Es handelt sich also um eine einzigartige Umgebungsmassenspektrometrie, die sich besonders für die Analyse biologischer Proben sowohl in vitro als auch in vivo eignet. Da dies keine regelmäßige Vorbehandlung von Proben wie Zellsortierung, Fraktionierung und Konzentration erfordert, kann es eine Probe mit minimalem Verlust biologischer Komponenten analysieren, insbesondere solche, die als sehr kleine Menge vorhanden sind. Mit dieser Technik können Sie die Rohgewebematerialien direkt in einer Minute durch Massenspektrometrie analysieren.
Schnelligkeit ist unbehindert in der Robustheit des Systems, Hauptvorteile dieser Technik inhärent. Alles, was Sie tun müssen, ist nur Kieselsäure vorzubereiten, 10 Milligramm Gewebe Probe, und 10 Mikroliter von Vermehrung. Und legen Sie sie in Einwegpatrone.
Es ist auf den PESI-MS-Computer eingestellt, und Sie erhalten das Ergebnis in wenigen Minuten. Wenn Sie das entsprechende Massenspektrometer auswählen, können Sie die molekulare Identität kommentieren. Um zu beginnen, holen Sie die Leber oder Nierengewebe aus dem Gefrierschrank.
Schneiden Sie die Gewebeprobe auf einer Korkplatte mit einem Skalpell oder Messer auf etwa zwei mal zwei mal zwei Millimeter. Alternativ können Sie die Probe mit dem Trepan ausstechen und die Länge der Säule auf zwei Millimeter trimmen. Wenn das Gewebe mit Blut kontaminiert ist, kurz mit eiskalter Phosphat-gepufferter Saline waschen.
Etwa 10 Milligramm der geschnittenen oder ausgestanzten Probe in ein Kunststoff-Mikrorohr geben und 100 Mikroliter 50% Ethanol hinzufügen. Verwenden Sie ein Mikroschädling, um die Probe zu homogenisieren. Dann mit dem Pipettenmann 10 Mikroliter des Homogenats in den Brunnen der Patrone des Massenspektrometers legen.
Legen Sie die Patrone in die Ionisationskammer des Direct Probe Ionization Mass Spectrometer und installieren Sie die Edelstahl-Steal-Nadelsonde, die für die Probenionisierung verwendet wird. Schließen Sie den Kammerdeckel fest, um die Sicherheitsvorrichtung automatisch zu aktivieren. Starten Sie den Bordcomputer, indem Sie auf das Startsymbol klicken, um mithilfe der Bildschirmpanels eine Spannung von 2,3 Kilovolt auf die Nadel anzuwenden, um das Elektrospray zu erzeugen und sicherzustellen, dass die Frequenz der Nadel drei Hertz beträgt.
Warten Sie 30 Sekunden, bis die Messung abgeschlossen ist. Nach der Messung jeder Probe die Patrone und die Nadel in einem Biogefährdungsdeerlader entsorgen. Um die Massenspektren zu analysieren, öffnen Sie die Software, die mit dem Massenspektrometer verknüpft ist.
Klicken Sie im Browserfenster der Datendatei der Software auf die Datei L-C-D. Klicken Sie auf eine einzelne Spitze des Massenspektrumfensters und stellen Sie automatisch ein E-I-C dar. Überprüfen Sie die T-I-C und E-I-C, und klicken Sie auf das Symbol des durchschnittlichen Spektrums, um den Bereich des Zeitfensters für die Erzeugung des Massenspektrums auszuwählen.
Exportieren Sie die Massenspektraltextdaten. Um Körperflüssigkeiten zu analysieren, ziehen Sie bis zu 10 Mikroliter der Serumprobe und geben Sie sie in ein 1,5 Milliliter Mikrotube. 190 Mikroliter 50% Ethanol in die Röhre geben und dann bei Raumtemperatur zwei Minuten wirbeln.
Um alle roten Blutkörperchen zu eliminieren, zentrieren Sie die Flüssigkeit bei 15.000 Mal G für ein bis fünf Minuten bei vier Grad Celsius. Übertragen Sie 10 Mikroliter des Überstandes in den Brunnen der Patrone und messen Sie wie bisher das Massenspektrometer. Dieses Protokoll zeigt die Probenvorbereitung für PESI-MS bei festen Proben, flüssigen Proben und lebenden Tieren.
Das karzinom der menschlichen Nierenzell zeigt charakteristische Spitzen neutraler Lipide. Es gab relativ starke Spitzen in den Spektren beim Massen-Zu-Ladungs-Verhältnis von 900 aus dem menschlichen Nierenzellkarzinomgewebe, die im umgebenden nicht-kanzerösen Gewebe nicht identifiziert wurden. Diese Spitzen stellen hauptsächlich Triacylglycerin dar.
Beispiel für Daten, die in normalen Lebergeweben erfasst wurden, zeigten die neoplastische Läsion eines Patienten mit chronischer Hepatitis und Leberzirrhose. Humanes Serum von drei Individuen wurde mit PESI-MS analysiert, es gab deutliche Unterschiede in den Spektralmustern zwischen den Individuen. Für die metabolischen Veränderungen in 5-FdU, die intravenely in das Schwanzgefäß einer Maus injiziert wurden, wurde ein sehr schneller und empfindlicher Nachweis von 5-FdU mit Natriumaddukt in der Leber in situ erreicht.
Da die Tiefe der Nadelspitze von der Stelle des Gewebes, spielt die wichtigste Rolle bei der Ionisierung, die die erfolgreiche Datenerfassung liest, stellen Sie sicher, die Anweisungen zu befolgen. Sie können die molekularen Arten identifizieren, indem Sie sich die kommerzielle Datenbank ansehen. Dies ist ein Weg, um den molekularen Mechanismus der Krankheit zu qualifizieren.
Viele Forscher haben sich für die Anwendung dieser Technik für die Vorhersage des Wohlstands von Krankheiten und es ist Prognose interessiert. Vor allem mit Ricket Biopsie. Achten Sie einfach darauf, nicht von der Sondennadel gestochen zu werden.
Dies kann einfach mit einem speziellen Instrument zum Entfernen der Nadel aus der Maschine vermieden werden.
