L’objectif global de ce protocole est de produire un conflit sensoriel persistant pour l’étude de l’apprentissage à long terme chez les souris qui se comportent librement. Réduisant le coût expérimental et le temps de l’apprentissage sensoriel, cette approche s’adapte à la combinaison d’expériences in vivo et in vitro. Après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des orteils chez une souris sédation, utilisez une paire de forceps contondants pour saisir la peau à l’arrière de la tête et utilisez des ciseaux pour faire une incision longitudinale d’un cm et demi pour exposer le crâne.
Grattez doucement le périoste avec un scalpel et appliquez une goutte d’activateur vert sur le milieu du crâne pour augmenter la perméabilité osseuse. Ensuite, mélangez une cuillerée de polymère du kit d’implantation avec cinq gouttes de monomère et une goutte de catalyseur et brossez une généreuse quantité de mélange de ciment entre les repères du crâne lambda et bregma. À l’aide d’un mouvement de balayage de lambda à bregma, placez rapidement le poteau sur le ciment et réappliquez du ciment supplémentaire autour de la partie inférieure du poteau pour s’assurer que le poteau de tête colle solidement au crâne.
Pendant le séchage du ciment, mélanger la poudre de résine avec du liquide résineux à une consistance lisse et appliquer le mélange de résine qui en résulte sur le ciment séché et autour du phare. Après avoir laissé sécher la résine pendant trois minutes, utilisez une suture Vicryl 4-0 pour fermer la peau à l’arrière des oreilles et utilisez un coton-tige pour appliquer une solution d’iode de 10 à 20 % sur l’incision. Placez ensuite l’animal sous un feu rouge avec surveillance jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli.
Quarante-huit heures après l’intervention, alignez les trous dans l’appareil rayé avec les trous dans le poteau avant et utilisez un tournevis hex de 1,3 mm et deux vis de 1,2 mm pour fixer l’appareil au phare. Nous recommandons de fixer l’appareil sur le poteau principal avec l’aide d’un deuxième opérateur afin d’éviter le risque d’arracher le phare ou de blesser l’animal avec le tournevis. Pour corriger l’état factice, tournez l’appareil à l’envers et avec la partie arrière de l’appareil face à la direction rostrale aligner les trous dans l’appareil avec les trous dans le poteau de tête.
Confirmez que l’appareil est bien fixé et ne peut pas être enlevé par l’animal et que l’appareil n’applique pas de pression directement sur le nez, ce qui pourrait causer de la douleur, des difficultés respiratoires ou des lésions cutanées. Comme les souris peuvent présenter certaines anomalies comportementales au cours des 48 premières heures de port de l’appareil, surveiller les animaux de près pendant ce temps et fournir un accès facile à la nourriture et à l’eau jusqu’à ce que les animaux s’acclimatent. Pesez les souris immédiatement après l’implantation et de nouveau toutes les 24 heures par la suite jusqu’à la fin de l’expérience, en accordant une attention particulière aux souris portant l’appareil rayé.
Pour enregistrer la réponse sensorielle des animaux adaptés à l’appareil, fixez la première souris sur la plaque tournante avec les vis insérées dans le phare et placez un dôme d’écran autour de l’animal. Éteignez toutes les lumières de la pièce à l’exception du projecteur optocinétique et démarrez l’enregistrement optocinétique de stimulation complète du champ réflexe à plusieurs vitesses différentes dans le sens des aiguilles d’une montre et dans le sens inverse des aiguilles d’une montre. Dès que les enregistrements sont terminés, retirez le dôme et allumez les lumières.
Pour enregistrer le réflexe vestibulo-oculaire dans l’obscurité, appliquez une goutte de 2% de pilocarpine sur les yeux de l’animal et attendez au moins cinq minutes avant d’enlever doucement l’onguent avec un coton-tige. Éteignez à nouveau toutes les lumières et placez une boîte sur la plaque tournante pour garder l’animal dans l’obscurité. Avant de commencer l’essai horizontal de réflexe vestibulo-oculaire utilisant des rotations angulaires sinusoïdes autour d’un axe vertical avec différentes fréquences et/ou vitesses différentes.
Lorsque la deuxième session d’enregistrement est terminée, remettre la souris dans sa cage sous une lampe infrarouge avec surveillance jusqu’à ce que l’animal soit complètement récupéré des effets vasodilatateurs secondaires de la pilocarpine. Après deux semaines à porter une feinte ou un dispositif rayé, les réponses réflexes vestibulo-oculaires des souris factices restent inchangées après l’adaptation, tandis que les animaux rayés adaptés à l’appareil démontrent une réponse réflexe radicalement compromise. Quantification des gains réflexes vestibulo-oculaires moyens à une fréquence fixe de 0,5 hertz et à 40 degrés par seconde avant et après le protocole d’inadéquation visual-vestibulaire révèle une forte diminution de gain chez les souris qui portaient le dispositif rayé tandis que les souris factices n’ont pas exhibé des changements significatifs de gain.
Cependant, le réflexe optocinétique des souris portant l’appareil rayé est comparable à celui observé pour la période précédant le protocole visuel-vestibulaire et à celui démontré par les animaux factices. Assurez-vous de surveiller les souris quotidiennement et de s’assurer que l’appareil est correctement positionné sur les souris et qu’il n’entrave pas leurs routines. Suite à cette procédure, l’électrophysiologie in vitro ou l’imagerie neuronale pour identifier les mécanismes d’adaptation sellaire ou les analyses comportementales pour étudier différentes sorties réflexes peuvent être effectuées.
