בידוד עוברי מורין במהלך גסטרולציה לריצוף RNA חד-תאי

לפני תחילת בידוד העוברים במורין, נקו את האזור ביסודיות עם 70% אתנול. יש לוודא שכל כלי הדיסקציה נשטפים ומעוקרים. להשיג חמישה מיליליטר של DMEM סטרילי המכיל 10% FBS, ו 20 מיליליטר של DPBS ולהניח אותם על קרח.

לאחר מכן כדי לבצע את בידוד העובר, באמצעות מיקרוסקופ סטריאו עם במת אור משודרת ומצלמה, מניחים את סכר ההריון שהומת כראוי על גבו ומעקרים את האזור הסמוך לפתח הנרתיק באתנול. בעזרת מספריים ופינצטה מרימים את קפל העור ליד פתח הנרתיק ומבצעים חתך קטן בצורת V החושף לאט לאט את הרחם של הסכר ההרה. לאחר מכן נתחו את קרן הרחם של הסכר על ידי החזקת קצה אחד שלה בפינצטה וחיתוך לאורכו.

הקפדה על הסרת צוואר הרחם. מניחים את קרן הרחם לתוך צלחת פטרי 10 ס"מ המכילה DPBS על קרח. בעזרת מספריים ופינצטה מוציאים את שריר הרחם לאורך אתרי ההשתלה וחותכים כל אתר השתלה או פנינים המכילות את הנפיחות הנשירים שבתוכם.

הכניסו אותו ל-DPBS טרי בצלחת פטרי בקוטר שישה סנטימטרים על קרח. קח אתר השתלה אחד. הניחו אותו בצלחת פטרי חדשה בקוטר שישה סנטימטרים על גבי במת המיקרוסקופ הסטריאופוני, והוסיפו לו 500 מיקרוליטר DPBS.

התאימו את מוקד המיקרוסקופ ואת מקור האור. החזיקו את אתר ההשתלה עם סט אחד של פינצטה ביד אחת, וביד השנייה הכניסו לאט זוג מלקחיים נוסף לקצה אתר ההשתלה שנחתך מקרן הרחם, וחשפו בהדרגה את הנפיחות הנשירים. כדי לחשוף את העובר, החזיקו את הקצה האנטי שגוי של הנפיחות הנשירים המבודדת עם זוג מלקחיים אחד ועם הזוג השני, בצעו לאט חתך אופקי כרבע מגודל הנפיחות הנשירית מקצה הניסוי השגוי.

עכשיו עם שתי המלקחיים דוחפים לאט מהקצה האנטי שגוי של הנפיחות הנשירית עד שהעובר יוצא מהקצה הלא חוקי שזה עתה נחתך. לאחר גילוי העובר, יש להסיר רקמות עובריות נוספות המצורפות. אם השק האנדודרמלי הקודקודי וחרוט השליה האקטו אינם יורדים באופן ספונטני מהעובר, השתמש בזוג מלקחיים כדי להסיר אותם יחד עם כל דם אימהי קשור.

לאחר מכן, תוך כדי החזקת העובר עם זוג מלקחיים אחד, לקלף לאט את שק החלמון הקרבי מהעובר באמצעות זוג מלקחיים אחר. אתר את השק האנדודרמלי הקודקודי ואת החרוט האקטושליה. באמצעות פיפטה AP 20, להעביר את שק החלמון עם לא יותר מ 10 מיקרוליטר של DPBS מן הצלחת לתוך צינור PCR שמונה רצועות על קרח.

צלמו תמונות שדה בהירות של עוברים שזה עתה בודדו כדי להבטיח שההיערכות של חברי ההמלטה דומה. עם פיפטה P200 להעביר לאט את העובר עם 50 מיקרוליטר של DMEM המכיל 10% FBS לתוך צינור 1.5 מיליליטר נשמר על קרח. חזור על אותו הדבר עבור כל נפיחות נשירית, באמצעות כלים נקיים ופלסטיק חדש עבור כל בידוד.