Los autores no tienen ningún reconocimiento.

todos los procedimientos con animales, incluyendo el método y la duración de la anestesia, así como cuidados postoperatorios, se habla con un veterinario y aprobados por la atención institucional Animal y el Comité uso (IACUC) en el institución afiliada. En este manuscrito, todos los procedimientos se realizaron con 8 a ratones machos de 15 semanas de edad C57BL/6 y el protocolo sigue las pautas de cuidado de los animales aprobadas por el IACUC en la Universidad de Colorado.
 1. preparación de la tubería Nota: para infundir el inóculo, una aguja conectada a la tubería de polietileno (PE) ( figura 1A) o un calibre pequeño (&#60; 24 G) angiocatéter puede ser usado ( figura 1). El uso de un angiocatéter no requiere ninguna preparación excepto esterilización con 70% de etanol (EtOH). El inóculo es la sustancia que es inculcada/inyección/depositado en las vías urinarias. Esto puede ser una solución que contiene bacterias, virus o un químico. Esto se prepara antes de tiempo y por el protocolo de investigación. Por ejemplo, si el estudio pretende evaluar los efectos de la infección por e. coli en las vías urinarias inferiores, el investigador tendrá que preparar el inóculo que contiene bacterias, que pueden ser inoculados/instilado en las vías urinarias bajas.
<ol><li>Preparación de la aguja unida a la tubería de PE es simple y consiste en lo siguiente: elegir el tamaño de la tubería de PE basado en el órgano Diana y la edad de un animal. Para animales menores de 12 semanas, utilice tubería de PE-10 (diámetro exterior es de 0,024 pulgadas y diámetro interior es de 0,011 pulgadas). Tubería de PE-10 sugiere para ser aplicable para (1) la siembra primaria de inóculo en el anterior (AP) de la próstata y las vesículas seminales (SV), o (2) la siembra primaria de inóculo en la vejiga de un animal de menos de 12 semanas de edad. Tubería de PE con un diámetro de hasta 50 PE (fuera de diámetro 0,038 pulgadas y diámetro hasta 0,023 pulgadas interior) puede ser utilizado para la siembra primaria de inóculo en la vejiga de los animales de mayores tamaño.</li>
	<li>Corte aproximadamente 2,5 pulgadas de tubería de PE.</li>
	<li>Seleccione la aguja que se ajuste el diámetro PE seleccionado para ser utilizado. Una aguja de 27 G puede caber en el lumen del tubo de PE-10, y una aguja de 22 G adapta a la luz del tubo de PE-50.
	<ol><li>Prepare la aguja antes de la inserción en la tubería de PE frotando el borde afilado de la aguja en una piedra de aceite disponible en el mercado ( figura 1A -B) que sea opaco, o usar un blunt comercialmente disponible aguja.</li>
	</ol></li> <li>Introducir la aguja embotada ( figura 1) en el lumen de la tubería de PE. Evitar daños en el lumen o entrada en un lumen falso asegurándose de que los restos de la aguja en el centro del lumen. ( figura 1 -E). Si la tubería de PE se daña durante la inserción de la aguja embotada, corte el extremo dañado y reiniciar el proceso.</li>
	<li>Coloque la tubería de PE conectado a la aguja en el 70% de EtOH para esterilización hasta su uso para el procedimiento. Descarga el 70% EtOH a través del tubo de PE de aguja para esterilizar la luz y allí es no hay fugas de la tubería de PE de daño durante el proceso de inserción de la aguja. Si hay fugas, desechar el tubo de la aguja-PE. 
	Nota: La punta de la tubería de PE debe ser liso antes de cateterismo. Para evitar problemas con la introducción de la tubería de PE en la uretra, se recomienda cortar la punta de la tubería de PE inmediatamente antes del cateterismo ( Figura 1F). La longitud mínima sugerida de la tubería de PE es de 1,5 pulgadas, que incluye la parte que rodea la aguja.</li>
</ol> 2. Procedimiento de cateterismo <ol><li>antes de la inducción de la anestesia, vaciar la vejiga del ratón de.
	<ol><li>Aplicar presión suave y masaje a la parte inferior del abdomen del ratón. Estas maniobras suelen provocar micción espontánea. Una vejiga llena puede resultar en la dilución o pérdida inmediata cualquier inóculo instilado. 
		Nota: Una opción adicional para asegurar una vejiga vacía en un ratón es privar a los animales de agua para al menos 1 hora antes del inicio del procedimiento transuretral instilación. Privación de agua debe ser aprobada por la institución como parte del protocolo animal.</li>
	</ol></li> <li>Usar una máquina de anestesia con isoflurano flujo (2%) para inducir anestesia.
	<ol><li>Una vez que el animal está anestesiado, colocarlo en una manta caliente y cubrirla con una almohadilla azul con su nariz dentro de una ojiva para el mantenimiento de la anestesia continua.</li>
		<li>Confirman que el animal está bajo anestesia comprobando el reflejo pedal (pellizco del dedo del pie).</li>
	</ol></li> <li>Una vez que el reflejo pedal está ausente, se procederá a retraer el prepucio.
	<ol><li>Prensa de la región pubiana con el pulgar y el dedo índice de una mano ( figuras 2A y 2B) y saque el pene las glándulas con el pulgar y el dedo índice de la otra (de la mano figura 2). Cuando esto se logra correctamente, el prepucio, glande y cuerpo del pene siendo expuestos. ( Figura 2D y figura 2F). No use pinzas para sacar pene glándulas como esto puede causar daños al tejido.</li>
	</ol></li> <li>Lubricar la punta del catéter y el glande con lubricante quirúrgico estéril antes de la inserción del catéter. Esto facilitará la inserción de la tubería de PE. 
	Nota: Embalados individualmente plazas de lubricante quirúrgico, en vez de un tubo grande, se recomiendan para que cada uso, para mantener las condiciones de esterilidad.</li>
	<li>Sujete suavemente la punta del pene utilizando fórceps embotado y apretar suavemente el glande para causar el meato uretral abrir.</li>
	<li>Sostenga la jeringa con la aguja-tubería de PE o PE sí mismo de la tubería e inserte la tubería de PE a través del meato uretral. 
	Nota: Un agarre trípode de la jeringa con la aguja unida PE-tubería o el PE tubería utilizando el pulgar, índice y dedos medios se recomienda estabilidad. 
	Nota: El camino de la cateterización debe ser curvado debido a la curvatura natural de la uretra rodeada por el glande y cuerpo del pene en el ratón macho adulto, como se muestra en la Figura 3A y 3B de la figura. La tubería de PE urocultivo puede encontrar resistencia durante cateterismo, por lo tanto, se recomienda ajustar el ángulo inclinando el tubo de arriba o abajo ayuda avanzar el tubo PE al órgano Diana. Si es necesario, la tubería de PE puede girarse ligeramente para ayudar a maniobrar a través de las diferentes curvas de uretra. Cuando hay demasiada resistencia, la tubería debe ser hacia atrás y luego avanzar otra vez con una mínima presión. Tirar de la tubería de PE hacia fuera completamente y usando más lubricación puede ayudar.</li>
	<li>Realizar instilación del inóculo de una vez la tubería de PE ha llegado el órgano deseado empujando el émbolo de la aguja para el volumen del inóculo (volumen de 5-200 μL sugiere).
	<ol><li>Para la instilación del inóculo en la vejiga urinaria, avanzar en la tubería de PE hasta alrededor de 0,75 pulgadas de tubería de PE es insertado ( Figura 3A). 
		Nota: para la instilación del inóculo en el AP y el SV, por lo general, thtubería e insertado cumple resistencia una vez que alcanza el punto de apertura hacia la próstata anterior. De ajuste del ángulo de inclinación del tubo hacia arriba o hacia abajo, la tubería de PE avanzará más lejos hasta aproximadamente 1 pulgada de la tubería de PE ha sido insertado ( figura 3B).</li>
	</ol></li></ol> 3. En Vivo Proyección de imagen del tracto urinario inferior y los riñones Nota: el propósito de las imágenes en vivo de este manuscrito es: (1) para confirmar la localización espacial del inóculo; y (2) para evaluar la incidencia de reflujo del inóculo para la riñones. Para ello, se puede utilizar un ratón anestesiado o eutanasia.
<ol><li>Para visualizar el tracto urinario inferior de un ratón macho adulto, realizar laparotomía de línea media abdominal baja para exponer la vejiga, próstata y vesículas seminales.
	<ol><li>Haga una incisión en la piel en la línea media del hueso púbico a justo debajo del proceso xifoides con unas tijeras.</li>
		<li>Elevar la piel de tejido subcutáneo.</li>
		<li>Identificar la linea avascular alba situado en la línea media y haga una incisión para acceder a la cavidad peritoneal donde se encuentran todos los órganos.</li>
		<li>Visualización de colorante azul o de otro agente de seguimiento adecuado para confirmar la localización espacial.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Lee, S., Yang, G., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+urinary+frequency+in+adult+mice.">Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice.</a> PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).</li><li>Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+fibrosis+in+a+mouse+model+of+chronic+bacterial+infection.">Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection.</a> PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).</li><li>Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+bacterial+infection+and+inflammation+incite+reactive+hyperplasia+in+a+mouse+model+of+chronic+prostatitis.">Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis.</a> Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).</li><li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate.">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+inflammation+of+the+lower+urinary+tract.">Models of inflammation of the lower urinary tract.</a> Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).</li><li>Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transurethral+induction+of+mouse+urinary+tract+infection.">Transurethral induction of mouse urinary tract infection.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cystitis+is+accompanied+by+increased+peripheral+thermal+sensitivity+in+mice.">Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice.</a> J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).</li><li>Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+and+host+responses+to+Escherichia+coli+urinary+tract+infection+in+genetically+distinct+mouse+strains.">Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains.</a> Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).</li><li>Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+resiniferatoxin+decreases+spinal+c-fos+expression+and+increases+bladder+volume+to+reflex+micturition+in+rats+with+chronic+inflamed+urinary+bladders.">Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders.</a> BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).</li><li>Cayan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Botulinum+toxin+type+A+may+improve+bladder+function+in+a+rat+chemical+cystitis+model.">Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model.</a> Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).</li><li>Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+mouse+bladder+inflammatory+response+to+E.+coli+lipopolysaccharide.">Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide.</a> Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS-sensory+peptide+communication+in+experimental+cystitis.">LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).</li><li>Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+invasion+augments+epithelial+cytokine+responses+to+Escherichia+coli+through+a+lipopolysaccharide-dependent+mechanism.">Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism.</a> J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discriminators+of+mouse+bladder+response+to+intravesical+Bacillus+Calmette-Guerin+(BCG).">Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG).</a> BMC Immunol. 8, 6 (2007).</li><li>Bjorling, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+acrolein-induced+cystitis+in+mice.">Acute acrolein-induced cystitis in mice.</a> BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).</li><li>Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+bladder+distention+evoked+visceromotor+responses+as+a+model+for+bladder+pain+in+mice.">Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice.</a> J Vis Exp. (86), (2014).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este manuscrito describe detalladamente un método de instilación transuretral en ratón macho adulto. Área siembra primaria diferencial puede llegar mediante el uso de tubería de PE de diferentes diámetros. PE-50 se recomienda para llegar con éxito a la luz de la vejiga urinaria, mientras que un diámetro mayor que PE-10 se utiliza para llegar a la AP y la SV (Figura 3A-B). Además de la elección del tamaño de la tubería de PE y órgano Diana para la inoculación, o...

El enfoque de instilación transuretral se ha utilizado en estudios anteriores como uno de los métodos para crear modelos de roedores de vejiga patologías1,2,3,4 y puede usarse para evaluar la efectividad de los tratamientos locales entregados en ratones. Aunque los modelos animales no pueden recapitular completamente patologías humanas, identificación de los mecanismos subyacentes en los estudios animales proporciona una mejor comprensión de los trastornos humanos de LUT como síndrome de dolor de la cistitis intersticial, vejiga, neurogénico cistitis, cistitis autoinmune e inflamación prostática5.
El procedimiento transuretral instilación realizado en un ratón macho adulto es técnicamente más difícil que la instilación intravesical de un ratón hembra adulto6. La anatomía naturalmente curvada de la uretra masculina junto con su pequeño diámetro hace técnicamente difícil de lograr la inserción transuretral de un catéter. Por lo tanto, instrucciones detalladas para la inducción transuretral de ratón de la infección de vías urinarias6 y LUT inflamación7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15 vía el catéter insertado en la vejiga se esbozaron anteriormente para ratones femeninos solamente. Este manuscrito tiene como objetivo proporcionar una descripción paso a paso de la técnica de transuretral instilación de sustancias en los ratones machos incluyendo los clips de vídeo, imágenes e ilustraciones. Transuretral instilación variable pueden realizar procedimientos en un ratón macho adulto inocula similar al anteriormente descrito en el ratón hembra7 y combinado con técnicas adicionales tales como grabaciones de Electromiograma de respuestas visceromotor (VMR)16.

<table><tbody><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10</td><td>BD Medical</td><td>63019-004</td><td></td></tr><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50</td><td>BD Medical</td><td>63019-048</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath</td><td>BD Medical</td><td>311411</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (EtOH)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>205155</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>305129</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS22</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS27</td><td></td></tr><tr><td>6&quot; Long x 2&quot; Wide x 1&quot; Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone</td><td>Norton</td><td>40204034</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac</td><td>Surgilube</td><td>281020543</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Fluriso</td><td>13985-528-60</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-01</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Forceps, Curved</td><td>vwr</td><td>82027-392</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 ml Syringe</td><td>BD Medical</td><td>309626</td><td></td></tr><tr><td>India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer</td><td>Alfa Aesar</td><td>J61007</td><td></td></tr><tr><td>8~12 weeks old male C57B/6 Mice</td><td>Jackson Lab</td><td>#000664</td><td></td></tr></tbody></table>

transurethral instillation procedure in adult male mouse

Instilación transuretral puede utilizarse para ofrecer diferentes soluciones con principios activos (p. ej., drogas, productos químicos, bacterias y virus) localmente en la vejiga urinaria para inducir modelos animales de patologías de vejiga o evaluar la efectividad de los tratamientos intravesical. Más roedores modelos de patologías de vías urinarias (LUT) inferiores son inducidos en ratones hembra debido a la facilidad de instilación intravesical de las sustancias a través de la uretra femenina. Sin embargo, debido a las diferencias anatómicas entre el LUT femenina y masculina, instilación transuretral en un ratón macho ha sido considerada un procedimiento muy difícil, y no se ha descrito previamente. En este manuscrito, nos proporcionan una descripción detallada de cómo preparar tubería de polietileno (PE) para la posterior inserción en la uretra de un ratón macho. Además, discutimos los tipos ideales de la tubería de PE a utilizar dependiendo del sitio deseado de la inoculación. Además, se describe punto por punto cómo preparar un animal para un exitoso instilación transuretral evitar lesiones en la uretra y asegurar la entrega de la solución a la ubicación deseada. El procedimiento es iniciado por retraer el prepucio y el glande para exponer la apertura del meato uretral. A continuación, el glande son tomados por Roma fórceps no machacar para estabilizar el pene y la tubería de PE. La tubería de PE se inserta por primera vez en el meatus uretral paralelo al cuerpo animal, entonces su ángulo está ajustado inclinando el catéter para maniobrarlo para seguir la curvatura natural de la uretra. Esta técnica puede utilizarse en modelos murinos inducidos de patologías de vejiga o evaluar la efectividad de los tratamientos intravesical en ratones machos.

Instilación transuretral de colorante azul a través de tubería de PE 50 dio lugar a la instilación de contraste en la vejiga urinaria (Figura 4A) y a través de 10 PE tubo de coloración de la SV y AP (Figura 4B), respectivamente. Para evaluar si la instilación transuretral realizada provoca un reflujo inmediato del inóculo a los riñones o no, el riñón y el uréter se observaron seguida por la instilación de 100 μl del...

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Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

La instilación transuretral es un procedimiento difícil y no ha sido bien descrita en la literatura. El objetivo de este manuscrito es describir una técnica para la inserción transuretral de un catéter para la administración intravesical de líquidos con sustancias activas en la vejiga o la próstata en ratones macho adultos.

Procedimiento transuretral instilación en ratón macho adulto

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

transurethral-instillation-procedure-in-adult-male-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.5K vistas.  University of Colorado School of Medicine. La instilación transuretral es un procedimiento difícil y no ha sido bien descrita en la literatura. El objetivo de este manuscrito es describir una técnica para la inserción transuretral de un catéter para la administración intravesical de líquidos con sustancias activas en la vejiga o la próstata en ratones macho adultos.

Video: Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on Luria-Bertani (LB) agar at 37&deg;C in ambient air. UPEC strains grow as yellowish-white translucent colonies on LB agar. Following confirmation of appropriate colony morphology, single colonies are then picked to be cultured in broth. LB broth can be used for most uropathogenic bacterial strains. Two serial, overnight LB broth cultures can be employed to enhance expression of type I pili, a well-defined virulence factor for uropathogenic bacteria. Broth cultures are diluted to the desired concentration in phosphate buffered saline (PBS). Eight to 12 week old female mice are placed under isoflurane anesthesia and transurethrally inoculated with bacteria using polyethylene tubing-covered 30 gauge syringes. Typical inocula, which must be empirically determined for each bacterial/mouse strain combination, are 106 to 108 cfu per mouse in 10 to 50 microliters of PBS. After the desired infection period (one day to several weeks), urine samples and the bladder and both kidneys are harvested. Each organ is minced, placed in PBS, and homogenized in a Blue Bullet homogenizer. Urine and tissue homogenates are serially diluted in PBS and cultured on appropriate agar. The following day, colony forming units are counted.

This video will demonstrate methods to transurethrally induce mouse urinary tract infections and quantify the extent of resulting infections.

Inducción transuretral de infección del tracto urinario ratón

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Investigación

Inmunología e Infección

Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

Vejiga ratón pared de inyección

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Medicina

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, which accurately reflect disease establishment and progression, permit dissection of host-pathogen interactions and generation of immunity to infection. In mice, intravesical instillation of uropathogenic E. coli, the causative agent in more than 85% of community acquired UTI, recapitulates many of the stages of infection observed in humans. Until recently, however, UTI could only be modeled in female animals. This limitation has hindered the study of sex-related differences in UTI, as well as other bladder pathologies, such as cancer. Here, we describe a method to instill male mice that allows direct comparison between female and male animals and provide a detailed protocol to assess bladder tissue by flow cytometry as a means to better understand host responses to infection. Together, these approaches will aid in the identification of host factors that contribute to sex biases observed in UTI and other bladder-associated diseases.

The established model of transurethral catheterization of mice allows the study of bladder pathologies, including urinary tract infection, but can only be performed in females. A new model of male transurethral instillation, presented here, will enable research in an area marked by strong clinical and epidemiological differences between the sexes.

Infección del tracto urinario en un modelo Animal pequeño: cateterización transuretral de ratones machos y hembras

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

Longitudinal Follow-Up of Urinary Tract Infections and Their Treatment in Mice using Bioluminescence Imaging

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, due to increasing microbial resistance, the efficacy of the most used antibiotics has declined. To find alternative treatment options, there is a great need for a better understanding of the UTI pathogenesis and the mechanisms that determine UTI susceptibility. In order to investigate this in an animal model, a reproducible, non-invasive assay to study the course of UTI is indispensable.
For years, the gold standard for the enumeration of bacterial load has been the determination of Colony Forming Units (CFU) for a particular sample volume. This technique requires post-mortem organ homogenates and serial dilutions, limiting data output and reproducibility. As an alternative, bioluminescence imaging (BLI) is gaining popularity to determine the bacterial load. Labeling pathogens with a lux operon allow for the sensitive detection and quantification in a non-invasive manner, thereby enabling longitudinal follow-up. So far, the adoption of BLI in UTI research remains limited.
This manuscript describes the practical implementation of BLI in a mouse urinary tract infection model. Here, a step-by-step guide for culturing bacteria, intravesical instillation and imaging is provided. The in vivo correlation with CFU is examined and a proof-of-concept is provided by comparing the bacterial load of untreated infected animals with antibiotic-treated animals. Furthermore, the advantages, limitations, and considerations specific to the implementation of BLI in an in vivo UTI model are discussed. The implementation of BLI in the UTI research field will greatly facilitate research on the pathogenesis of UTI and the discovery of new ways to prevent and treat UTI.

This manuscript describes the intravesical administration of uropathogenic bacteria with a lux operon to induce a urinary tract infection in mice and subsequent longitudinal in vivo analysis of the bacterial load using bioluminescence imaging.

Seguimiento longitudinal de las infecciones del tracto urinario y su tratamiento en ratones utilizando imágenes de bioluminiscencia

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

Ultrasonografía del tracto urinario masculino adulto para pruebas funcionales urinarias

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms of human diseases such as cancer. Transgenic and conditional knockout mice have been frequently used for gene overexpression or ablation in specific tissues or cell types in vivo. However, generating germline mouse models can be time-consuming and costly. Recent advancements in gene editing technologies and the feasibility of delivering DNA plasmids by viral infection have enabled rapid generation of non-germline autochthonous mouse cancer models for several organs. The bladder is an organ that has been difficult for viral vectors to access, due to the presence of a glycosaminoglycan layer covering the urothelium. Here, we describe a novel method developed in lab for efficient delivery of DNA plasmids into the mouse bladder urothelium in vivo. Through intravesical instillation of pCAG-GFP DNA plasmid and electroporation of surgically exposed bladder, we show that the DNA plasmid can be delivered specifically into the bladder urothelial cells for transient expression. Our method provides a fast and convenient way for overexpression and knockdown of genes in the mouse bladder, and can be applied to building GEMMs of bladder cancer and other urological diseases.

We describe a novel method for the delivery of DNA plasmid into the urothelial cells of mouse bladder in vivo through urethra catheterization and electroporation. It offers a fast and convenient way for generating autochthonous mouse models of bladder diseases.

Novedoso método de plásmido ADN entrega al urotelio de la vejiga de ratón por electroporación

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms ...

Biología

Modeling Orthotopic Bladder Tumor in Mouse Model: A Procedure for Intravesical Administration of Cancer Cells into Murine Bladder

Source: Tham, S. M. et al. <a href="https://www.jove.com/video/55078" target="_blank">A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe the intravesical procedure of delivering cancer cells into the bladder of a mouse model. This procedure helps generate an orthotopic bladder tumor model that can be used to develop therapeutic strategies.

Modelado de tumor ortotópico de vejiga en modelo de ratón: un procedimiento para la administración intravesical de células cancerosas en la vejiga murina

Source: Tham, S. M. et al. A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Investigación sobre el cáncer

Urinary Tract Cancer

In vivo studies

Urine Depletion and Bladder Rinsing in Mouse Model: A Catheter-based Procedure to Empty and Wash Murine Urinary Bladder

Source: Yu, C. et al. <a href="https://www.jove.com/video/57649" target="_blank">Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe a catheter-based procedure to empty and rinse the urinary bladder of a mouse model. The prepped mouse can then be used for further experimental procedures.

Depleción de orina y enjuague de la vejiga en un modelo de ratón: un procedimiento basado en catéter para vaciar y lavar la vejiga urinaria murina

Source: Yu, C. et al. Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe ...

Transurethral Catheterization and Bacterial Inoculation to Generate a Urinary Tract Infection Model in Male Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A., et al. <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.

Cateterismo transuretral e inoculación bacteriana para generar un modelo de infección del tracto urinario en ratones machos

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

Immunology

Immunopathology

Host-Pathogen Interaction Models

Establishment of a Urinary Tract Infection Model in Female Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A. et al., <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.