מלנומה מאובחנת באופן נרחב ברחבי העולם, עם שכיחות גוברת. פרוטוקולים אלה מאפשרים את השלבים המוקדמים של ייזום מלנומה להיות נשלט בקפידה, להקל על המחקר של הפיתוח שלה. על ידי שליטה בזמן ובמיקום של הפעלת תאי גזע מלנוציטים, יש לנו את היכולת להבחין בשינויים בתוך אוכלוסיית תאי הגזע וייזום המלנומה הזן החדש שלה.
הדגמת ההליך תהיה דאהים קים ולואיאן, סטודנטים לתואר שני מהמעבדה. יומיים עד שלושה ימים לפני תחילת ההליך, השתמש גוזם חשמלי לגלח את העור הגבי מכל עכבר הרדמה בן שבעה שבועות. ביום הניסוי, השתמש ספוגית כותנה להחיל שכבה דקה של קרם depilatory על העור החשוף.
לאחר הקרם כבר מיושם באופן שווה, להשתמש במטליות כותנה נקיות כדי להסיר את השמנת, ואחריו ניגוב עדין עם מטלית לחה כדי להסיר כל קרם שיורית. ואז להחזיר כל עכבר לכלוב הבית שלה עם ניטור עד החלמה מלאה. להקרנת UV-B, מכסים את העור הגבי בחומר מגן UV-B כך שרק האזור הרצוי ייחשף, ומכסים את תא ה- UV במכסה עמיד בפני UV.
לאחר מכן הפעל את מנורת UV-B כדי להקרנת העכבר לתקופת הזמן הניסיונית המתאימה לפני החזרת העכבר לכלוב ריק עם ניטור עד להחלמה מלאה. כדי לבודד את דגימות העור, השתמש גוזם חשמלי כדי להסיר כל שערה מאזור העור הגבי של העכברים מוקרנים המתת חסד, ולהבריש קלות את העור החשוף עם רקמה ללא מוך כדי לנקות את האזור. בצע חתך קטן עם מספריים חדים ממש מעל בסיס הזנב והכנס מספריים גדולים וקהים לחתך כדי להפריד את רקמות החיבור התת עוריות.
באמצעות מספריים חדים, לחתוך בזהירות לאורך קצה אזור העור של עניין לבודד את דגימת הרקמה ומניחים את רקמת העור excised על מגבת נייר נקי. לאחר מכן השתמש מטלפים עמומים כדי למתוח את העור, כך שהוא דבק במגבת והוא מתוח. כאשר כל הדגימות נקצרו, מניחים דגימת עור ומגבת נייר בחזרה לתוך פיסת נייר מסנן מקופל מיד סמוך לקמט, דואג כי המדגם הוא חלק ולא מקופל או מקומט.
סגור את צידי נייר הסינון עם סיכות הידוק וקצץ את הנייר. לאחר מכן תוכלו להטביע את הדגימות בפורמלין חיץ ניטרלי של 10% למשך שלוש עד חמש שעות בטמפרטורת החדר לפני שטיפת הרקמות עם שתי שטיפות של חמש דקות במים מיונים. לאחר הכביסה השנייה, להסיר בזהירות כל חומר שיורית מרקמות העור, לקצץ את הקצוות של הדגימות, כך שהם לא משוננים.
לאחר מכן, בצע שלושה חתכים קשתיים בכל מדגם, כך רוחב הרצועות הוא לא יותר מחמישה מילימטרים, ולעשות חתכים רוחביים, כך הדגימות הם לא יותר מ 20 מילימטרים רוחב. מקם תבנית קריו המכילה טמפרטורת חיתוך אופטימלית או מדיום OCT בכיוון לאורך, והצב ארבע עד חמש חתיכות עור על גבי OCT. כאשר כל החלקים נמצאים במקום, להשתמש בשני זוגות של מדפים עדין להביא את הקצה הארוך של כל פיסת עור לתחתית עובש cryo, כך הדגימות הן אנכיות בתוך OCT בניצב לבסיס התבנית.
לאחר מכן מלאו את התבנית ב- OCT נוסף בשפה השנייה וה מניחים את התבנית על משטח שטוח של חתיכת קרח יבש, תוך שימוש במטחנים כדי להתאים את כל חתיכות העור שאולי עברו במהלך ההעברה כאשר הבלוק מתחיל לקפוא לפי הצורך. כאשר עכברים הם שבעה שבועות לאחר הלידה, העור הגבי שלהם הוא בטלוגן. במהלך טלוגן, זקיק השיער ותאי גזע מלנוציטים ידועים להיות במצב מנוחה רזה, ואת העור צריך להראות שום צמיחת שיער משמעותית לאחר הגילוח.
דפילציה כימית, עם זאת, יכול לגרום להפעלת תאי גזע זקיק השיער, גרימת צמיחת שיער משמעותית בתוך האזור של עניין. כמו depilation כימי יכול לגרום באופן משמעותי את ההפעלה של זקיק השיער ותאי גזע מלנוציטים, תאי גזע מלנוציטים נוטה מלנומה במצב פעיל יכול ליצור גידולים חניכה מלנומה מיקרוסקופית ניתן לראות בתוך שבועיים של depilation כימי. הקרנה UV-B יכול גם לגרום חניכה הגידול מן ההפוגה, גידול נוטה מלנוציטים תאי גזע.
חשוב לציין, UV-B גורם טרנסלוקציה ישירה של תאי גזע מלנוציטים מן נישה תאי גזע זקיקי שלהם האפידרמיס בין הזקיקים. יתר על כן, UV-B יכול לגרום תאי גזע מלנוציטים שמקורם היווצרות מלנומה עורית לאורך האפידרמיס interfollicular. בדומה לעור הגבי, חניכת מלנומה הנגרמת על ידי UV-B ניתן לראות בעיקר באזורי עור אחרים, כגון עור האוזן.
ואכן, בהשוואה לעור האוזן שליטה, מכוסה בד עמיד UV, עור האוזן חשוף UV-B מדגים פיגמנטציה גבוהה יותר בשל נטל גבוה יותר של חניכת מלנומה. מינונים שונים של UV-B עשויות להיות השפעות שונות על העור של העכבר ופעילות melanocyte. לכן, חשוב לקבוע ולייעל את מינון ההקרנה לפני תחילת הניסוי.
