Name: transurethral instillation procedure in adult male mouse
Uploaded: 2017-11-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 1 s
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저자는 어떤 승인 필요가 없습니다.

동물, 방법 및 마 취, 수술 후 치료의 기간을 포함 하 여 모든 절차는 수 의사와 함께 논의 되었고 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인 된 제휴 기관입니다. 이 원고에서 모든 절차 15 주 된 C57BL/6 남성 쥐 8 수행한 및 프로토콜 승인 콜로라도의 대학에 IACUC에 의해 동물 보호 지침을 따릅니다.
 1. 튜브 준비 참고:는 inoculum을 주입 하는 바늘 폴 리 에틸렌 (PE) 관 ( 그림 1A) 또는 작은 계기에 연결 된 (&#60; 24 G) angiocatheter 사용된 (수 있습니다 그림 1G)입니다. angiocatheter 사용 하 여 70% 에탄올 (EtOH) 살 균 이외의 아무런 준비가 필요합니다. inoculum 얻은/주입/입금 요로는 물질 이다.입니다. 이 박테리아, 바이러스, 또는 화학 물질을 포함 하는 솔루션을 수 있습니다. 이것은 연구 프로토콜 및 미리 준비. 예를 들어 연구 더 낮은 요로 대장균 감염의 효과 평가 하는 것을 목표로, 경우 연구원 준비 해야 합니다 inoculum 포함 하는 더 낮은 요로 주사/주입 될 수 있는 박테리아.
<ol><li>PE 튜브에 부착 된 바늘의 준비 간단 하 고 다음의 구성: 대상 기관 및 동물의 나이에 따라 PE 배관의 크기를 선택 하십시오. 12 주 미만 동물에 대 한 PE 10 튜브를 사용 하 여 (외부 직경 0.024 인치 이며 안쪽 직경 0.011 인치). PE 10 튜브는 inoculum 앞쪽 전립선 (AP) 및 정액 소포 (SV)의 (1) 기본 시드 또는 inoculum 젊은 나이의 12 주 보다 동물의 방광에서의 기본 (2)는 시드 적용할 수 있도록 제안 했다. 더 큰 직경의 크기 (외경 0.038 인치 및 0.023 인치 최대 내경) PE 50 사용할 수 있습니다 오래 된 동물의 방광에 inoculum의 기본 시드 PE 튜브.</li>
	<li>PE 튜브의 약 2.5 인치 컷.</li>
	<li>바늘을 사용할 수 선택한 PE 직경에 맞는 것을 선택 합니다. 27 G 바늘 PE 10 튜브의 루멘으로 들어갈 수 있는 그리고 22 G 바늘 맞는 PE-50 튜브의 루멘.
	<li>준비 상용 기름 돌에 바늘의 날카로운 가장자리를 문 지르고 하 여 PE 튜브에 삽입 전에 바늘 <ol>( 그림 1A -B), 또는 상업적으로 사용할 수 있는 둔 기를 사용 하 여 바늘.</li>
	</ol></li> <li>PE 튜브의 루멘으로 무딘 바늘 ( 그림 1C)을 소개. 루멘의 중심에서 바늘 남아 함으로써 루멘 또는 틀린 루멘을 손상을 하지 마십시오. ( 그림 1D -E). PE 튜브 무딘 바늘의 삽입 하는 동안 손상 되 면 손상 된 끝 자르고 프로세스를 다시 시작.</li>
	<li>장소 바늘 연결 된 PE 튜브 70 %EtOH 절차에 대 한 그것의 사용까지 살 균. 플러시 70 %EtOH 바늘-PE 튜브를 통해 루멘을 소독 하 고 거기에서 PE 튜브에서 누설은 바늘 삽입의 과정에서 손상. 누설이 있는 경우에, 삭제 바늘-PE 튜브. 
	참고: PE 튜브의 팁 catheterization 이전 될 필요가 있다. 요도에 PE 튜브를 소개와 함께 문제를 방지 하려면 ( 그림 1 층) catheterization 직전 PE 튜브의 끝을 잘라 하는 것이 좋습니다. PE 튜브의 제안된 최소 길이 1.5 인치 바늘을 둘러싼 부분을 포함 하.</li>
</ol> 2. 도관 법 절차 <ol><li>마 취의 유도, 이전 마우스의 방광 비.
	<ol><li>부드러운 압력을 적용 하 고 마우스의 더 낮은 복 부를 마사지. 이러한 훈련은 일반적으로 자발적인 voiding 이어질. 방광이 어떤 instilled inoculum 희석 또는 즉시 누설에 발생할 수 있습니다. 
		참고: 추가 옵션 마우스에 빈 방광을 transurethral 주입 절차의 시작 전에 적어도 1 시간 정도 물의 동물을 박탈 하는. 물 부족 동물 프로토콜의 일환으로 교육 기관에 의해 승인을 받아야 한다.</li>
	</ol></li> <li>Isoflurane 흐름 (2%)와 마 취 기계를 사용 하 여 마 취를 유도 하는 것.
	<ol><li>일단 동물 마 취는 따뜻한 난방 담요에 배치 하 고 연속 마 취의 유지 보수에 대 한 nosecone 안에 그것의 코를 가진 블루 패드와 함께 커버.</li>
		<li>확인 동물 마 취 페달 반사 (발가락 핀치)을 선택 하 여.</li>
	</ol></li> <li>페달 반사 결 석 되는 포 피 제거에 의해 진행.
	<ol><li>보도 엄지 및 집게 손가락 한 손으로의 음모 지역 ( 그림 2A 및 2B), 엄지와 다른 손 (검지 손가락을 사용 하 여 땀 샘 성 기를 꺼내 그림 2C)입니다. 때이 올바르게, 포 피, 귀 두 남 근, 음 경 몸 노출 남아 있습니다. ( 그림 2D 그리고 그림 2F). 이 조직에 손상에서 발생 땀 샘 성 기를 꺼내 집게를 사용 하지 마십시오.</li>
	</ol></li> <li>기름칠을 하는 카 테 터와 카 테 터의 삽입 전에 메 마른 외과 윤활제와 귀 두의 끝. 이 PE 튜브의 삽입을 용이 하 게 합니다. 
	참고: 개별적으로 포장 된 사각형 하나의 큰 튜브 대신 외과 윤활제의 멸 균 상태를 유지 하기 위해 각 사용에 대 한 권장.</li>
	<li>부드럽게 둔 집게를 사용 하 여 성 기의 끝을 잡고 고 부드럽게 여 요도 도관을 귀 두를 짠 다.</li>
	<li>주사기 바늘 연결 된 PE 튜브 또는 PE 튜브 자체와 함께 누른 요도 도관을 통해 PE 튜브 삽입. 
	참고: 삼각대 그립 주사기 바늘 연결 된 PE-튜브 또는 PE 튜브, 인덱스, 엄지와 중간 손가락을 사용 하 여 자체의 안정성에 대 한 좋습니다. 
	참고: 도관 법의 경로 그림 3A와 그림 3B와 같이 성인 남성 마우스에 관해 선 몸과 귀 두 남 근에 의해 포위 하는 요도의 자연 곡률으로 인해 곡선 해야 합니다. Catheterized PE 튜브 도관 법 동안 저항을 만날 수 있습니다, 그리고 따라서, 대상 기관 더 PE 튜브 튜브 또는 도움말 사전 아래로 기울이기로 각도 조정 하 것이 좋습니다. 필요한 경우, PE 튜브 요도의 다양 한 예리한 회전을 통해 책략 수 있도록 약간 회전할 수 있습니다. 너무 많은 저항 때 튜브 철수 해야 하 고 최소한의 압력으로 다시 전진. PE 튜브를 당겨 완전히 밖으로 및 더 많은 윤 활을 사용 하 여 도움이 될 수 있습니다.</li>
	<li>PE 튜브 inoculum (5-200 µ L 볼륨 제안)의 원하는 볼륨을 주입 하 바늘 플런저를 밀어 원하는 기관에 도달 했습니다 일단은 inoculum의 기지를 수행.
	<ol><li>오 줌 방광에는 inoculum의 기지 사전 PE 튜브의 약 0.75 인치까지 PE 튜브에 삽입 됩니다 ( 그림 3A). 
		AP와 SV, 일반적으로, 일에 inoculum의 기지에 대 한 참고:전자 삽입 튜브 앞쪽 전립선으로 개통의 지점에 도달 하면 저항을 만난다. 위로 또는 아래로 튜브를 기울이기로 각도 조정 하 여 PE 튜브 미리 추가 PE 튜브의 약 1 인치까지 ( 그림 3B) 삽입.</li>
	</ol></li></ol> 3. Vivo에서 더 낮은 요로 신장 이미징 참고: vivo에서 화상 진 찰이이 원고에의 목적은: (1) inoculum;의 공간 지역화를 확인 하 고 (2) 하 inoculum의 역류 성 식도 염의 발병 률을 평가 하는 신장입니다. 이 마 취 또는 안락사 마우스 사용할 수 있습니다.
<ol><li>시각화 성인 남성 마우스의 더 낮은 요로, 방광, 전립선, 정액 소포 노출에 더 낮은 복 부 중간 개복 술 수행.
	<ol><li>음모 뼈 바로 아래가 위를 사용 하 여 칼 과정에서에서 중간에 피부 incise.</li>
		<li>피하 조직에서 피부 상승.</li>
		<li>Avascular 교육 알바는 중간에 위치를 식별 하 고 모든 장기 있는 복 막 구멍 입력이 incise.</li>
		<li>파란 염료 또는 다른 적합 한 추적 에이전트의 시각화 하 여 공간 지역화를 확인.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Lee, S., Yang, G., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+urinary+frequency+in+adult+mice.">Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice.</a> PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).</li><li>Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+fibrosis+in+a+mouse+model+of+chronic+bacterial+infection.">Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection.</a> PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).</li><li>Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+bacterial+infection+and+inflammation+incite+reactive+hyperplasia+in+a+mouse+model+of+chronic+prostatitis.">Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis.</a> Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).</li><li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate.">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. 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Y., Boldon, K., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cystitis+is+accompanied+by+increased+peripheral+thermal+sensitivity+in+mice.">Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice.</a> J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).</li><li>Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. 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J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+mouse+bladder+inflammatory+response+to+E.+coli+lipopolysaccharide.">Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide.</a> Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS-sensory+peptide+communication+in+experimental+cystitis.">LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).</li><li>Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+invasion+augments+epithelial+cytokine+responses+to+Escherichia+coli+through+a+lipopolysaccharide-dependent+mechanism.">Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism.</a> J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discriminators+of+mouse+bladder+response+to+intravesical+Bacillus+Calmette-Guerin+(BCG).">Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG).</a> BMC Immunol. 8, 6 (2007).</li><li>Bjorling, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+acrolein-induced+cystitis+in+mice.">Acute acrolein-induced cystitis in mice.</a> BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).</li><li>Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+bladder+distention+evoked+visceromotor+responses+as+a+model+for+bladder+pain+in+mice.">Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice.</a> J Vis Exp. (86), (2014).</li></ol>

저자는 공개 없다.

이 원고는 성인 남성 마우스 transurethral 주입 하는 방법을 자세하게에서 설명합니다. 차동 주 시드 지역 다른 직경의 PE 튜브를 사용 하 여 도달할 수 있습니다. PE-50 성공적으로 PE 10 AP와 SV (그림 3A-B)를 도달 하는 더 큰 직경 동안 방광 루멘을 도달 하기 위한 것이 좋습니다. PE 튜브 및 접종에 대 한 대상 장기의 크기의 선택, 이외에 얻은 inoculum의 볼륨 등 다른 요인...

Transurethral 문제 접근은 이전 연구에서로 사용 방법 중 하나 방광 병 리1,2,,34 의 설치류 모델을 만들 고 평가 하는 데 사용 될 수는 마우스에 로컬로 배달 된 치료의 효과입니다. 동물 모델은 인간의 병 리 정리 완전 수 없습니다, 비록 동물 연구에서 기본 메커니즘의 간 질 성 방광염/방광 통증 증후군, neurogenic 등 인간의 LUT 장애의 더 나은 이해 제공 방광염, 자가 면역 질환 방광염 및 전립선 염증5.
성인 남성 마우스에 수행 transurethral 주입 절차는 성인 여성 마우스6intravesical 점 보다 더 기술적으로 도전 합니다. 그것의 작은 직경 함께 남성 요도의 자연스럽 게 곡선된 해부학 어렵게 기술적으로 카 테 터의 transurethral 삽입을 수행 하. 따라서, 자세한 마우스 요로 감염6 및 LUT 염증7,,89,10,11 transurethral 유도 대 한 지침 , 12 , 13 , 14 , 방광에 삽입 된 카 테 터를 통해 15 만 여성 쥐에 대 한 이전 설명 했다. 이 원고는 비디오 클립, 이미지, 일러스트 등 남성 쥐에서 물질의 transurethral 문제에 대 한 기술에 대 한 단계별 설명을 제공을 목표로 한다. 변수는 성인 남성 마우스에 절차를 수행할 수 있습니다 transurethral 점 접종 이전 여성 마우스7 에서 설명 하 고 치십시오 녹음 같은 추가 기술을 병합 비슷합니다. visceromotor 응답 (VMR)16.

<table><tbody><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10</td><td>BD Medical</td><td>63019-004</td><td></td></tr><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50</td><td>BD Medical</td><td>63019-048</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath</td><td>BD Medical</td><td>311411</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (EtOH)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>205155</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>305129</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS22</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS27</td><td></td></tr><tr><td>6&quot; Long x 2&quot; Wide x 1&quot; Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone</td><td>Norton</td><td>40204034</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac</td><td>Surgilube</td><td>281020543</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Fluriso</td><td>13985-528-60</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-01</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Forceps, Curved</td><td>vwr</td><td>82027-392</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 ml Syringe</td><td>BD Medical</td><td>309626</td><td></td></tr><tr><td>India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer</td><td>Alfa Aesar</td><td>J61007</td><td></td></tr><tr><td>8~12 weeks old male C57B/6 Mice</td><td>Jackson Lab</td><td>#000664</td><td></td></tr></tbody></table>

transurethral instillation procedure in adult male mouse

Transurethral 점 방광 pathologies의 동물 모델을 유도 하거나 평가 방광에 로컬 활성 성분 (예를 들어, 약물, 화학 물질, 박테리아 및 바이러스)와 다른 솔루션을 제공 하 고 사용할 수 있는 intravesical 치료의 효과입니다. 더 낮은 요로 (LUT) pathologies의 설치류 모델 가장 여성 요도 통해 물질의 intravesical 기지의 용이성을 인해 여성 쥐에 유도 됩니다. 그러나, 여성 및 남성 LUT 사이 해 부 차이 남성 마우스에서 transurethral 점 간주 되었습니다 매우 어려운 절차 그리고 그것 이전 설명 하지는. 이 원고는 남성 마우스의 요도에 후속 삽입을 위한 폴 리 에틸렌 (PE) 관을 준비 하는 방법에 대 한 자세한 설명을 제공 합니다. 또한, 우리 PE 튜브 접종의 원하는 위치에 따라 사용할 수 이상적인 유형의 토론. 또한, 우리 포인트 포인트 요도에 부상을 방지 하 고 원하는 위치에는 솔루션의 제공을 보장 하는 성공적인 transurethral 문제에 대 한 동물을 준비 하는 방법을 설명 합니다. 절차는 축소는 포 피와 귀 두 요도 도관의 개통을 표시 하 여 시작 됩니다. 다음, 귀 두는 음와 PE 튜브 안정 무딘 분쇄 비 집게에 의해 파악 된다. PE 튜브 처음 동물의 시체를 병렬 요도 도관 삽입 후 각도 요도의 자연 곡률을 따라 그것을 책략을 카 테 터를 기울이기에 의해 조정 됩니다. 이 기술은 방광 pathologies의 유도 murine 모델 하는 데 사용 될 수 있습니다 또는 남성 쥐에서 intravesical 치료의 효과 평가.

PE 50 튜브를 통해 파란 염료의 transurethral 점 각각 (그림 4A), 오 줌 방광 그리고 PE 10 SV와 AP (그림 4B)의 색에 튜브를 통해 염료의 주입 결과. 수행된 transurethral 주입 하면 신장에 inoculum의 인스턴트 역류 또는 하지 여부를 평가 하 고 신장 ureter 관찰 되었다 파란 염료 및 형광 염료 (그림 4A-B) 100 µ L...

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Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral 점 도전 절차 이며 문학에서 잘 설명 되어 있다. 이 원고의 목적은 transurethral 방광 및/또는 성인 남성 생쥐에서 전립선으로 활성 물질과 액체의 intravesical 전달 카 테 터 삽입에 대 한 기술을 설명 하는 것입니다.

성인 남성 마우스 transurethral 주입 절차

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

transurethral-instillation-procedure-in-adult-male-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.5K 조회수.  University of Colorado School of Medicine. Transurethral 점 도전 절차 이며 문학에서 잘 설명 되어 있다. 이 원고의 목적은 transurethral 방광 및/또는 성인 남성 생쥐에서 전립선으로 활성 물질과 액체의 intravesical 전달 카 테 터 삽입에 대 한 기술을 설명 하는 것입니다.

비디오: Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on Luria-Bertani (LB) agar at 37&deg;C in ambient air. UPEC strains grow as yellowish-white translucent colonies on LB agar. Following confirmation of appropriate colony morphology, single colonies are then picked to be cultured in broth. LB broth can be used for most uropathogenic bacterial strains. Two serial, overnight LB broth cultures can be employed to enhance expression of type I pili, a well-defined virulence factor for uropathogenic bacteria. Broth cultures are diluted to the desired concentration in phosphate buffered saline (PBS). Eight to 12 week old female mice are placed under isoflurane anesthesia and transurethrally inoculated with bacteria using polyethylene tubing-covered 30 gauge syringes. Typical inocula, which must be empirically determined for each bacterial/mouse strain combination, are 106 to 108 cfu per mouse in 10 to 50 microliters of PBS. After the desired infection period (one day to several weeks), urine samples and the bladder and both kidneys are harvested. Each organ is minced, placed in PBS, and homogenized in a Blue Bullet homogenizer. Urine and tissue homogenates are serially diluted in PBS and cultured on appropriate agar. The following day, colony forming units are counted.

This video will demonstrate methods to transurethrally induce mouse urinary tract infections and quantify the extent of resulting infections.

마우스 요로 감염의 Transurethral 유도

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

연구

면역학 및 감염병학

Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

마우스 블레더 월 주입

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

의학

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, which accurately reflect disease establishment and progression, permit dissection of host-pathogen interactions and generation of immunity to infection. In mice, intravesical instillation of uropathogenic E. coli, the causative agent in more than 85% of community acquired UTI, recapitulates many of the stages of infection observed in humans. Until recently, however, UTI could only be modeled in female animals. This limitation has hindered the study of sex-related differences in UTI, as well as other bladder pathologies, such as cancer. Here, we describe a method to instill male mice that allows direct comparison between female and male animals and provide a detailed protocol to assess bladder tissue by flow cytometry as a means to better understand host responses to infection. Together, these approaches will aid in the identification of host factors that contribute to sex biases observed in UTI and other bladder-associated diseases.

The established model of transurethral catheterization of mice allows the study of bladder pathologies, including urinary tract infection, but can only be performed in females. A new model of male transurethral instillation, presented here, will enable research in an area marked by strong clinical and epidemiological differences between the sexes.

작은 동물 모델에서 요로 감염: 남성 및 여성 쥐의 Transurethral 도관 법

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

Longitudinal Follow-Up of Urinary Tract Infections and Their Treatment in Mice using Bioluminescence Imaging

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, due to increasing microbial resistance, the efficacy of the most used antibiotics has declined. To find alternative treatment options, there is a great need for a better understanding of the UTI pathogenesis and the mechanisms that determine UTI susceptibility. In order to investigate this in an animal model, a reproducible, non-invasive assay to study the course of UTI is indispensable.
For years, the gold standard for the enumeration of bacterial load has been the determination of Colony Forming Units (CFU) for a particular sample volume. This technique requires post-mortem organ homogenates and serial dilutions, limiting data output and reproducibility. As an alternative, bioluminescence imaging (BLI) is gaining popularity to determine the bacterial load. Labeling pathogens with a lux operon allow for the sensitive detection and quantification in a non-invasive manner, thereby enabling longitudinal follow-up. So far, the adoption of BLI in UTI research remains limited.
This manuscript describes the practical implementation of BLI in a mouse urinary tract infection model. Here, a step-by-step guide for culturing bacteria, intravesical instillation and imaging is provided. The in vivo correlation with CFU is examined and a proof-of-concept is provided by comparing the bacterial load of untreated infected animals with antibiotic-treated animals. Furthermore, the advantages, limitations, and considerations specific to the implementation of BLI in an in vivo UTI model are discussed. The implementation of BLI in the UTI research field will greatly facilitate research on the pathogenesis of UTI and the discovery of new ways to prevent and treat UTI.

This manuscript describes the intravesical administration of uropathogenic bacteria with a lux operon to induce a urinary tract infection in mice and subsequent longitudinal in vivo analysis of the bacterial load using bioluminescence imaging.

요로 감염의 세로 후속 및 생물 발광 이미징을 사용하여 마우스에서의 치료

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

요로 기능 검사를 위한 성인 남성 요로의 초음파 검사

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms of human diseases such as cancer. Transgenic and conditional knockout mice have been frequently used for gene overexpression or ablation in specific tissues or cell types in vivo. However, generating germline mouse models can be time-consuming and costly. Recent advancements in gene editing technologies and the feasibility of delivering DNA plasmids by viral infection have enabled rapid generation of non-germline autochthonous mouse cancer models for several organs. The bladder is an organ that has been difficult for viral vectors to access, due to the presence of a glycosaminoglycan layer covering the urothelium. Here, we describe a novel method developed in lab for efficient delivery of DNA plasmids into the mouse bladder urothelium in vivo. Through intravesical instillation of pCAG-GFP DNA plasmid and electroporation of surgically exposed bladder, we show that the DNA plasmid can be delivered specifically into the bladder urothelial cells for transient expression. Our method provides a fast and convenient way for overexpression and knockdown of genes in the mouse bladder, and can be applied to building GEMMs of bladder cancer and other urological diseases.

We describe a novel method for the delivery of DNA plasmid into the urothelial cells of mouse bladder in vivo through urethra catheterization and electroporation. It offers a fast and convenient way for generating autochthonous mouse models of bladder diseases.

새로운 방식의 마우스 방광 Urothelium Electroporation에 의해 플라스 미드 DNA 전달

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms ...

생물학

Modeling Orthotopic Bladder Tumor in Mouse Model: A Procedure for Intravesical Administration of Cancer Cells into Murine Bladder

Source: Tham, S. M. et al. <a href="https://www.jove.com/video/55078" target="_blank">A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe the intravesical procedure of delivering cancer cells into the bladder of a mouse model. This procedure helps generate an orthotopic bladder tumor model that can be used to develop therapeutic strategies.

마우스 모델에서 정소성 방광 종양 모델링: 쥐 방광에 암세포의 방광 내 투여 절차

Source: Tham, S. M. et al. A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

암 연구학

Urinary Tract Cancer

In vivo studies

Urine Depletion and Bladder Rinsing in Mouse Model: A Catheter-based Procedure to Empty and Wash Murine Urinary Bladder

Source: Yu, C. et al. <a href="https://www.jove.com/video/57649" target="_blank">Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe a catheter-based procedure to empty and rinse the urinary bladder of a mouse model. The prepped mouse can then be used for further experimental procedures.

마우스 모델의 소변 고갈 및 방광 헹굼: 쥐 방광을 비우고 씻는 카테터 기반 절차

Source: Yu, C. et al. Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe ...

Transurethral Catheterization and Bacterial Inoculation to Generate a Urinary Tract Infection Model in Male Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A., et al. <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.

경요도 카테터 삽입 및 세균 접종을 통해 수컷 마우스에서 요로 감염 모델을 생성하다

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

Immunology

Immunopathology

Host-Pathogen Interaction Models

Establishment of a Urinary Tract Infection Model in Female Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A. et al., <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.