This work is supported by a Baylor University Research Council grant and by a research grant from the Epilepsy Foundation.

עכברי הזכרים הבוגרים המשמשים בניסוי הבא נוצרו ושוכנו באוניברסיטה ביילור בטמפרטורת סביבה של 22 מעלות צלזיוס, עם אור 14 שעות ו -10 שעות חשכה (20:00-06:00 HR) מחזור יומי. עכברי גישה כרצונך מודעת מזון ומים היו נתון. כל הנהלים לעכברים היו בעמידה במכון הלאומי לבריאות הנחיות לטיפול והשימוש בחי מעבדה ופרוטוקול בעלי החיים אושרו על ידי אוניברסיטה ביילור טיפול בבעלי חיים ושימוש הוועדה. עכברים נבדקו בבוקר / אחר הצהריים המוקדמים מאוחר. לכל הנהלים מתחת לחוקר צריך ללבוש כפפות כדי למנוע ריחות ולמנוע זיהום. 1. הכנה של ריחות ללא חברתיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן ריחות הלא-חברתיים טריים בכל יום של בדיקות. הערה: החוקר צריך להשתמש בכפפות כדי להכין את הריחות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא 3 צינורות צנטריפוגה עם 10 מיליליטר של מים בכל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> של תמצית בננת פיפטה 100 μl למיליליטר 15 &amp; #160; צינור חרוטי ושל תמצית שקדים 100 μl לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר שני לדילול 1: 100. הערה: שפופרת 15 מיליליטר השלישי רק תכיל מים. </li></ol></li></ol> 2. הכנה של ריחות חברתיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן ריחות חברתיים טריים על בדיקות בוקר תתרחש. להשיג ריחות חברתיים משני כלובים שלא נוקו במשך לפחות שלושה ימים ומכילים מספר שווה של עכברים. להשיג ריחות חברתיים מעכברים מאותו המין כנושא הבדיקה. שים לב: אלה הם להיות מאוחסנים ב RT ויש להשתמש תוך 4-6 שעות כדי לשמור על ריח חזק ועקבי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע כמה להיווצר ריח חברתי צמר גפן צריך: כל עכבר נבדק יוצג עם שלוש ספוגיות מהריח חברתי 1, ושלוש מריח חברתי 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן ריחות חברתיים על ידי ניגוב מקלון צמר גפן בצורה זיגזג בחלקו התחתון של כלוב מלוכלך. להתנער כל מצעים עודפים נצמדו לקצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מטליות חנות בצנצנות זכוכית גדולות עם מכסים או בכוסות מכוסות parafilm. לייעד מיכל אחד לריח חברתי 1 ושני לריח חברתי 2. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על כלובי מקור ריח מחוץ לחדר הבדיקה הניסיוני. </li></ol> 3. הסתגלות של עכבר המבחן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים כפפות ולשקול את העכבר כדי להיבדק ולמקם בנפרד בכלוב נקי עם מכסה חוט על גבי ואת בקבוק המים הוסר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר העכבר כדי להסתגל לכלוב החדש במשך 45 דקות בחדר אחר מחדר הבדיקה. ודא שאין ריחות או רעשים חריגים בחדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבדיקה נמשכת כ -45 דקות, מתנודד הפעמים הסתגלות על ידי הצבת העכבר הבא להיבדק לכלוב נקי להסתגל תקין לפני בדיקת העכבר הנוכחי. </li></ol> 4. הכנת לחדר הבדיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים ספוגיות כותנה טריות, קלטת מעבדה, בקבוקים המכילים דגימות ריח חברתיות, צינורות של nריחות על-חברתי, micropipette, שני השעונים, ובקבוק פסולת עם מכסה בחדר הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שחדר הבדיקה ללא תשלום סביר של ריחות, רעשים חזקים, ואור בהיר. אל תלבשו קולון או קרמים ריחניים. הערה: המשקיף לא צריך להיות מסטיק או סוכרייה בתקופת הבדיקה וצריך לנסות להגביל את החשיפה שלהם למזון ריח חזק. </li></ol> 5. בדיקת נוהל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא את העכבר התאקלם בכלוב שלה לחדר הבדיקות ולמקם את הכלוב על הדלפק בגובה שנוח לצפייה תוך כדי ישיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג כל ריח 3 פעמים ברציפות למשך 2 דקות בכל פעם. השתמש כדי המצגת שניתן למצוא בטבלה 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 50 μl של odorant בריח להיבדק על קצה מקלון צמר גפן ומחדש כובע מקור הריח. הרם את ראש החוט של הכלוב ולהכניס את הקצה ללא בישום, עץ של הספוגית לפתיחת בקבוק מים, בלדחוףז האורך דרך מהחלק התחתון של החוט לפסגה. הימנע מלגעת בקצה הכותנה לכל דבר, כוללים אצבעות, כך שזיהום הריח הוא נמנע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמשיך לצייר את הספוגית דרך הפתח בקבוק מים עד כ 1 אינץ &#39;של סוף הכותנה נתקע למטה לתוך הכלוב. להדביק סוף העץ של הספוגית לצד השני של הכלוב באמצעות מעבדה קלטת. הערה: היזהר לא לתת את המכסה נופלת חזרה אל הכלוב, גרימת רעש חזק שיפריע עכבר המבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד תתחיל עיתוי למשך 2 דקות. השתמש טיימר אחד לעת את מצגת 2 דקות. רשום את הזמן המצטבר בילה מרחרח את הריח במהלך משפט 2 דקות. רוזן התנהגות הרחרוח של בעלי החיים באמצעות שעון עצר נפרד. מרחרח פעיל מוגדר כאשר האף של בעלי החיים מכוון לקצה הכותנה עם האף ~ 2 סנטימטר שלה או קרוב יותר לקצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השלמת כל ניסוי, הרם את המכסה התיל ולהסיר את קלון צמר גפן על ידי משיכתו כלפי מטה דרך האו&quot;םderside של המכסה (זה מונע זיהום על ידי מניעת ריח קצה הכותנה מלגעת בחוט). חותם את הספוגית בשימוש בבקבוק 500 מיליליטר פסולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין ולהכניס את הספוגית הבאה ולהתחיל עיתוי. לאפשר כ 1 דקות בין כל מרווח בין משפט. תמשיך עד שכל ריח הוצג שלוש פעמים ברציפות, למשך 2 דקות בכל פעם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר העכבר השלים את כל הניסויים, רוקן את בקבוק הפסולת המכיל צמר גפן משמש בפח אשפה מחוץ לחדר הבדיקה. החזר את העכבר לכלוב בבית שלה. </li></ol> 6. ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח נתונים עבור כל קבוצה למצב ריח באמצעות דו-כיוונית ANOVA ואחרי ניומן-Keuls או בדיקה דומה פוסט הוק כדי לקבוע התרגלות משמעותית (פחות זמן מרחרחים אותו ריחות רצופים), וdishabitutation (יותר זמן מרחרח ריח חדש). </li></ol>

<ol>
	<li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor-guided+behavior+in+mammals.">Odor-guided behavior in mammals.</a> Experientia. 42, 257-271 (1986).</li><li>Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+views+on+the+distinct+but+related+roles+of+the+main+and+accessory+olfactory+systems+in+responsiveness+to+chemosensory+signals+in+mice.">Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice.</a> Horm Behav. 46, 247-256 (2004).</li><li>Keverne, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+olfactory+and+vomeronasal+systems+for+male+sexual+function.">Importance of olfactory and vomeronasal systems for male sexual function.</a> Physiol Behav. 83, 177-187 (2004).</li><li>Gregg, B., Thiessen, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+olfactory+discrimination+of+urines+for+the+Mongolian+gerbil,+Meriones+unguiculatus.">A simple method of olfactory discrimination of urines for the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus.</a> Physiol Behav. 26, 1133-1136 (1981).</li><li>Yang, M., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+behavioral+assessment+of+mouse+olfaction.">Simple behavioral assessment of mouse olfaction.</a> Curr Protoc Neurosci. Chapter 8 (Unit 8 24), (2009).</li><li>Pan, Y. W., Kuo, C. T., Storm, D. R., Xia, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+and+targeted+deletion+of+the+ERK5+MAP+kinase+in+adult+neurogenic+regions+impairs+adult+neurogenesis+in+the+olfactory+bulb+and+several+forms+of+olfactory+behavior.">Inducible and targeted deletion of the ERK5 MAP kinase in adult neurogenic regions impairs adult neurogenesis in the olfactory bulb and several forms of olfactory behavior.</a> PLoS ONE. 7, e49622 (2012).</li><li>Wesson, D. W., Levy, E., Nixon, R. A., Wilson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+correlates+with+amyloid-beta+burden+in+an+Alzheimer's+disease+mouse+model.">Olfactory dysfunction correlates with amyloid-beta burden in an Alzheimer's disease mouse model.</a> J Neurosci. 30, 505-514 (2010).</li><li>Fadool, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kv1.3+channel+gene-targeted+deletion+produces+'Super-Smeller+Mice'+with+altered+glomeruli,+interacting+scaffolding+proteins,+and+biophysics.">Kv1.3 channel gene-targeted deletion produces 'Super-Smeller Mice' with altered glomeruli, interacting scaffolding proteins, and biophysics.</a> Neuron. 41, 389-404 (2004).</li><li>Arakawa, H., Arakawa, K., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scent+marking+behavior+in+male+C57BL/6J+mice:+sexual+and+developmental+determination.">Scent marking behavior in male C57BL/6J mice: sexual and developmental determination.</a> Behav Brain Res. 182, 73-79 (2007).</li><li>Baum, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+differentiation+of+pheromone+processing:+links+to+male-typical+mating+behavior+and+partner+preference.">Sexual differentiation of pheromone processing: links to male-typical mating behavior and partner preference.</a> Horm Behav. 55, 579-588 (2009).</li><li>Ferguson, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+amnesia+in+mice+lacking+the+oxytocin+gene.">Social amnesia in mice lacking the oxytocin gene.</a> Nat Genet. 25, 284-288 (2000).</li><li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+sociability+in+BTBR+T+tf/J+mice+is+independent+of+partner+strain.">Low sociability in BTBR T+tf/J mice is independent of partner strain.</a> Physiol Behav. 107, 649-662 (2012).</li><li>Best, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-associative+learning+in+larval+zebrafish.">Non-associative learning in larval zebrafish.</a> Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).</li><li>Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modulation+of+memory+formation+in+larval+zebrafish.">Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2011).</li><li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+exposure+to+males,+including+men,+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents.">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nat Methods. 11, 629-632 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

התוצאות אמורות במאמר זה הן אופטימליות לעכברים. העכברים להפגין תגובה חזקה לריח רומן, אז להרגיל מהירות. אחד הצעדים המרכזיים בשיטה זו היא ההכנה של הריחות. החוקר צריך לקחת בזהירות רבה כדי לבודד את הריחות מזה על מנת למנוע זיהום. היבט נוסף מפתח הוא ההצגה של מקלון צמר גפן. הח?...

עכברים תלויים בolfaction לניווט סביבות חדשות, מציאת מזון, להכרה באנשים אחרים, והתנהגות מינית 1-3. זה חיוני כי חוקרים לקבוע אם או לא יש לי חיות ניסוי חוש ריח תפקוד לפני מתן בדיקות התנהגותיות הכוללות מזון, אינטראקציה חברתית, או כל ריחות שנועדו לעורר תגובה מהעכבר. תתרנות או חוסר היכולת להבחין בין ריחות שונים, עלול לגרום לתוצאות חיוביות או שליליים שגויות במגוון רחב של פרדיגמות התנהגות, כך היכולת של עכבר כדי לזהות ולהבחין ריחות יש לקבוע לפני סוגים אחרים של בדיקות התנהגותיות מבוצעים. מבחן ההתרגלות / dishabituation חוש הריח תואר לראשונה בשנת 1980 4. הבדיקה הותאמה לשימוש בעכברים על ידי בני הזוג. מו יאנג וז&#39;קלין קראולי 5. זוהי בדיקה פשוטה וזולה שמאפשרת לחוקר לestaמלמולים שעכבר יכול לזהות ולהבדיל בין ריחות. בנוסף לבדיקת חוש ריח, בדיקה זו מאפשרת לחוקר לבחון את ההתנהגות הכללית של העכבר וצריך להיעשות מוקדם במשטר בדיקות. תצפיות איכותיות בדבר התנועה של העכבר, סימנים של חרדה, רמת הפעילות, ותגובה לריחות חברתיים לעומת ריחות מזון עשויות לאותת אזורים החדשים שבו בדיקה יכולה להתבצע. בבדיקה זו, צמר גפן טבול בריחות שונים מוצגים לעכבר שלוש פעמים ברציפות. עם כל הצגה חוזרת ונשנית של ריח, העכבר להרגיל לקלון צמר גפן, מבלה פחות זמן חוקר אותו בכל מצגת שלאחר מכן. כאשר ריח חדש מוצג, dishabituation מתרחש, ועכבר טיפוסי לבלות יותר זמן חוקר את הספוגית, מצביע על כך שהוא יכול להבחין בין הריחות הנוכחיים וקודמים 5. בדיקה זו ניתנת לעכבר אחד בכל פעם וכוללת ACC 45 דקותתקופת limation אחרי 45 דקות של בדיקות. למרות שבדיקה זו היא קלה לביצועה ניתן להשתמש כדי לחקור שאלות מתוחכמות על מערכת חוש הריח עכבר. בדיקות אחרות פופולריות של olfaction, כגון בדיקת מזון הקבור, פשוט להקים את הנוכחות או עדר של תתרנות. עם זאת, בדיקת האפליה והתרגלות חוש הריח מאפשרת לחוקר כדי לקבוע שעכבר יש את היכולת לזהות ריחות אבל יכול להבחין בין ריחות שונים לא רק. הדפוס של התרגלות וdishabituation נעשה שימוש כדי לקבוע, כי מוטציות חדשות יכולות להפלות בין ריחות 6,7. במחקר מפתיע, Fadool ועמיתיו השתמשו תערובות מורכבות של ריחות להראות עכברים שעם מחיקה ממוקדת-גן של ערוץ Kv1.3 הם &quot;smellers סופר&quot; שיכול להבחין ריחות דומים מאוד טובים יותר מעכברים רגילים 8. כאשר בוחן מודל עכבר נוקאאוט חדש כדאי establisשעות הנוכחות של התנהגות נורמלית למשימות חושיות בסיסיות. כאשר נעשו בשלב מוקדם במשטר בדיקות, אפליית הריח ובדיקת הרגלה נותנת חוקר את ההזדמנות כדי לבחון כל התנהגויות יוצאות דופן. תצפיות אלה יכולים למנוע תוצאות חיוביות או שליליות כוזבות בבדיקה הבאה שניתן לייחסם לבלבול מאפיינים של המוטציה. כחוקרים ממשיכים לחקור התנהגות חברתית הצורך לוודא תפקוד חוש הריח בסיסי הופך להיות חשוב יותר ויותר. בנוסף לבחינת olfaction בקווים מוטנטים, בדיקה זו יכולה לשמש כדי לענות על שאלות ספציפיות כגון האם טיפול תרופתי ספציפי מגדיל תגובה של בעלי חיים לגירויי ריח חברתיים או אם עליות תגובתם לגירויי כל הריח.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mouse cage</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>Standard mouse cage</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Wire lid</td>
			<td rowspan="2">Allentown</td>
			<td>BCU Mouse WBL 2500</td>
			<td rowspan="2"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bedding</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>7090 Sani-Chips</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89031-270</td>
			<td>6&#8221; wooden handle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Banana extract</td>
			<td>McCormick</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Almond extract</td>
			<td>McCormick</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory tape</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89098-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stop watch</td>
			<td>VWR</td>
			<td>62374-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timing device</td>
			<td>VWR</td>
			<td>61161-350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 L beakers&#160;</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td align="right">1003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Parafilm</td>
			<td>PM-992</td>
			<td>4&#8221; x 250&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L bottle with cap</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89000-240</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing for odor discrimination and habituation in mice

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the mouse can discriminate between non-social odors and social odors, whether the mouse habituates to a repeatedly presented odor, and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented with a novel odor. Since many social behavior tests measure the experimental animal&#8217;s response to a familiar or novel mouse, false positives can be avoided by establishing that the animals can detect and discriminate between social odors. There are similar considerations in learning tests such as fear conditioning that use odor to create a novel environment or olfactory cues as an associative stimulus. Deficits in the olfactory system would impair the ability to distinguish between contexts and to form an association with an olfactory cue during fear conditioning. 
In the odor habitation/dishabituation test, the mouse is repeatedly presented with several odors. Each odor is presented three times for two minutes. The investigator records the sniffing time directed towards the odor as the measurement of olfactory responsiveness. A typical mouse shows a decrease in response to the odor over repeated presentations (habituation). The experimenter then presents a novel odor that elicits increased sniffing towards the new odor (dishabituation). After repeated presentation of the novel odor the animal again shows habituation. This protocol involves the presentation of water, two or more non-social odors, and two social odors. In addition to reducing experimental confounds, this test can provide information on the function of the olfactory systems of new knockout, knock-in, and conditional knockout mouse lines.

בעקבות הפרוטוקול המתואר, תוצאות נרשמו באמצעות עשרה מבוגרים (יום לידה 90-120) זכר C57BL / 6J ושמונה זן גברי FVB מעורב-רקע (יום לידה 50-70). הבדיקה בוצעה על ידי חוקר יחיד על פני ימים רבים. כל נקודה על הגרפים מייצגת את המשך הזמן הממוצע חוקר ריח. כא?...

Watch this Scientific Journal Video about Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice at JoVE.com

Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice

This manuscript describes a protocol to examine the olfactory system of rodents. The olfactory habituation/dishabituation test will allow investigators to determine whether a mouse habituates to a repeatedly presented odor and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented a novel odor.

בדיקה לריח אפליה והרגלה בעכברים

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the ...

testing-for-odor-discrimination-and-habituation-in-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

17.5K Views.  Baylor University. This manuscript describes a protocol to examine the olfactory system of rodents. The olfactory habituation/dishabituation test will allow investigators to determine whether a mouse habituates to a repeatedly presented odor and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented a novel odor. 

Video: Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association between environmental cues and aversive experiences. In this test, mice are placed into a conditioning chamber and are given parings of a conditioned stimulus (an auditory cue) and an aversive unconditioned stimulus (an electric footshock). After a delay time, the mice are exposed to the same conditioning chamber and a differently shaped chamber with presentation of the auditory cue. Freezing behavior during the test is measured as an index of fear memory. To analyze the behavior automatically, we have developed a video analyzing system using the ImageFZ application software program, which is available as a free download at http://www.mouse-phenotype.org/. Here, to show the details of our protocol, we demonstrate our procedure for the contextual and cued fear conditioning test in C57BL/6J mice using the ImageFZ system. In addition, we validated our protocol and the video analyzing system performance by comparing freezing time measured by the ImageFZ system or a photobeam-based computer measurement system with that scored by a human observer. As shown in our representative results, the data obtained by ImageFZ were similar to those analyzed by a human observer, indicating that the behavioral analysis using the ImageFZ system is highly reliable. The present movie article provides detailed information regarding the test procedures and will promote understanding of the experimental situation.

This article presents a protocol for a contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system to assess fear learning and memory in mice.

אוויר מבחן הקשר ורמז פחד באמצעות מערכת ניתוח וידאו בעכברים

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Barnes Maze Testing Strategies with Small and Large Rodent Models

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land (Barnes) mazes. Improved performance over sessions or trials is thought to reflect learning and memory of the escape cage/platform location. Considered less stressful than water mazes, the Barnes maze is a relatively simple design of a circular platform top with several holes equally spaced around the perimeter edge. All but one of the holes are false-bottomed or blind-ending, while one leads to an escape cage. Mildly aversive stimuli (e.g.&#160;bright overhead lights) provide motivation to locate the escape cage. Latency to locate the escape cage can be measured during the session; however, additional endpoints typically require video recording. From those video recordings, use of automated tracking software can generate a variety of endpoints that are similar to those produced in water mazes (e.g.&#160;distance traveled, velocity/speed, time spent in the correct quadrant, time spent moving/resting, and confirmation of latency). Type of search strategy (i.e.&#160;random, serial, or direct) can be categorized as well. Barnes maze construction and testing methodologies can differ for small rodents, such as mice, and large rodents, such as rats. For example, while extra-maze cues are effective for rats, smaller wild rodents may require intra-maze cues with a visual barrier around the maze. Appropriate stimuli must be identified which motivate the rodent to locate the escape cage. Both Barnes and water mazes can be time consuming as 4-7 test trials are typically required to detect improved learning and memory performance (e.g.&#160;shorter latencies or path lengths to locate the escape platform or cage) and/or differences between experimental groups. Even so, the Barnes maze is a widely employed behavioral assessment measuring spatial navigational abilities and their potential disruption by genetic, neurobehavioral manipulations, or drug/ toxicant exposure.

The dry-land Barnes maze is widely used to measure spatial navigation ability in response to mildly aversive stimuli. Over consecutive days, performance (e.g.&#160;latency to locate escape cage) of control subjects improves, indicative of normal learning and memory. Differences between rats and mice necessitate apparatus and methodology changes that are detailed here.

בארנס מבוך אסטרטגיות בדיקה עם קטן ומודלים מכרסמים גדולים

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure multiple dimensions of unconditioned behavior in small laboratory mammals (e.g., mice, rats, tree shrews and small primates). This paradigm is a valuable alternative for the use of a behavioral test battery, since a broad behavioral spectrum of an animal&#8217;s behavioral profile can be investigated in one single test.
The apparatus consists of a box, representing the &#8216;protected&#8217; area, separated from a group compartment. A board, on which small cylinders are staggered in three lines, is placed in the center of the box, representing the &#8216;unprotected&#8217; area of the set-up. The cognitive abilities of the animals can be measured by baiting some cylinders on the board and measuring the working and reference memory. Other unconditioned behavior, such as activity-related-, anxiety-related- and social behavior, can be observed using this paradigm. Behavioral flexibility and the ability to habituate to a novel environment can additionally be observed by subjecting the animals to multiple trials in the mHB, revealing insight into the animals&#8217; adaptive capacities.
Due to testing order effects in a behavioral test battery, na&#239;ve animals should be used for each individual experiment. By testing multiple behavioral dimensions in a single paradigm and thereby circumventing this issue, the number of experimental animals used is reduced. Furthermore, by avoiding social isolation during testing and without the need to food deprive the animals, the mHB represents a behavioral test system, inducing if any, very low amount of stress.

This protocol describes the modified hole board, which is a behavioral test set-up that comprises the characteristics of an open field and a traditional hole board. This set-up enables the differential analysis of unconditioned behavior of small laboratory mammals as well as the analysis of cognitive abilities.

מועצת החור השתנה - מדידת התנהגות, קוגניציה ואינטראקציה חברתית בעכברים וחולדות

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Testing Sensory and Multisensory Function in Children with Autism Spectrum Disorder

In addition to impairments in social communication and the presence of restricted interests and repetitive behaviors, deficits in sensory processing are now recognized as a core symptom in autism spectrum disorder (ASD). Our ability to perceive and interact with the external world is rooted in sensory processing. For example, listening to a conversation entails processing the auditory cues coming from the speaker (speech content, prosody, syntax) as well as the associated visual information (facial expressions, gestures). Collectively, the &#8220;integration&#8221; of these multisensory (i.e., combined audiovisual) pieces of information results in better comprehension. Such multisensory integration has been shown to be strongly dependent upon the temporal relationship of the paired stimuli. Thus, stimuli that occur in close temporal proximity are highly likely to result in behavioral and perceptual benefits &#8211; gains believed to be reflective of the perceptual system&#39;s judgment of the likelihood that these two stimuli came from the same source. Changes in this temporal integration are expected to strongly alter perceptual processes, and are likely to diminish the ability to accurately perceive and interact with our world. Here, a battery of tasks designed to characterize various aspects of sensory and multisensory temporal processing in children with ASD is described. In addition to its utility in autism, this battery has great potential for characterizing changes in sensory function in other clinical populations, as well as being used to examine changes in these processes across the lifespan.

We describe how to implement a battery of behavioral tasks to examine the processing and integration of sensory stimuli in children with ASD. The goal is to characterize individual differences in temporal processing of simple auditory and visual stimuli and relate these to higher order perceptual skills like speech perception.

בדיקת תפקוד חושי ורב-חושי בילדים עם הפרעת ספקטרום האוטיזם

In addition to impairments in social communication and the presence of restricted interests and repetitive behaviors, deficits in sensory processing are ...

Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment

The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, including neurocognitive disorders such as Alzheimer&#8217;s disease. However, the background strain of the mouse model used can have a substantial effect on the observed behavioral phenotype, with some strains exhibiting superior learning ability relative to others. To ensure differences between transgene negative and transgene positive mice can be detected, identification of a training procedure sensitive to the background strain is essential. Failure to tailor the MWM protocol to the background strain of the mouse model may lead to under- or over- training, thereby masking group differences in probe trials. Here, a MWM protocol tailored for use with the F1 FVB/N x 129S6 background is described. This is a frequently used background strain to study the age-dependent effects of mutant P301L tau (rTg(TauP301L)4510 mice) on the memory deficits associated with Alzheimer&#8217;s disease. Also described is a strategy to re-optimize, as dictated by the particular testing environment utilized.

This manuscript describes a Morris water maze (MWM) protocol tailored for use with a commonly used mouse model of Alzheimer's disease. The MWM is widely used in transgenic mouse models. Implementation of a procedure sensitive to the background strain of the mouse model is essential for detecting group differences.

מבחן מוריס מים מבוך: אופטימיזציה לזני עכבר ובדיקת איכות סביבה

 The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, ...

A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent studies demonstrate that environmental enrichment decreases adiposity, increases energy expenditure, resists diet induced obesity, and causes cancer remission and inhibition in mice. EE typically consists of larger living space, a variety of &#8216;toys&#8217; to interact with, running wheels, and can include a number of other novel environmental changes. All of this fosters a more complex social engagement, cognitive and physical stimulations. Importantly, the toy location and type of toy is changed regularly, which encourages the mice to adapt to a frequently changing and novel environment. Many variables can be manipulated in EE to promote health effects in mice. Thus these approaches are difficult to control and must be properly managed to successfully replicate the associated phenotypes. Therefore, the goal of this video is to demonstrate how EE is properly set up and maintained to assure a complex, challenging, and controlled environment so that other researchers can easily reproduce the protective effects of EE against obesity and cancer.

Environmental enrichment for mice requires a complex and challenging setup, as well as comprehensive husbandry and handling techniques to assure robust metabolic and anti-cancer effects in the mice. This protocol provides detailed procedures to reproduce the above mentioned effects in mice.

פרוטוקול לעכברי שיכון בסביבה מועשרת

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent ...

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected with aging and is a strong predictor of neurodegenerative diseases. Thus, olfaction testing is used as a non-invasive diagnostic method to detect neurological deficits early on. In order to understand the mechanisms underlying olfactory network susceptibility, olfactory research in rodents has gained momentum in the past decade.
Here, we present a very simple, time efficient and reproducible olfactory testing method of innate odor perception and sensitivity in mice without the need of any prior food or water restriction. The tests are performed in a familiar environment to the mice, require only the scents and a 2 min session of odorant exposure. The analysis is performed, post-hoc, using computer-assisted commands on ImageJ and can be, therefore, carried out from start to end by one researcher.
This protocol does not require any special hardware or setup and is indicated for any laboratory interested in testing olfactory perception and sensitivity.

We present a simple and unbiased olfactory test in mice. With this protocol olfactory discrimination, preference, avoidance and sensitivity to a novel odor as compared to water can be assessed in single behavioral sessions. This method is indicated for a single experimenter and analysis is based on computer-assisted video processing.

פשוט וחוש ריח בדיקה לעכברים בסיוע מחשב

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

Testing for Metacognitive Responding Using an Odor-based Delayed Match-to-Sample Test in Rats

Metamemory involves the cognitive ability to assess the strength of one&#39;s memories. To explore the possibility of metamemory in non-human animals, numerous behavioral tasks have been created, many of which utilize an option to decline memory tests. To assess metamemory in rats, we utilized this decline-test option paradigm by adapting previous visual delayed-match-to-sample tests (DMTS)1,2 developed for primate species to an odor-based test suitable for rodents. First,&#160;rats are given a sample to remember by digging in a cup of scented sand. After a delay, the rat is presented with four distinctly scented cups, one of which contains the identical scent experienced during the sample; if this matching cup is selected, then the rat obtains a preferred, larger reward. Selection of any of the other three non-matching sand-filled scented cups results in no reward. Retention intervals are individually titrated such that subjects perform between 40 and 70% correct, therefore ensuring rats sometimes remember and sometimes forget the sample. Here, the operational definition of metamemory is the ability to distinguish between the presence and absence of memory through behavioral responding. Towards this end, on two-thirds of trials, a decline option is presented in addition to the four choice cups (choice trials). If the decline-test option- an unscented colored sand cup, is selected, the subject receives a smaller less-preferred reward and avoids the memory test. On the remaining third of trials, the decline-test option is not available (forced trials), causing subjects to guess the correct cup when the sample is forgotten. On choice tests, subjects that know when they remember should select the decline option when memory is weak rather than take the test and choose incorrectly. Therefore, significantly higher performance on chosen tests as compared to forced memory tests is indicative of the adaptive use of the decline-test response and metacognitive responding.

This protocol describes a method for investigating the possibility of metamemory, or memory awareness, in rodents. The odor-based delayed-matching-to-sample paradigm is a novel, ecologically-relevant behavioral test useful for determining the extent to which rodents can adaptively respond based on cognitively monitoring the strength of their memory states.

בדיקת Metacognitive להגיב באמצעות מבוסס על ריח מושהית מבחן התאמה-כדי-Sample בחולדות

Metamemory involves the cognitive ability to assess the strength of one&#39;s memories. To explore the possibility of metamemory in non-human animals, ...

Measuring Active and Passive Tameness Separately in Mice

Domesticated animals such as dogs and laboratory mice show a high level of tameness, which is important for humans to handle them easily. Tameness has two behavioral components: a reluctance to avoid humans (passive tameness) and a motivation to approach humans (active tameness). To quantify these components in mice, we previously developed behavioral tests for active tameness, passive tameness, and the willingness to stay on a human hand, each designed to be completed within 3 min. The data obtained were used for selective breeding, with a large number of mice analyzed per generation. The active tameness test measures the movement of the mouse toward a human hand and the contact it engages in. The passive tameness test measures the duration of time that a mouse tolerates human touch. In the stay-on-hand test, a mouse is placed on a human hand and touched slowly using the thumb of that hand; the duration of time that the animal remains on the hand is measured. Here, we describe the test set-up and apparatus, explain the procedures, and discuss the appropriate data analysis. Finally, we explain how to interpret the results.

Tameness in animals includes a reduction of avoidance responses to humans (passive tameness) and an increase in active approaches to humans (active tameness). Here, we describe detailed protocols for three behavioral tests (active tameness, passive tameness, and stay-on-hand tests) to separately measure the active and passive tameness of mice.

מדידת Tameness פעילים וסבילים בנפרד בעכברים

Domesticated animals such as dogs and laboratory mice show a high level of tameness, which is important for humans to handle them easily. Tameness has two ...

A Wind Tunnel for Odor Mediated Insect Behavioural Assays

Olfaction is the most important sensory mechanism by which many insects interact with their environment and a wind tunnel is an excellent tool to study insect chemical ecology. Insects can locate point sources in a three-dimensional environment through the sensory interaction and sophisticated behavior. The quantification of this behavior is a key element in the development of new tools for pest control and decision support. A wind tunnel with a suitable flight section with laminar air flow, visual cues for in-flight feedback and a variety of options for the application of odors can be used to measure complex behaviour which subsequently may allow the identification of attractive or repellent odors, insect flight characteristics, visual-odor interactions and interactions between attractants and odors lingering as background odors in the environment. A wind tunnel holds the advantage of studying the odor mediated behavioural repertoire of an insect in a laboratory setting. Behavioural measures in a controlled setting provide the link between the insect physiology and field application. A wind tunnel must be a flexible tool and should easily support the changes to setup and hardware to fit different research questions. The major disadvantage to the wind tunnel setup described here, is the clean odor background which necessitates special attention when developing a synthetic volatile blend for field application.

Here, we describe the construction and use of a wind tunnel for odor mediated behavioural assays with insects. The wind tunnel design facilitates the release of odor sources by several methods, with and without visual stimuli. Wind tunnel experiments are important methods to identify behaviorally active volatile chemicals.

במנהרת רוח עבור ריח מתווכת מבחני התנהגותי חרקים

Olfaction is the most important sensory mechanism by which many insects interact with their environment and a wind tunnel is an excellent tool to study ...