לכן, זוהי ספקטרומטריית מסת סביבה ייחודית, המתאימה במיוחד לניתוח דגימות ביולוגיות, הן במבחנה והן במבחנה. מכיוון שזה אינו דורש באופן קבוע טיפול מקדים מיוחד של דגימות, כגון מיון תאים, שברים וריכוז, הוא יכול לנתח מדגם עם אובדן מינימלי של רכיבים ביולוגיים, במיוחד אלה הקיימים כמות קטנה מאוד. טכניקה זו מאפשרת לך לנתח את חומרי רקמת הגלם ישירות בדקה על ידי ספקטרומטריית מסה.
המהירות היא ללא הפרעה החוסן של המערכת, היתרונות העיקריים הטבועים בטכניקה זו. כל מה שאתה צריך לעשות הוא רק כדי להכין סיליקה, 10 מיליגרם של דגימת רקמות, ו 10 microliters של להתרבות. ולשים אותם לתוך מחסנית חד פעמית.
הוא מוגדר למכונת PESI-MS, ותקבל את התוצאה תוך מספר דקות. על ידי בחירת ספקטרומטר המסה המתאים, אתה יכול להוסיף ביאורים לזהות המולקולרית. כדי להתחיל, לאחזר את הכבד או רקמת הכליה מהמקפיא.
על צלחת פקק, לחתוך את דגימת הרקמה על שניים על שניים על שני מילימטרים באמצעות אזמל או סכין. לחלופין, אגרוף את המדגם עם Trepan לקצץ את אורך העמודה לשני מילימטרים. אם הרקמה מזוהמת בדם, יש לשטוף בקצרה עם מלוחים קרים כקרח.
מניחים כ -10 מיליגרם של דגימת החתך או אגרוף החוצה לתוך microtube פלסטיק ולהוסיף 100 microliters של 50% אתנול. השתמש micropestle כדי הומוגניזציה המדגם. ואז עם pipetman, למקם 10 microliters של homogenate לתוך הבאר של המחסנית של ספקטרומטר המסה.
מניחים את המחסנית בתא היוניזציה של ספקטרומטר מסה יינון בדיקה ישירה ולהתקין את בדיקה מחט לגנוב אל חלד שישמש עבור יינון מדגם. סגור את מכסה התא בחוזקה כדי להפעיל באופן אוטומטי את התקן הבטיחות. הפעל את המחשב על הלוח על ידי לחיצה על סמל ההתחלה לנתח, באמצעות לוחות על המסך, להחיל מתח של 2.3 קילובולטים על המחט כדי ליצור את electrospray ולהבטיח כי התדירות של המחט הוא שלושה הרץ.
המתן 30 שניות עד שהמדידה תושלם. לאחר מדידת כל דגימה, יש להשליך את המחסנית והמחט במנושל biohazard. כדי לנתח את ספקטרום המסה, פתח את התוכנה הקשורה לספקטרומטר המסה.
לחץ על קובץ L-C-D בחלון דפדפן קובץ הנתונים של התוכנה. בחירה ללחוץ על שיא אחד של חלון ספקטרום המסה, ולתאר באופן אוטומטי E-I-C. בדוק את T-I-C ו- E-I-C, ולחץ על סמל הספקטרום הממוצע כדי לבחור את טווח הזמן ליצירת ספקטרום המסה.
יצא את נתוני הטקסט הספקטרליים של המסה. כדי לנתח נוזלי גוף, יש להכין עד 10 מיקרוליטר של דגימת הסרום, ולחלק אותה למיקרו-צינור של 1.5 מיליליטר. מוסיפים 190 מיקרוליטרים של 50% אתנול לצינור, ואז מערבולת לשתי דקות בטמפרטורת החדר.
כדי לחסל את כל תאי הדם האדומים, צנטריפוגה הנוזל ב 15, 000 פעמים G במשך 1 עד 5 דקות בארבע מעלות צלזיוס. להעביר 10 microliters של supernatant לתוך הבאר של המחסנית ולהמשיך למדוד על ספקטרומטר המסה כמו קודם לכן. פרוטוקול זה מציג הכנת מדגם עבור PESI-MS על מדגם מוצק, מדגם נוזלי, ובעלי חיים חיים.
קרצינומה של תאי הכליה האנושיים מראה פסגות אופייניות של שומנים ניטרליים. היו פסגות חזקות יחסית בספקטרום ביחס מסה לטעינה של 900 מרקמה קרצינומה של תאי הכליה האנושיים שלא זוהו ברקמה הלא סרטנית שמסביב. פסגות אלה מייצגות בעיקר טריאצ'יל גליצרול.
דוגמה לנתונים שנרכשו ברקמות כבד רגילות, תיארו את הנגע הניאופלסטי של חולה עם הפטיטיס כרונית ושחמת הכבד. סרום אנושי משלושה אנשים נותח באמצעות PESI-MS, היו הבדלים ברורים בדפוסים הספקטרליים בקרב האנשים. עבור השינויים המטבוליים ב 5-FdU מוזרק דרך הווריד לתוך כלי הזנב של העכבר, זיהוי מהיר מאוד ורגיש של 5-FdU עם adduct נתרן הושג בכבד במקום.
כמו העומק של קצה המחט מאתר הרקמה, ממלא את התפקיד החשוב ביותר יינון שקורא את רכישת נתונים מוצלחת, הקפד לעקוב אחר ההוראות. אתה יכול לזהות את המין המולקולרי על ידי התבוננות במסד הנתונים המסחרי. זוהי דרך להכשיר את המנגנון המולקולרי של המחלה.
חוקרים רבים הפכו מעוניינים ביישום של טכניקה זו לחיזוי השגשוג של המחלה וזה פרוגנוזה. במיוחד באמצעות ביופסיה של ריקט. רק תוודא שלא תידקר על ידי מחט הגשוש.
זה יכול פשוט להימנע עם מכשיר מסוים להסרת המחט מהמכונה.
