использования стеклянный капилляр размером 290-310 мкм: не используйте капилляры меньшего размера, чем 290-310 мкм, во избежание повреждения связи ооцит-кумулюсных клеток.
    5. Убедитесь, что у вас есть фильтрующие наконечники объемом 1 мл и пипетка объемом 1 мл.
  2. Возьмите первую чашку с медуллярными фрагментами из безрецептурного ламинарного проточного шкафа (4 °С) и как можно скорее поставьте чашку на нагретый стол (37 °С) в ламинарном проточном шкафу IVM.
    Примечание: Первая чашка с фрагментами мозгового мозга и фолликулярной жидкостью может быть загрязнена кровью из заполненных кровью овулированных фолликулов или сосудистой сети самого яичника. Эритроциты затуманивают четкое зрение и затрудняют поиск КОК. Загрязненную среду необходимо удалить, чтобы смыть эритроциты (см. шаг 4.3).
  3. Удалите загрязненные клетки крови, выполнив следующие действия.
    1. Пипеткой 2 мл среды Search над фильтрующей мембраной (70 мкм клеточного фильтра) намочить мембрану и поставить чашку, в которую была захвачена среда, в сторону на нагретый стол.
    2. Переверните фильтр вверх дном и приложите его ручкой к краю чашки для новой культуры, создав наклон дном фильтра.
    3. Соберите загрязненную кровью среду между фрагментами мозгового вещества с помощью наконечника объемом 1 мл и осторожно продуйте им через фильтрующую мембрану (рис. 1D), чтобы захватить КОК, присутствующие в загрязненной среде.
    4. Повторяйте шаг 4.3.3 до тех пор, пока не будет удалена большая часть загрязненной кровью среды.
    5. Немедленно залейте фрагменты мозгового мозга свежей средой Search, чтобы КОК всегда оставался во взвешенном состоянии в питательной среде.
    6. Осторожно промойте наклонную фильтрующую мембрану 2 мл среды Search, чтобы смыть эритроциты с фильтрующей мембраны.
    7. Поместите фильтр вниз в новую посуду и налейте в фильтр 3-4 мл среды Search, чтобы вытеснить COC из фильтрующей мембраны в среду, которая заполняет чашку. Снимите фильтр. Чтобы гарантировать, что фильтрующая мембрана не пересохнет (и любые возможные КОК, которые еще не выводятся из нее), погрузите фильтр дном вниз в первую посуду, которая использовалась для смачивания фильтра в первый раз.
    8. Немедленно исследуйте вытесняемую среду на наличие КОК путем визуального осмотра под стереомикроскопом с увеличением 10х-50х. Ищите прозрачные полупрозрачные ооциты с ободком темных, компактных окружающих кучевых клеток (рисунок 1E). Перемешайте среду в чашке и снова исследуйте ее.
    9. Промойте фильтр второй раз в новой посуде и исследуйте вытесняемую среду на наличие КОК.
    10. Исследуйте среду в чашке, куда погружен фильтр, на предмет остатков КОК.
    11. Перенесите КОК со стеклянным капилляром в 4-луночную чашку, содержащую среду Search (рис. 1E). Всегда держите посуду на разогретой сцене.
  4. Ищите между медуллярными фрагментами КОК после удаления загрязняющих клеток крови из чашки с медуллярными фрагментами и пополнения чашки прозрачной средой Search. Используйте стеклянный капилляр для перемещения вокруг мозговых фрагментов и взбалтывайте среду в чашке, чтобы найти КОК. При подозрении на наличие ооцита раздвиньте крупные фрагменты мозгового мозга туберкулиновыми иглами на шприце объемом 1 мл.
  5. Соберите все неповрежденные КОК в 4-луночную чашку со средой Search.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При типичной безрецептурной процедуре ткань коры головного мозга отделяется от мозгового мозга с помощью трех последовательных 100-миллиметровых чашек, где оболочка яичника перемещается в новую чашку со свежей средой, а остатки переносятся в поток IVM для поиска КОК. Обычно, только первое блюдо требует удаления клеток крови; во второй и третьей чашках присутствует меньше медуллярных фрагментов, и поиск КОК осуществляется непосредственно между фрагментами и в среде.

5. КБК КБК

  1. Промойте КОК в чистом колодце средой Search.
  2. Переместите предварительно уравновешенную чашку для культуры IVM (чашку с 4 лунками, содержащую одну лунку среды LAG и три лунки среды IVM) из инкубатора на нагревную ступень в проточном шкафу IVM.
  3. Пометьте чашку для посева ЭКО, содержащую КОК, информацией о пациенте.
  4. Промойте КОК в среде LAG (2-3 с) и поместите их в одну из трех лунок с добавленной средой IVM. Культивируйте КОК группами примерно по 10 КОК на лунку. Исключите из культуры голые ооциты — ооциты, лишенные прикрепленных кучевых клеток, так как известно, что они имеют серьезно нарушенный потенциал развития.
  5. Поместите чашку в инкубатор при температуре 37 °C, 6%CO2 и 20%O2 на 30 часов.

6. Работа со зрелыми ооцитами

  1. Очистите ооциты от окружающих их кучевых клеток путем кратковременного воздействия 80 МЕ гиалуронидазы (см. Таблицу материалов) и щадящего механического пипетирования после 30 ч IVM.
  2. Идентификация зрелых ооцитов путем экструзии первого полярного тельца.
  3. Витрификация или осеменение зрелых ооцитов, в зависимости от предпочтений пациента.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если проверка созревания после 30 часов IVM выходит за рамки допустимого рабочего времени, продолжительность IVM может быть сокращена до 28 часов или продлена до 42 часов. Если через 30 ч получено всего несколько зрелых ооцитов, незрелые ооциты могут быть дополнительно культивированы в течение ночи в исходной лунке IVM, лишенной кумулюсных клеток, и использованы на следующее утро для витрификации или интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ) после созревания.

Результаты

За последнее десятилетие 98 пациенткам, перенесшим овариэктомию или биопсию яичников для лечения безрецептурных препаратов, также была предложена ОТО-IVM. Представленные здесь результаты являются обновлением клинической программы, опубликованной до 7,...

Обсуждение

Приоритетом процедуры FP всегда является манипулирование и замораживание коры яичников в соответствии со стандартным операционным протоколом, который был валидирован в клинике. Недостатком ФП является отсутствие стандартного протокола, доступного в опубликованной...

Раскрытие информации

У авторов нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа проводилась в лаборатории ЭКО Брюссельского ЭКО, Universitair Ziekenhuis of VUB, Брюссель. Авторы хотели бы поблагодарить всех членов команды лаборатории ЭКО в Брюсселе за их высокую квалификацию, точность и гибкость, необходимые для создания подразделения по сохранению фертильности в лаборатории MAR.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1000 µL filter tipsEppendorf/VWR International613-6780COC search
Benchtop CoolerFisher Scientific15-350-54Benchtop Cooler lid is used to prepare the tissue, Benchtop Cooler tube holder to keep cryovials with freezing medium cooled
Corning Cell culture dish, non-treated, 100 mmCorning/VWR International430591Dish for ovarian tissue preparation
CryoSure-DMSOWAK Chemicals0482Cryoprotectant for ovarian tissue cryopreservation
CumulaseOrigio/CooperSurgical16125000Arecombinant human hyaluronidase enzyme for cumulus cell removal after IVM
Decontamination spray: SuproxMedipure LTDMP016Desinfectant solution for aseptic handling with bactericide and sporicide action
Disposable scalpelsSwann-Morton0511Ovarian tissue preparation
Falcon 14 mL Round Bottom Polystyrene Test Tube, with Snap Cap, SterileFalcon/VWR InternationalBDAA352057Medium container 
Falcon Cell strainer 70 µmFalcon/VWR International352350Filter for elimination of red blood cell contamination and COC search
Freeze control Ampoule Cryochamber and Temperature ControllerCryologicCL-8800i   CC60ASSlow freezing machine
FSH: Menopur 75 IUFerringBE197504Follicle Stimulating Hormone : Supplement for IVM medium
Handling pipette 290-310 µmVitrolife15538COC search: gentle transfer of COC without damaging oocyte-cumulus cell connectivity
hCG: Brevactid 5000 IEFerring5008001036Human Chorionic Gonadotropin : Supplement for IVM medium
High security tubeCryoBioSystem022252cryovial, heat-sealed for safe cryostorage
HSA-solutionVitrolife10064Human serum Albumin: supplement for IVM medium
Leibovitz's L-15 mediumLife Technologies Europe31415-029Handling medium for ovarian tissue preparation
MediCult IVM systemOrigio/CooperSurgical82214010medium for IVM containing both LAG and IVM medium. IVM medium needs to be supplemented as detailed in the protocol
METZENBAUM fino scissors 140 mmChirurgical MaintenanceVIZ08280314Medium size scissors for initial medulla removal
Nunc 4-well dishes for IVFNunc/VWR International144444COC collection during COC search and IVM culture
Nunc Invitro fertilization Petri Dish with Vented Lid, 60 mm, Non-Pyrogenic, SterileThermo Scientific/VWRNUNC150270Dish for COC search
Oocyte handling medium : Flushing Medium with heparinOrigio/CooperSurgical10765060Search medium for COC search
OvoilVitrolife10029oil for IVM culture
Penicillin/Streptomicin mixLife Technologies Europe15140-148Supplement for OTC handling medium
Scissors, curved, 150 mm long, 20 mm bladeChirurgical MaintenanceVIREBST999-SCSmall size scissors for residual medulla removal

Ссылки

  1. Practice Committee of the American Society for Reproductive Medicine. Fertility preservation in patients undergoing gonadotoxic therapy or gonadectomy: a committee opinion. Fertility and Sterility. 112 (6), 1022-1033 (2019).
  2. Anderson, R. A., et al. ESHRE guideline: female fertility preservation. Human Reproduction Open. 2020 (4), (2020).
  3. Karavani, G., et al. Chemotherapy-based gonadotoxicity risk evaluation as a predictor of reproductive outcomes in post-pubertal patients following ovarian tissue cryopreservation. BMC Women's Health. 21 (1), 201 (2021).
  4. Fiorentino, G., et al. Biomechanical forces and signals operating in the ovary during folliculogenesis and their dysregulation: implications for fertility. Human Reproduction Update. 29 (1), 1-23 (2023).
  5. Revel, A., et al. Oocyte collection during cryopreservation of the ovarian cortex. Fertility and Sterility. 79 (5), 1237-1239 (2003).
  6. Fasano, G., Moffa, F., Dechène, J., Englert, Y., Demeestere, I. Vitrification of in vitro matured oocytes collected from antral follicles at the time of ovarian tissue cryopreservation. Reproductive Biology and Endocrinology. 9, 150 (2011).
  7. Segers, I., et al. In vitro maturation (IVM) of oocytes recovered from ovariectomy specimens in the laboratory: a promising "ex vivo" method of oocyte cryopreservation resulting in the first report of an ongoing pregnancy in Europe. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 32 (8), 1221-1231 (2015).
  8. Guzman, L., et al. Developmental capacity of in vitro-matured human oocytes retrieved from polycystic ovary syndrome ovaries containing no follicles larger than 6 mm. Fertility and Sterility. 98 (2), e1-2 (2012).
  9. Mackens, S., et al. Outcome of in-vitro oocyte maturation in patients with PCOS: does phenotype have an impact. Human Reproduction. 35 (10), 2272-2279 (2020).
  10. Practice Committees of the American Society for Reproductive Medicine, the Society of Reproductive Biologists and Technologists, and the Society for Assisted Reproductive Technology. In vitro maturation: a committee opinion. Fertility and Sterility. 115 (2), 298-304 (2021).
  11. Prasath, E. B., et al. First pregnancy and live birth resulting from cryopreserved embryos obtained from in vitro matured oocytes after oophorectomy in an ovarian cancer patient. Human Reproduction. 29 (2), 276-278 (2014).
  12. Uzelac, P. S., Delaney, A. A., Christensen, G. L., Bohler, H. C. L., Nakajima, S. T. Live birth following in vitro maturation of oocytes retrieved from extracorporeal ovarian tissue aspiration and embryo cryopreservation for 5 years. Fertility and Sterility. 104 (5), 1258-1260 (2015).
  13. Segers, I., et al. Live births following fertility preservation using in-vitro maturation of ovarian tissue oocytes. Human Reproduction. 35 (9), 2026-2036 (2020).
  14. Delattre, S., et al. Combining fertility preservation procedures to spread the eggs across different baskets: a feasibility study. Human Reproduction. 35 (11), 2524-2536 (2020).
  15. Jadoul, P., et al. Laparoscopic ovariectomy for whole human ovary cryopreservation: technical aspects. Fertility and Sterility. 87 (4), 971-975 (2007).
  16. Vilela, J. d. M. V., Dolmans, M. M., Amorim, C. A. Ovarian tissue transportation: a systematic review. Reproductive Biomedicine Online. 42 (2), 351-365 (2021).
  17. Vanhoutte, L., Cortvrindt, R., Nogueira, D., Smitz, J. Effects of chilling on structural aspects of early preantral mouse follicles. Biology of Reproduction. 70 (4), 1041-1048 (2004).
  18. Arav, A., Zvi, R. Do chilling injury and heat stress share the same mechanism of injury in oocytes. Molecular and Cellular Endocrinology. 282 (1-2), 150-152 (2008).
  19. Nikiforov, D., et al. Improving the maturation rate of human oocytes collected ex vivo during the cryopreservation of ovarian tissue. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 37 (4), 891-904 (2020).
  20. Vuong, L. N., et al. Live births after oocyte in vitro maturation with a prematuration step in women with polycystic ovary syndrome. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 37 (2), 347-357 (2020).
  21. Kirillova, A., et al. Improved maturation competence of ovarian tissue oocytes using a biphasic in vitro maturation system for patients with gynecological malignancy: a study on sibling oocytes. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 38 (6), 1331-1340 (2021).
  22. Segers, I., et al. In Vitro Maturation (IVM) culture conditions: the effect of oxygen tension and medium volume. Human Reproduction. 32, 126-127 (2017).
  23. De Munck, N., Santos-Ribeiro, S., Stoop, D., Van de Velde, H., Verheyen, G. Open versus closed oocyte vitrification in an oocyte donation programme: a prospective randomized sibling oocyte study. Human Reproduction. 31 (2), 377-384 (2016).
  24. Anderson, R. A., McLaughlin, M., Wallace, W. H. B., Albertini, D. F., Telfer, E. E. The immature human ovary shows loss of abnormal follicles and increasing follicle developmental competence through childhood and adolescence. Human Reproduction. 29 (1), 97-106 (2014).
  25. Karavani, G., et al. Age-dependent in vitro maturation efficacy of human oocytes-is there an optimal age. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 667682 (2021).
  26. Bourg, M., et al. Is in vitro maturation of oocytes retrieved ex vivo from ovarian tissue an effective fertility preservation technique in the presence of organic ovarian cysts. European Journal of Obstetrics and Gynecology and Reproductive Biology. 281, 87-91 (2023).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

in vitro

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены