Общая цель этого протокола состоит в том, чтобы создать постоянный сенсорный конфликт для изучения долгосрочного обучения у свободно ведя себя мышей. Снижая экспериментальную стоимость и время сенсорного обучения, этот подход вмещает сочетание экспериментов in vivo и in vitro. После подтверждения отсутствия ответа на щепотку ноша в подкидной мыши, использовать пару тупых щипцы, чтобы схватить кожу на задней части головы и использовать ножницы, чтобы сделать полтора см продольный разрез, чтобы разоблачить череп.
Аккуратно поцарапать periosteum скальпелем и применить каплю зеленого активатора на середину черепа, чтобы увеличить проницаемость костей. Затем смешайте одну ложку полимера из комплекта имплантации с пятью каплями мономера и одной каплей катализера и почистите щедрое количество цементной смеси между ориентирами черепа ламбды и брегмы. Используя проводя движение от лямбды до брегмы, быстро поместите головной столб на цемент и повторно наклейте дополнительный цемент вокруг нижней части столба, чтобы убедиться, что головной столб надежно прилипает к черепу.
Пока цемент высыхает, смешайте порошок смолы с жидкостью смолы до однородной консистенции и нанесите полученную смесь смолы на высушенный цемент и вокруг головного столба. После того, как смола высохнет в течение трех минут, используйте шов Vicryl 4-0, чтобы закрыть кожу в задней части ушей и использовать ватный тампон, чтобы применить 10 до 20%йода раствор для разреза. Затем поместите животное под красный свет с мониторингом до полного выздоровления.
Сорок восемь часов после операции выровнять отверстия в полосатом устройстве с отверстиями в головном столбе и использовать 1,3 мм шестиугольник и два 1,2 мм винты для обеспечения устройства к головному столбу. Мы рекомендуем зафиксировать устройство на головной столб с помощью второго оператора, чтобы избежать риска срыва головного столба или травмирования животного отверткой. Чтобы исправить фиктивное состояние, переверните устройство вверх дном и с задней частью устройства, обращенной к ростральному направлению, выровняете отверстия в устройстве с отверстиями в головной столбе.
Подтвердите, что устройство хорошо защищено и не может быть удалено животным и что устройство не оказывает давления непосредственно на нос, что потенциально может вызвать боль, затрудненное дыхание или повреждение кожи. Поскольку мыши могут проявлять некоторые поведенческие отклонения в течение первых 48 часов ношения устройства, внимательно следить за животными в течение этого времени и обеспечить легкий доступ к пище и воде, пока животные не акклиматизированы. Взвешивание мышей сразу после имплантации и снова каждые 24 часа после окончания эксперимента, удавая особое внимание мышей носить полосатые устройства.
Чтобы зафиксировать сенсорную реакцию приспособленных к устройству животных, закрепьте первую мышь на поворотном круге с винтами, вставленными в головной столб, и поместите купол экрана вокруг животного. Выключите все огни в комнате, за исключением оптокинетического проектора и запустите оптокинетический рефлекс полной записи стимуляции поля на нескольких различных скоростях как по часовой стрелке, так и против часовой стрелки. Как только записи закончены, снимите купол и включите свет.
Чтобы записать вестибуло-глазной рефлекс в кроменотной темноте, нанесите каплю 2%pilocarpine на глаза животного и ждать по крайней мере пять минут, прежде чем аккуратно удалить мазь с ватным тампоном. Выключите все огни снова и поместите коробку над вертушка, чтобы держать животное в кроме темном состоянии. Перед началом горизонтального вестибуло-глазного рефлекс-теста с использованием синусоидальных угловых вращений вокруг вертикальной оси с различными частотами и/или различными скоростями.
Когда вторая сессия записи будет закончена, верните мышь в клетку под инфракрасной лампой с мониторингом до тех пор, пока животное полностью не оправится от вторичных вазодилататорных эффектов пилокарпина. После двух недель ношения либо обман или полосатые устройства, вестибуло-глазной рефлекторной реакции фиктивных мышей остаются неизменными после адаптации, в то время как полосатые устройства адаптированных животных демонстрируют резко скомпрометированы рефлекторной реакции. Количественная оценка среднего вестибуло-глазного рефлекса увеличивается с фиксированной частотой 0,5 герц и на 40 градусов в секунду до и после визуально-вестибулярного протокола несоответствия показывает сильное снижение усиления у мышей, которые носили полосатое устройство, в то время как фиктивные мыши не проявляли значительных изменений усиления.
Однако оптокинетический рефлекс мышей, ношения полосатого устройства, сопоставим с тем, что наблюдалось за период до визуально-вестибулярной протокола, и с тем, что демонстрировали фиктивные животные. Будьте уверены, чтобы контролировать мышей ежедневно и убедиться, что устройство правильно расположен на мышах, и что это не мешает их процедуры. После этой процедуры в пробирке электрофизиологии или нейрональной визуализации для выявления механизмов проллярной адаптации или поведенческие анализы для изучения различных рефлекторных выходов могут быть выполнены.
