Acide rétinoïque encapsulé dans une nanoémulsion cationique en tant qu’adjuvant pour favoriser les réponses systémiques et muqueuses spécifiques de l’OVA

Résumé

Dans ce protocole, nous avons développé un acide rétinoïque (AR) encapsulé dans une nanoémulsion cationique à utiliser comme adjuvant pour favoriser les réponses systémiques et muqueuses spécifiques de l’antigène. En ajoutant l’AR approuvé par la FDA à la nanoémulsion, la sIgA spécifique de l’antigène a été promue dans le vagin et l’intestin grêle après l’injection intramusculaire de la nanoémulsion.

Résumé

Les nanostructures cationiques sont apparues comme un adjuvant et un système d’administration d’antigène qui améliore la maturation des cellules dendritiques, la génération de ROS et l’absorption de l’antigène, puis favorise les réponses immunitaires spécifiques à l’antigène. Ces dernières années, l’acide rétinoïque (AR) a fait l’objet d’une attention croissante en raison de son effet sur l’activation de la réponse immunitaire des muqueuses ; cependant, afin d’utiliser la PR comme adjuvant de la muqueuse, il est nécessaire de résoudre le problème de sa dissolution, de sa charge et de son administration. Ici, nous décrivons un système d’administration d’acide rétinoïque encapsulé dans une nanoémulsion cationique (CNE-RA) composé du lipide cationique 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOTAP), de l’acide rétinoïque, du squalène en tant que phase huileuse, du polysorbate 80 en tant que tensioactif et du trioléate de sorbitan 85 en tant que co-surfactant. Ses propriétés physiques et chimiques ont été caractérisées à l’aide d’une diffusion dynamique de la lumière et d’un spectrophotomètre. L’immunisation des souris avec le mélange d’antigène (ovalbumine, OVA) et d’ANC-RA a significativement augmenté les taux d’immunoglobuline sécrétoire A (sIgA) anti-OVA dans le liquide de lavage vaginal et le liquide de lavage de l’intestin grêle des souris par rapport à l’OVA seul. Ce protocole décrit une méthode détaillée pour la préparation, la caractérisation et l’évaluation de l’effet adjuvant de l’AR-CNE.

Introduction

Les adjuvants sont souvent utilisés pour améliorer l’efficacité d’un vaccin en stimulant le système immunitaire à réagir plus fortement au vaccin, augmentant ainsi l’immunité contre un agent pathogène particulier¹. L’adjuvant de nanoémulsion (NE) fait référence à un système de dispersion colloïdale avec une stabilité thermodynamique en émulsionnant une certaine proportion de phase huileuse et de phase aqueuse pour produire une émulsion sous forme d’eau dans l’huile (P/O) ou d’huile dans l’eau (H/O)². L’adjuvant de nanoémulsion H/E peut produire des cytokines et des chimiokines au site d’injection, induire l’agrégation et....

Protocole

Les expériences sur les animaux ont été réalisées conformément au Guide d’utilisation et de soins des animaux de laboratoire et approuvées par le Comité d’éthique et de bien-être des animaux de laboratoire de la Troisième Université de médecine militaire.

1. Préparation de nanoémulsions (EN)

1. Pour la préparation en phase aqueuse, dissoudre 0,15 g de polysorbate 80 dans 28,2 mL de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) en agitant à 40 °C.
2. Pour la préparation en phase huileuse, utilisez la formulation en phase huileuse de la nanoémulsion illustrée dans le tableau 1. Dissoudre le trile....

Discussion

Dans ce protocole, nous avons développé un acide rétinoïque encapsulé dans une nanoémulsion cationique à utiliser comme adjuvant pour favoriser les réponses systémiques et muqueuses spécifiques de l’antigène. Par rapport aux adjuvants NE traditionnels, il présente les deux avantages suivants. Tout d’abord, en général, la surface des EN H/E a une charge négative élevée, ce qui rend difficile la charge directe des antigènes. Les ENs cationiques peuvent adsorber efficacement les antigènes peptidiques .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
1640 medium	GIBCO, USA	C11875500BT
450 nm Stop Solution for TMB Substrate	Abcam	ab171529-1000 mL
Automated Cell Counter	Countstar, China	IC1000
BSA	Sigma-Aldrich, USA	B2064-100G
Centrifuge 5810 R	Eppendorf, Germany	5811000398
Danamic Light Scattering	Malvern	Zetasizer Nano S90
DOTAP	CordenPharma, Switzerland	O02002
ELISpot Plus: Mouse IFN-gamma (ALP)	mabtech	ab205719
Fetal Bovine Serum	GIBCO, USA	10099141C
Full-function Microplate Reader	Thermo Fisher Scientific, USA	VL0000D2
Goat Anti-Mouse IgG1(HRP)	Abcam	ab97240-1mg
Goat Anti-Mouse IgA alpha chain (HRP)	Abcam	ab97235-1mg
Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP)	Abcam	Ab205720-500ug
Goat Anti-Mouse IgG2a heavy chain (HRP)	Abcam	ab97245-1mg
High pressure homogenizer	ATS
MONTANE 85 PPI	SEPPIC, France	L12910
MONTANOX 80 PPI	SEPPIC, France	36372K
OVA257–264	Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.	NA
OVA323-339	Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.	NA
Phosphate buffer saline	ZSGB-bio	ZLI-9061
Red Blood Cell Lysis Buffer	Solarbio, China	R1010
retinoic acid	TCI, Japan	TCI-R0064-5G
Squalene	Sigma, USA	S3626
T10 basic Ultra-Turrax	IKA, Germany
TMB ELISA Substrate	Abcam	ab171523-1000ml
trypsin inhibitor	Diamond	A003570-0100
Tween-20	Macklin, China	9005-64-5
Ultraviolet spectrophotometer	Hitachi	U-3900