El objetivo general de este protocolo es producir un conflicto sensorial persistente para el estudio del aprendizaje a largo plazo en ratones que se comportan libremente. Al reducir el costo experimental y el tiempo del aprendizaje sensorial, este enfoque se adapta a la combinación de experimentos in vivo e in vitro. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco en un ratón sedado, utilice un par de fórceps contundentes para agarrar la piel en la parte posterior de la cabeza y use tijeras para hacer una incisión longitudinal de un cm y medio para exponer el cráneo.
Rasque suavemente el periosteo con un bisturí y aplique una gota de activador verde en el centro del cráneo para aumentar la permeabilidad ósea. A continuación, mezcle una cucharada de polímero del kit de implantación con cinco gotas de monómero y una gota de catalizador y cepille una generosa cantidad de mezcla de cemento entre los puntos de referencia del cráneo de lambda y bregma. Usando un movimiento de deslizamiento de lambda a bregma, coloque rápidamente el poste de la cabeza en el cemento y vuelva a aplicar cemento adicional alrededor de la parte inferior del poste para asegurarse de que el poste de la cabeza se pegue firmemente al cráneo.
Mientras el cemento se seca, mezclar el polvo de resina con líquido de resina a una consistencia suave y aplicar la mezcla de resina resultante al cemento seco y alrededor del poste de la cabeza. Después de dejar que la resina se seque durante tres minutos, utilice una sutura Vicryl 4-0 para cerrar la piel en la parte posterior de las orejas y use un hisopo de algodón para aplicar una solución de 10 a 20% de yodo a la incisión. A continuación, coloque el animal bajo una luz roja con monitoreo hasta la recuperación completa.
Cuarenta y ocho horas después de la cirugía alinear los agujeros en el dispositivo a rayas con los orificios en el poste de la cabeza y utilizar un destornillador hexagonal de 1,3 mm y dos tornillos de 1,2 mm para fijar el dispositivo a la señal de la cabeza. Recomendamos fijar el dispositivo en el poste de la cabeza con la ayuda de un segundo operador para evitar el riesgo de arrancar el poste de la cabeza o herir al animal con el destornillador. Para fijar la condición falsa, gire el dispositivo al revés y con la parte posterior del dispositivo mirando hacia la dirección rostral alinee los agujeros del dispositivo con los orificios en el poste.
Confirme que el dispositivo está bien asegurado y no puede ser retirado por el animal y que el dispositivo no aplica presión directamente sobre la nariz, lo que podría causar dolor, dificultades respiratorias o lesiones en la piel. Como los ratones pueden presentar algunas anomalías conductuales durante las primeras 48 horas de uso del dispositivo, monitoree a los animales de cerca durante este tiempo y proporcione un fácil acceso a los alimentos y al agua hasta que los animales se aclimatan. Pesar los ratones inmediatamente después de la implantación y de nuevo cada 24 horas después hasta el final del experimento, dando especial atención a los ratones que llevan el dispositivo a rayas.
Para registrar la respuesta sensorial de los animales adaptados al dispositivo, fije el primer ratón en el plato giratorio con los tornillos insertados en el poste de la cabeza y coloque una cúpula de pantalla alrededor del animal. Apague todas las luces de la habitación, excepto el proyector optocinético, e inicie la grabación de estimulación de campo completo con reflejo optocinético a varias velocidades diferentes en el sentido de las agujas del reloj y en el sentido contrario a las agujas del reloj. Tan pronto como terminen las grabaciones, retire la cúpula y encienda las luces.
Para registrar el reflejo vestibulo-ocular en la oscuridad de tono, aplicar una gota de 2%pilocarpina en los ojos del animal y esperar al menos cinco minutos antes de retirar suavemente la pomada con un hisopo de algodón. Apague todas las luces de nuevo y coloque una caja sobre el tocadiscos para mantener al animal en tono oscuro. Antes de iniciar la prueba horizontal de reflejos vestibulo-oculares utilizando rotaciones angulares sinusoidales alrededor de un eje vertical con diferentes frecuencias y/o velocidades diferentes.
Una vez finalizada la segunda sesión de grabación, devuelva el ratón a su jaula bajo una lámpara infrarroja con monitoreo hasta que el animal esté completamente recuperado de los efectos vasodilatadores secundarios de la pilocarpina. Después de dos semanas usando una farsa o un dispositivo a rayas, las respuestas reflejo vestibulo-oculares de los ratones falsos permanecen inalteradas después de la adaptación, mientras que los animales adaptados a dispositivos a rayas demuestran una respuesta reflejo drásticamente comprometida. La cuantificación de las ganancias medias de reflejo vestibulo-ocular a una frecuencia fija de 0,5 hercios y a 40 grados por segundo antes y después del protocolo de desajuste visual-vestibular revela una fuerte disminución de la ganancia en los ratones que llevaban el dispositivo a rayas, mientras que los ratones falsos no presentaban cambios significativos en la ganancia.
Sin embargo, el reflejo optocinético de los ratones que llevan el dispositivo a rayas es comparable al observado durante el período anterior al protocolo visual-vestibular y al demostrado por los animales falsos. Asegúrese de monitorear los ratones diariamente y asegurarse de que el dispositivo está correctamente posicionado en los ratones y que no impide sus rutinas. Siguiendo este procedimiento se puede realizar electrofisiología in vitro o imágenes neuronales para identificar mecanismos de adaptación sellar o ensayos conductuales para el estudio de diferentes resultados de reflejos.
