ריצוף RNA חד-תאי של עוברי עכברים שלמים מוטנטיים: מהאפיבלסט ועד סוף הגסטרולציה

אנו מתמקדים בפענוח המנגנונים השולטים בהחלטות מוקדמות על גורל התא במהלך התמיינות תאי גזע עובריים, הן במבחנה והן במודלים של עכברים. רשתות רגולטוריות מורכבות מנחות התמיינות במהלך הפיתוח, ואנו חוקרים כיצד יחסי הגומלין בין מסלולי איתות, גורמי שעתוק ומווסת אפיגנטי מקדמים גורלות תאים שונים. חקר התהליך הדינמי והמהיר של גסטרולציה בעכברים הוא מאתגר מבחינה טכנית בשל מספר התאים הקטן לכל עובר והמספר המוגבל של עוברים עם הגנוטיפ הרצוי לכל המלטה.

בעוד שהספרות מראה בהרחבה את המחקר של תאים בודדים באמצעות אוכלוסיות ממוינות של עוברים מסוג בר או תאים המופעלים על ידי פלורסנט, ניתוח מקיף של עוברים עם מוטציות בשושלת עדיין מוגבל. הפרוטוקול שלנו מציע את האפשרות ליצור מערכי נתונים אומיים חד-תאיים מעוברים בעלי מוטציות בשושלת. זה יעזור למדענים ללא ניסיון או ניסיון מוגבל בטיפול בעכבר או שרוצים ללמוד מניפולציה מוקדמת של עוברים או גישות של תא יחיד.

הפרוטוקול שלנו יעזור לענות על שאלות מדעיות חדשות בתחום הגסטרולציה והאורגנוגנזה המוקדמת, כולל התפתחות הלב. אנו מספקים צינור לניתוח עוברים מוטנטיים ספציפיים לשושלת ברזולוציה של תא יחיד, אשר יקל על ניתוח תפקידם של גנים ספציפיים במחויבות השושלת. אנו מקווים להשתמש במתודולוגיה זו כדי להבין את מנגנוני הבקרה של החלטות גורל התא במהלך התהליך המהיר והדינמי של גסטרולציה.