הקונפליקט חושי לטווח ארוך באופן חופשי להתנהג עכברים

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לייצר קונפליקט חושי מתמשך לחקר למידה ארוכת טווח בעכברים מתנהגים בחופשיות. הפחתת העלות הניסיונית ותזמן הלמידה החושית, גישה זו מתאימה לשילוב של ניסויי in vivo ו- in vitro. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר מרומז, השתמש בזוג מדפים קהים כדי לתפוס את העור בחלק האחורי של הראש ולהשתמש במספריים כדי לבצע חתך אורך של ס"מ וחצי כדי לחשוף את הגולגולת.

בעדינות לגרד את periosteum עם אזמל ולהחיל טיפה של מפעיל ירוק על אמצע הגולגולת כדי להגדיל את חלילות העצם. לאחר מכן מערבבים כפית אחת של פולימר מערכת ההשתלה עם חמש טיפות מונומר וירידה אחת של קטלייזר ומברישים כמות נדיבה של תערובת מלט בין ציוני הדרך של הגולגולת למבדה ו bregma. באמצעות תנועת החלקה מ lambda כדי bregma, במהירות למקם את הראש על המלט ולהמרת מלט נוסף סביב החלק הנחות של הפוסט כדי להבטיח כי פנס הראש מקלות בבטחה לגולגולת.

בזמן שהמלט מתייבש, מערבבים את אבקת בשרף עם נוזל שף לעקביות חלקה ומחילים את תערובת בשרף שנוצר על המלט המיובש סביב הראש. לאחר מתן אפשרות שרף להתייבש במשך שלוש דקות, להשתמש בתפר Vicryl 4-0 כדי לסגור את העור בחלק האחורי של האוזניים ולהשתמש ספוגית כותנה להחיל 10 עד 20% יוד פתרון החתך. לאחר מכן מניחים את החיה תחת אור אדום עם ניטור עד להחלמה מלאה.

ארבעים ושמונה שעות לאחר הניתוח ליישר את החורים במכשיר פסים עם החורים בפנס הראש ולהשתמש מברג הקסדצישי 1.3 מ"מ ושני ברגים 1.2 מ"מ כדי לאבטח את המכשיר אל הראש. אנו ממליצים לתקן את המכשיר על הראש בעזרת מפעיל שני, כדי למנוע את הסיכון של תלישת הראש או לפגוע בבעל החיים עם המברג. כדי לתקן את המצב מזויף, להפוך את המכשיר במהופך עם החלק האחורי של המכשיר מול הכיוון rostral ליישר את החורים בהתקן עם החורים בפנס.

ודא כי המכשיר מאובטח היטב ולא ניתן להסירו על ידי החיה, כי המכשיר אינו מפעיל לחץ ישירות על האף, אשר עלול לגרום לכאב, קשיי נשימה, או פגיעה בעור. כמו העכברים עשויים להפגין כמה חריגות התנהגותיות במהלך 48 השעות הראשונות של לבישת המכשיר, לפקח על בעלי החיים מקרוב במהלך תקופה זו ולספק גישה קלה למזון ומים עד בעלי החיים להתאקלם. שוקלים את העכברים מיד לאחר ההשתלה ושוב כל 24 שעות לאחר מכן עד סוף הניסוי, ומעניקים תשומת לב מיוחדת לעכברים שלובשים את מכשיר הפסים.

כדי לתעד את התגובה החושית של בעלי החיים המותאמים למכשיר, אבטחו את העכבר הראשון על הסובבן כשהברגים מוכנסים לפנס הראש והכניסו כיפת מסך סביב החיה. כבה את כל האורות בחדר למעט המקרן האופטוקינטי והתחל את הקלטת גירוי השדה המלא של הרפלקס האופטוקינטי במספר מהירות שונות הן בכיוונים בכיוון השעון והן נגד כיוון השעון. ברגע שההקלטות נגמרות, הסירו את הכיפה והדליקו את האורות.

כדי לתעד את הרפלקס האפוד-עיני בחושך כהה, החל טיפה של 2% pilocarpine על העיניים של החיה ולחכות לפחות חמש דקות לפני בעדינות להסיר את המשחה עם ספוגית כותנה. כבה שוב את כל האורות והצב קופסה מעל הסובבן כדי להשאיר את החיה בחושך. לפני תחילת בדיקת הרפלקס האופקי פרוזיבולו-עיני באמצעות סיבובים זוויתיים סינוסואידיים סביב ציר אנכי עם תדרים שונים ו / או מהירות שונות.

כאשר ההקלטה השנייה הסתיימה, להחזיר את העכבר לכלוב שלה תחת מנורת אינפרא אדום עם ניטור עד החיה הוא התאושש לחלוטין מן ההשפעות המשניות vasodilator של pilocarpine. לאחר שבועיים של לבישת מכשיר מזויף או פסים, תגובות הרפלקס האפסיבולו-עיני של העכברים המזויפות נשארות ללא שינוי לאחר ההסתגלות, בעוד שבעלי החיים המותאמים למכשיר המפוספסים מדגימים תגובת רפלקס שנפגעה באופן דרסטי. כימות של רווחי רפלקס שיוויץ-עיניים הממוצע בתדירות קבועה של 0.5 הרץ וב 40 מעלות לשנייה לפני ואחרי פרוטוקול אי התאמה חזותית-שיוויוני מגלה ירידה חזקה ברווח בעכברים שלבשו את המכשיר פסים בעוד העכברים מזויפים לא הראו שינויים משמעותיים רווח.

עם זאת, הרפלקס האופטוקינטי של עכברים שלובשים את מכשיר הפסים דומה לזה שנצפה בתקופה שקדמה לפרוטוקול שיוויון הראייה ולזה שהוכח על ידי בעלי החיים המזויפות. הקפד לפקח על העכברים מדי יום ולוודא שההתקן ממוקם כראוי על העכברים וגם שהוא אינו מעכב את שגרת חייהם. בעקבות הליך זה במבחנה electrophysiology או הדמיה עצבית לזיהוי מנגנוני הסתגלות sellar או בדיקות התנהגותיות לחקר יציאות רפלקס שונות ניתן לבצע.