JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף תחליב ננו-תחליב (RA) שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. על ידי הוספת RA שאושר על ידי ה- FDA לננו-תחליב, sIgA ספציפי לאנטיגן קודם בנרתיק ובמעי הדק לאחר הזרקה תוך שרירית של ננו-תחליב.

Abstract

ננו-מבנים קטיוניים התפתחו כמערכת אספקת אדג'ובנט ואנטיגן המשפרת את הבשלת התאים הדנדריטיים, יצירת ROS וספיגת אנטיגן ולאחר מכן מקדמת תגובות חיסוניות ספציפיות לאנטיגן. בשנים האחרונות, חומצה רטינואית (RA) זוכה לתשומת לב גוברת בשל השפעתה בהפעלת התגובה החיסונית הרירית; עם זאת, על מנת להשתמש RA כמו adjuvant רירית, יש צורך לפתור את הבעיה של פירוק שלה, העמסה, ומשלוח. במאמר זה אנו מתארים מערכת אספקה קטיונית של חומצה רטינואית בעטוף תחליב ננו-תחליב (CNE-RA) המורכבת מהשומנים הקטיוניים 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOTAP), חומצה רטינואית, סקוואלן כשלב השמן, פוליסורבט 80 כחומר פעילי שטח, וסורביטן טריאולאט 85 כקו-פעילי שטח. תכונותיו הפיזיקליות והכימיות אופיינו באמצעות פיזור אור דינמי וספקטרופוטומטר. חיסון עכברים בתערובת של אנטיגן (אובלבומין, OVA) ו- CNE-RA העלה באופן משמעותי את רמות האימונוגלובולין A (sIgA) המפריש אנטי-OVA בנוזל שטיפת הנרתיק ובנוזל שטיפת המעי הדק של עכברים בהשוואה ל- OVA בלבד. פרוטוקול זה מתאר שיטה מפורטת להכנה, אפיון והערכה של ההשפעה האדג'ובנטית של CNE-RA.

Introduction

אדג'ובנטים משמשים לעתים קרובות כדי לשפר את היעילות של חיסון על ידי גירוי המערכת החיסונית להגיב חזק יותר לחיסון, ובכך להגדיל את החסינות לפתוגן מסוים1. ננו-תחליב (NE) אדג'ובנט מתייחס למערכת פיזור קולואידית עם יציבות תרמודינמית על ידי תחליב חלק מסוים של פאזת שמן ופאזה מימית כדי לייצר תחליב בצורה של מים בשמן (W/O) או שמן במים (O/W)2. אדג'ובנט ננו-תחליב O/W יכול לייצר ציטוקינים וכימוקינים באתר ההזרקה, לגרום לצבירה מהירה ולשגשוג של תאים חיסוניים חשובים כגון מונוציטים, נויטרופילים ואאוזינופילים, לשפר את התגובה החיסונית, ולשפר את האימונוגניות של אנטיגנים3. נכון לעכשיו, שלושה אדג'ובנטים של ננו-תחליב (MF59, AS03 ו-AF03) קיבלו רישיון לשימוש בחיסונים והראו בטיחות ויעילות טובות4.

עם זאת, חסינות הרירית טופלה בצורה גרועה על ידי פורמולציות האדג'ובנטיות המורשות כיום בחיסון פרנטרלי קונבנציונאלי5. דווח כי חומצה רטינואית (RA) גורמת לביות מעיים של תאי מערכת החיסון, אך הקוטביות הנמוכה שלה, המסיסות הירודה שלה במים, האור החלש והיציבות התרמית שלה מגבילים את השימוש בה לחיסון אנטרי חזק. ננו-תחליבים מציעים הזדמנויות להגדיל את הזמינות הביולוגית של תרופות ליפופיליות מאוד, וליבת השמן של אדג'ובנטים של תחליב O/W מתאימה להמסת חומרים לא קוטביים כגון RA6. לכן, ננו-תחליבים יכולים לשמש כנשאים עבור RA על מנת להשיג את אפקט התגובה הכפולה של חסינות מערכתית וחסינות רירית.

בהשוואה למערכות משלוח ניטרליות או אניוניות, למערכות משלוח קטיוניות יש יכולות אנקפסולציה ומסירה יעילות יחסית של אנטיגן, שיכולות לשפר את האימונוגניות של אנטיגנים 7,8,9. מטען פני השטח הקטיוני של מגוון מערכות אדג'ובנטיות חשוב להשפעתן האדג'ובנטית 10,11,12. המטען הקטיוני הוא גורם חשוב בהארכת שימור החיסון באתר ההזרקה, הגברת הצגת האנטיגן והארכת גירוי החסינות התאית בגוף12.

בהתבסס על השיקולים לעיל, פיתחנו ננו-תחליב קטיוני כדי לספק ביעילות RA ואנטיגנים. גודל החלקיקים ופוטנציאל הזטה של הננו-תחליב נקבעו באמצעות פיזור אור דינמי (DLS), והתגובות החיסוניות המערכתיות והריריות של ננו-תחליב בשילוב עם OVA הוערכו על ידי הזרקה תוך שרירית13.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם למדריך לשימוש וטיפול בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה לרווחת חיות מעבדה ואתיקה של האוניברסיטה הצבאית השלישית לרפואה.

1. הכנת ננו-תחליבים (NEs)

  1. להכנת פאזה מימית, יש להמיס 0.15 גרם פוליסורבט 80 ב-28.2 מ"ל של מלח חוצץ פוספט (PBS) תוך ערבוב ב-40°C.
  2. להכנת שלב השמן, השתמש בנוסחת פאזת השמן של ננו-תחליב המוצג בטבלה 1. ממיסים את הטרילאט הסוריניטני 85, DOTAP ו-RA בסקוואלן תוך ערבוב ב-40°C.
  3. להכנת תחליב O/W ראשוני, ערבבו את פאזת השמן באופן מגנטי ב-1,400 סל"ד תוך הוספת המימית לאט ובטיפה בקצב של 1 מ"ל/דקה. בצעו תחליב מראש את התערובת באמצעות מתחלב גזירה גבוה ב-30,000 סל"ד למשך 6 דקות.
  4. עבור הומוגניזציה בלחץ גבוה (HPH), טפל בתחליב O/W הראשוני שהוכן לעיל עם הומוגנייזר בלחץ גבוה במשך 12 מחזורים ב- 900 בר כדי לקבל ננו-תחליב הומוגני בטווח של 160-190 ננומטר.
  5. בסוף התהליך, אספו את התחליב בבקבוק של 50 מ"ל וסננו את התחליב דרך קרום מסנן PES של 0.2 מיקרומטר.
  6. חברו את הבקבוק לקו שלנק דרך הצנתר, סובבו את הסטופקוק התלת-כיווני כדי לחבר את המערכת לשפופרת הוואקום והפעילו את משאבת הוואקום כדי ליצור ואקום בצלוחית. לאחר מכן, מסובבים את הסטופקוק המשולש, מחברים את המערכת לצינור ארגון וממלאים אותו בארגון. חזור על שלב זה 3 פעמים כדי לוודא שהבקבוק מלא בארגון.
  7. החלף את הפקק ואטם עם סרט paraffine, לעטוף את הבקבוק בנייר כסף ולאחסן אותו ב 4 ° C.

2. אפיון הננו-אמולסיות

  1. גודל חלקיקים וזיהוי פוטנציאל זטה
    1. הפעל את המכשיר והמתן 30 דקות עד שמקור אור הלייזר יתייצב.
    2. לדלל את NE 50-fold עם מים טהורים במיוחד ולהוסיף 1 מ"ל של דגימה לתא הדגימה המתאים.
    3. כדי למדוד את גודל החלקיקים, כוונו את הטמפרטורה ל-25°C, בחרו מים כמדיום לפיזור ובחרו כלי פלסטיק חד-פעמיים כתא המדידה. טען את הדגימות ומדוד באופן אוטומטי. דווח על הערך הממוצע של שלוש מדידות חוזרות עבור כל דגימה כתוצאה הסופית.
    4. למדידת פוטנציאל זטה, הגדר את הטמפרטורה ל -25 מעלות צלזיוס. בשל הבחירה בפאזה המימית כמדיום הפיזור, בחר במודל סמולוצ'וסי, ובתא הנימי המקופל כתא המדידה. טען את הדגימות ומדוד באופן אוטומטי. דווח על הממוצע של שלוש מדידות משוכפלות עבור כל דגימה כתוצאה הסופית.
  2. קביעת קצב אנקפסולציה וקצב העמסת תרופות
    1. כדי לקבוע את כמות RA טעון NE, להשתמש אתנול מוחלט כדי demulsify ולחלץ את RA מן NE. כדי 5 μL של דגימה, להוסיף 995 μL של אתנול ולקבוע את התוכן RA של הפתרון באמצעות ספקטרופוטומטר ב 355 ננומטר. השווה את הספיגה לעקומה סטנדרטית. השתמש במשוואה הבאה:
      אנקפסולציה = עומס RA בפועל / משקל של תרופה נוספת
      קצב העמסת תרופות = העמסת RA בפועל / איכות הדגימה

3. נהלי חיסון ואיסוף דגימות

  1. הליך החיסון והקיבוץ
    1. נקבות קבוצת עכברי Balb/C בגילאי 6-8 שבועות ובמשקל של כ-18-21 גרם בקבוצות של 5 לחיסון ביום 0, יום 14, יום 28 על פי קבוצות הניסוי הבאות: (1) קבוצת PBS, (2) קבוצת אובאלבומין (OVA), (3) קבוצת OVA+ NE-RA (OVA/NE-RA), (4) קבוצת OVA+CNE-RA(OVA/CNE-RA).
    2. חסן את כל העכברים על ידי הזרקה תוך שרירית לשרירי הארבע ראשי העליונים עם 200 μL של נוסחאות חיסון שונות: 100 μL של תחליב ו 15 מיקרוגרם OVA נספג ב 100 μL של PBS, מעורבב לפני מתן המוצר. יש להזריק 100 μL/רגל אחורית. עבור עכברים בקבוצת הביקורת לנהל PBS לבד.
    3. המתת חסד: המתת חסד של כל העכברים על ידי זריקה תוך צפקית של 100 מ"ג / ק"ג של 1% נתרן pentobarbital 2 שבועות לאחר השלמת שלושת החיסונים.
    4. איסוף דגימות ועיבוד: לאחר המתת חסד, השתמש מספריים כדי לחתוך את החזה של עכברים ולהכניס מזרק ישירות לתוך הלב כדי לשאוף כ 0.5 מ"ל של דם שלם. אפשר את הדם לעמוד במשך 2 שעות בטמפרטורת החדר ולאחר מכן צנטריפוגה ב 1800 x גרם במשך 5 דקות ב 4 °C (75 °F). יש לאסוף סרום, aliquot ולאחסן ב -80 °C לניתוח נוסף.
    5. יש לאסוף דם מלא, טחול, נוזל שטיפת נרתיק (VLF), נוזל שטיפה סימפונות (BALF), נוזל שטיפת אף (NLF) ונוזל שטיפת מעי דק (SILF).
  2. בידוד של לימפוציטים טחול
    1. משרים עכברים באתנול 75% (v/v) לעיקור קצר, מעבירים את העכברים לספסל נקי. לחתוך את העור על הבטן השמאלית עם מספריים, לחשוף ולהסיר את הטחול.
    2. מניחים את הטחול בצלחת פטרי המכילה 3 מ"ל PBS, טוחנים ומסננים לתוך צינור צנטריפוגה 15 מ"ל באמצעות מסננת (200 רשת, 70 מיקרומטר) ומוט השחזה.
    3. צנטריפוגה את התאים ב 650 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. להשליך את supernatant ולהשעות את המשקע עם 3 מ"ל של תמיסת ליזה של תאי דם אדומים, לדגור בטמפרטורת החדר במשך 5 דקות.
    4. הוסף 10 מ"ל של PBS לצינור ולנער היטב כדי לסיים את התגובה, ולאחר מכן צנטריפוגה אותו ב 650 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.
    5. השליכו את הסופרנאטנט והשהו מחדש את התאים ב-10 מ"ל PBS, הוסיפו 20 מיקרוליטר של דילול התא למונה התאים האוטומטי לצורך ספירת תאים.
    6. צנטריפוגה את התאים ב 650 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. יש להשליך את הסופרנאטנט ולדלל את התאים ל-1 x 106 תאים/מ"ל עם 1640 תווך מלא (1% פניצילין-סטרפטומיצין, 10% נסיוב בקר עוברי).
  3. אוסף VLF: יש לשטוף את הנרתיק 4x עם 75 μL של 1% BSA/PBST, לשלב את תמיסת השטיפה ולאסוף בצינורות צנטריפוגות 1.5 מ"ל, צנטריפוגה ב 5000 x גרם ב 4 ° C במשך 20 דקות ולאסוף את supernatant עם פיפטה ולאחסן ב -80 ° C.
  4. אוסף BALF ו-NLF
    1. יש לחטא את העכברים לאחר ההקרבה באתנול 75% (v/v). החזק את בטן העכבר למעלה ויישר את הצוואר. השתמש מספריים כדי לבצע חתך אורכי בעור של צוואר העכבר ולהשתמש מלקחיים כדי להפריד את השרירים לחשוף את קנה הנשימה כראוי.
    2. חותכים את קנה הנשימה דרך פתח רוחבי קטן ומכניסים את הצינור לכיוון הריאות, מחברים את המזרק לצינור ומזריקים 0.5 מ"ל PBS לריאות ונסוגים, חוזרים על שטיפה 3x וצנטריפוגה ב 650 x גרם ב 4 ° C במשך 5 דקות, לאחסן את supernatant (BALF) ב -80 ° C.
    3. הפוך את הצינור לחלל האף, חבר את המזרק לצינור והזריק 0.5 מ"ל של PBS, הנוזל יזרום דרך חלל האף לתוך צינור הצנטריפוגה 1.5 מ"ל. שאפו את השטיפה מצינור הצנטריפוגה וחזרו על השטיפה 2x, לאחר מכן צנטריפוגה ב 650 x גרם ב 4 °C במשך 5 דקות, לאחסן את supernatant (NLF) ב -80 ° C.
  5. אוסף SILF
    1. הכינו תמיסת PBS המכילה מעכב טריפסין 0.1 מ"ג/מ"ל, 50 mM/L EDTA-2Na, 1 mM/L פנילמתיל-סולפוניל פלואוריד (PMSF) כתמיסת שטיפת המעי הדק. יש לערבב בטמפרטורת החדר עד להתמוססות ולאחסן ב-4°C.
    2. חותכים את המעי הדק לפתוח לאורך צינור המעי לטבול 3 מ"ל של נוזל שטיפה במעי הדק. יש לערבב על ידי ניעור אנכי ב-15 סל"ד למשך 30 דקות ב-4°C. צנטריפוגה ב 1440 x גרם ב 4 ° C במשך 20 דקות ולאסוף את supernatant עם פיפטה, ולאחר מכן צנטריפוגה ב 5000 x גרם ב 4 ° C במשך 20 דקות. אחסנו את הסופרנאטנט (SILF) בטמפרטורה של -80°C.

4. הערכה של תגובת נוגדנים ספציפית ל- OVA לאחר מתן תוך שרירי

  1. לקבוע רמות של IgG בסרום, תת-מחלקות של IgG1, IgG2a ואת רמות sIgA ספציפיות ב- VLF, BALF, NLF ו- SILF על ידי בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים (ELISA).
  2. לציפוי אנטיגן, יש לדלל את OVA ל-5 מיקרוגרם/מ"ל באמצעות חיץ ציפוי, ולצפות צלחות ELISA של 96 בארות למשך הלילה ב-4°C עם 100 מיקרוליטר של תמיסת OVA לכל באר.
  3. יש לשטוף את צלחות ELISA 5x עם PBST ולחסום על ידי דגירה עם 250 μL של 1% BSA/PBST ב-37°C למשך שעתיים.
  4. יש לשטוף את צלחות ELISA 5x עם PBST, ולאחר מכן להוסיף 100 μL של הדגימה מדולל כמתואר להלן כדי להיבדק ולדגור ב 37 ° C במשך 1 שעות. סרום מדולל, VLF, BALF, NLF עם 0.5% BSA/PBST, סילף מדולל עם 20% סרום עגל עוברי (FCS)/PBST.
    1. התחל על ידי דילול הסרום 1000x באמצעות הליך דילול דו-שלבי: לדלל 20 μL של סרום ל 1 מ"ל, ולאחר מכן לדלל 25 μL של סרום מדולל זה ל 500 μL. השתמש בדילול זה של סרום לזיהוי של IgG1, IgG2a.
  5. הוסף 200 μL של הסרום מדולל ב 1000x לשורה הראשונה של הצלחת המצופה ולהוסיף 100 μL של 0.5% BSA/PBST לכל הבארות למעט השורה הראשונה. מעבירים 100 μL מהשורה הראשונה לשורה השנייה ומערבבים 10x עם הפיפטה. חזור על שלב זה עד שורה 8 ולהשליך 100 μL של נוזל, הסרום של ריכוזים שונים התקבל לזיהוי של IgG.
  6. בצע דילול 1:1 של BALF, NLF ו- SILF כדי לזהות IgA. השתמש באותו הליך דילול עבור VLF כמו זה עבור סרום.
  7. שטפו את צלחות ELISA 5x עם PBST. הוסף 100 μL של עז מצומדת HRP נגד עכבר IgG/IgG1/IgG2a/IgA (מדולל 1:10000 עם PBST) לבארות המתאימות ודגור ב 37 ° C במשך 40 דקות.
  8. שטפו את צלחות ELISA 5x עם PBST, הוסיפו 100 μL של מצע TMB ELISA (רגיש במיוחד), והעבירו את הצלחת למקום מוגן מאור למשך 5 דקות. הוסף מיד 100 μL של תמיסת עצירה של 450 ננומטר עבור מצע TMB כדי לעצור את התגובה.
  9. מדוד את הספיגה (OD) ב- 450 ננומטר עבור כל באר וחשב את טיטר הנוגדנים על ידי לקיחת פי 2.1 מערך הסרום של עכבר הקבוצה הריקה כערך התגובה החיובית.

5. בדיקת ELISpot

  1. עקוב אחר ההנחיות עבור ELISpot Plus, השתמש בעכבר IFN-γ (ALP) מהערכה כדי לבצע את הבדיקות.
  2. מוציאים את הצלחת מהאריזה האטומה ושוטפים 4x עם PBS סטרילי (200 מיקרוליטר/באר). מזננים את הצלחת ב-1640 מדיום שלם (200 מיקרוליטר/באר) ודגרים במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.
  3. הסר את המדיום והוסף את הריכוז המותאם של תרחיף לימפוציטים שהוכן בשלב 3.2.2 (100 μL / באר) לצלחת, ולאחר מכן הוסף 100 μL של הגירוי כלומר, 1640 מדיום שלם המכיל 20 מיקרוגרם / מ"ל OVA257 ~ 264 או OVA323 ~ 339 או 1640 מדיום שלם. מניחים את הצלחת באינקובטור לח ב 37 ° C עם 5% CO2 במשך 48 שעות. עטפו את הצלחת ברדיד אלומיניום כדי למנוע אידוי.
  4. השליכו את מתלה התא ושטפו את הצלחת 5x עם PBS (200 μL/well). יש לדלל את נוגדן הזיהוי (R4-6A2-ביוטין) ל-1 מיקרוגרם/מ"ל ב-PBS המכיל 0.5% סרום עגל עובר (PBS-0.5% FCS). מוסיפים 100 μL/באר ודגרים במשך שעתיים בטמפרטורת החדר.
  5. יש לשטוף את הצלחת כמו בשלב 5.2. לדלל את streptavidin-ALP (1:1000) ב PBS-0.5% FCS ולהוסיף 100 μL / באר, לדגור במשך 1 שעה בטמפרטורת החדר.
  6. יש לשטוף את הצלחת כמו בשלב 5.2. סנן את פתרון המצע המוכן לשימוש (BCIP/NBT-plus) דרך מסנן 0.45 מיקרומטר והוסף 100 מיקרוליטר/באר. יש לפתח עד להופעת נקודות ברורות.
  7. עצרו את התפתחות הצבע על ידי שטיפה נרחבת במי ברז, הסירו את הפלסטיק הרך והשאירו את הצלחת לייבוש.
  8. בדוק וספור כתמים בקורא ELISpot.

6. ניתוח סטטיסטי

  1. נתח את ההבדלים בין נתונים של 4 קבוצות על ידי ANOVA חד כיווני ואחריו Tukey השוואה מרובים לאחר המבחן. בטא את כל התוצאות כממוצע ± SD. ערך P קטן מ- 0.05 נחשב למשמעותי.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

בסך הכל הוכנו ארבע פורמולציות ננו-תחליב שאופיינו על-ידי גודל החלקיקים שלהן (איור 1), פוטנציאל הזטה שלהן ויעילות האנקפסולציה שלהן כפי שמוצג בטבלה 2. גודל החלקיקים היה מרוכז סביב 160-190nm והתוספת של DOTAP הפכה את פוטנציאל Zeta של ננו-תחליב. IgG בסרום ספציפי ל-OVA ותת-הקבוצה שלו ב?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף ננו-תחליב שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. בהשוואה לאדג'ובנטים NE מסורתיים, יש לו את שני היתרונות הבאים. ראשית, באופן כללי, פני השטח של O/W NEs יש מטען שלילי גבוה, מה שמקשה על טעינה ישירה של אנטיגנים. NEs קטיוניים י?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים בעבודה זו.

Acknowledgements

מחקר זה מומן על ידי תוכנית המפתח של קרן צ'ונגצ'ינג למדעי הטבע (No. cstc2020jcyj-zdxmX0027) ופרויקט הקרן הלאומית הסינית למדעי הטבע (מס '32270988).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1640 mediumGIBCO, USAC11875500BT
450 nm Stop Solution for TMB SubstrateAbcamab171529-1000 mL
Automated Cell CounterCountstar, ChinaIC1000
BSASigma-Aldrich, USAB2064-100G
Centrifuge 5810 REppendorf, Germany5811000398
Danamic Light ScatteringMalvernZetasizer Nano S90
DOTAPCordenPharma, SwitzerlandO02002
ELISpot Plus: Mouse IFN-gamma (ALP)mabtechab205719
Fetal Bovine SerumGIBCO, USA10099141C
Full-function Microplate ReaderThermo Fisher Scientific, USAVL0000D2
Goat Anti-Mouse IgG1(HRP)Abcamab97240-1mg
Goat Anti-Mouse IgA alpha chain (HRP)Abcamab97235-1mg
Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP)AbcamAb205720-500ug
Goat Anti-Mouse IgG2a heavy chain (HRP)Abcamab97245-1mg
High pressure homogenizerATS
MONTANE 85 PPISEPPIC, FranceL12910
MONTANOX 80 PPISEPPIC, France36372K
OVA257–264Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.NA
OVA323-339Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.NA
Phosphate buffer salineZSGB-bioZLI-9061
Red Blood Cell Lysis BufferSolarbio, ChinaR1010
retinoic acidTCI, JapanTCI-R0064-5G
SqualeneSigma, USAS3626
T10 basic Ultra-TurraxIKA, Germany
TMB ELISA SubstrateAbcamab171523-1000ml
trypsin inhibitorDiamondA003570-0100
Tween-20Macklin, China9005-64-5
Ultraviolet spectrophotometerHitachiU-3900

References

  1. Pulendran, B., Arunachalam, P. S., O'Hagan, D. T. Emerging concepts in the science of vaccine adjuvants. Nat Rev Drug Discov. 20 (6), 454-475 (2021).
  2. Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. Nanoemulsion: A novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability. Recent Pat Nanotech. 14 (4), 276-293 (2020).
  3. Chen, W. L., et al. Disintegration and cancer immunotherapy efficacy of a squalane-in-water delivery system emulsified by bioresorbable poly(ethylene glycol)-block-polylactide. Biomaterials. 35 (5), 1686-1695 (2014).
  4. Iwasaki, A., Omer, S. B. Why and how vaccines work. Cell. 183 (2), 290-295 (2020).
  5. Spadoni, I., Fornasa, G., Rescigno, M. Organ-specific protection mediated by cooperation between vascular and epithelial barriers. Nat Rev Immunol. 17 (12), 761-773 (2017).
  6. Singh, Y., et al. Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery. J Cont Release. 252, 28-49 (2017).
  7. Yan, W. L., Chen, W. S., Huang, L. Mechanism of adjuvant activity of cationic liposome: Phosphorylation of a MAP kinase, ERK and induction of chemokines. Mol Immunol. 44 (15), 3672-3681 (2007).
  8. Korsholm, K. S., et al. The adjuvant mechanism of cationic dimethyldioctadecylammonium liposomes. Immunology. 121 (2), 216-226 (2007).
  9. Agger, E. M., et al. Cationic liposomes formulated with synthetic mycobacterial cordfactor (CAF01): A versatile ddjuvant for vaccines with different immunological requirements. Plos One. 3 (9), e3116(2008).
  10. Slutter, B., et al. Nasal vaccination with N-trimethyl chitosan and PLGA based nanoparticles: Nanoparticle characteristics determine quality and strength of the antibody response in mice against the encapsulated antigen. Vaccine. 28 (38), 6282-6291 (2010).
  11. Nochi, T., et al. Nanogel antigenic protein-delivery system for adjuvant-free intranasal vaccines. Nat Mater. 9 (8), 685-685 (2010).
  12. Henriksen-Lacey, M., et al. Liposomal cationic charge and antigen adsorption are important properties for the efficient deposition of antigen at the injection site and ability of the vaccine to induce a CMI response. J Control Release. 145 (2), 102-108 (2010).
  13. Zhong, X. F., et al. Nanovaccines mediated subcutis-to-intestine cascade for improved protection against intestinal infections. Small. 18 (1), e2105530(2022).
  14. Mora, J. R., et al. Generation of gut-homing IgA-secreting B cells by intestinal dendritic cells. Science. 314 (5802), 1157-1160 (2006).
  15. Iwata, M., et al. Retinoic acid imprints gut-homing specificity on T cells. Immunity. 21 (4), 527-538 (2004).
  16. Hammerschmidt, S. I., et al. Retinoic acid induces homing of protective T and B cells to the gut after subcutaneous immunization in mice. J Clin Invest. 121 (8), 3051-3061 (2011).
  17. Burger, C., Shahzad, Y., Brümmer, A., Gerber, M., du Plessis, J. Traversing the skin barrier with nano-emulsions. Curr Drug Deliv. 14 (4), 458-472 (2017).
  18. Lodaya, R. N., et al. Formulation design, optimization and evaluations of an α-tocopherol-containing self-emulsified adjuvant system using inactivated influenza vaccine. J Cont Release. 316, 12-21 (2019).
  19. Carmona-Ribeiro, A. M., Pérez-Betancourt, Y. Cationic nanostructures for vaccines design. Biomimetics. 5 (3), 32(2020).
  20. Lam, K., et al. trialkyl ionizable lipids are versatile lipid-nanoparticle components for therapeutic and vaccine applications. Adv Mater. 35 (15), e2209624(2023).
  21. Nie, T. Q., et al. Surface coating approach to overcome mucosal entrapment of DNA nanoparticles for oral gene delivery of glucagon-like peptide 1. Acs Appl Mater Inter. 11 (33), 29593-29603 (2019).
  22. Lou, G., et al. Delivery of self-amplifying mRNA vaccines by cationic lipid nanoparticles: The impact of cationic lipid selection. J Cont Release. 325, 370-379 (2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE204DOTAPOVA

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved