Sequenciamento de RNA de célula única de embriões de camundongos inteiros mutantes: do epiblasto ao fim da gastrulação

Nós nos concentramos em decifrar os mecanismos que controlam as decisões iniciais de destino celular durante a diferenciação de células-tronco embrionárias, tanto in vitro quanto em modelos de camundongos. Redes regulatórias complexas orientam a diferenciação durante o desenvolvimento e investigamos como a interação de vias de sinalização, fatores de transcrição e reguladores epigenéticos promove diferentes destinos celulares. Estudar o processo dinâmico e rápido de gastrulação em camundongos é tecnicamente desafiador devido ao pequeno número de células por embrião e ao número limitado de embriões com o genótipo desejado por ninhada.

Embora a literatura mostre extensivamente o estudo de células únicas usando populações de embriões do tipo selvagem ou células ativadas por fluorescência, uma análise abrangente de embriões com mutações de linhagem ainda é limitada. Nosso protocolo oferece a possibilidade de gerar conjuntos de dados ômicos de célula única a partir de embriões gastrulados que abrigam mutações de linhagem. Isso ajudará os cientistas com nenhuma ou limitada experiência no manuseio de camundongos ou que desejam aprender a manipulação precoce de embriões ou abordagens de célula única.

Nosso protocolo ajudará a responder a novas questões científicas sobre gastrulação e organogênese precoce, incluindo o desenvolvimento do coração. Fornecemos um pipeline para analisar embriões mutantes específicos da linhagem na resolução de uma única célula, o que facilitará a análise do papel de genes específicos no comprometimento da linhagem. Esperamos usar essa metodologia para entender os mecanismos regulatórios das decisões de destino celular durante o processo rápido e dinâmico de gastrulação.