Quindi, questa è una spettrometria di massa ambientale unica, particolarmente adatta per l'analisi di campioni biologici, sia in vitro che in vivo. Poiché ciò non richiede regolarmente uno speciale pretrattamento di campioni, come lo smistamento cellulare, il frazionamento e la concentrazione, può analizzare un campione con perdita minima di componenti biologici, specialmente quelli che esistono come quantità molto piccola. Questa tecnica consente di analizzare le materie prime direttamente in un minuto mediante spettrometria di massa.
La rapidità è senza resistenza nel sistema, i principali vantaggi inerenti a questa tecnica. Tutto quello che devi fare è solo preparare silice, 10 milligrammi di campioni di tessuti e 10 microlitri di proliferano. E mettili in una cartuccia usa e getta.
È impostato sulla macchina PESI-MS e otterrai il risultato in pochi minuti. Scegliendo lo spettrometro di massa appropriato, è possibile annotare l'identità molecolare. Per iniziare, recuperare il fegato o il tessuto renale dal congelatore.
Su una piastra di sughero, tagliare il campione di tessuto a circa due per due per due millimetri usando un bisturi o un coltello. In alternativa, punzonare il campione con il Trepan e tagliare la lunghezza della colonna a due millimetri. Se il tessuto è contaminato dal sangue, lavare brevemente con soluzione salina tamponata da fosfati ghiacciati.
Posizionare circa 10 milligrammi del campione tagliato o perforato in un microtubo di plastica e aggiungere 100 microlitri di 50%etanolo. Utilizzare una micropestola per omogeneizzare il campione. Quindi, con il pipettaio, posizionare 10 microlitri dell'omogeneato nel pozzo della cartuccia dello spettrometro di massa.
Posizionare la cartuccia nella camera di ionizzazione dello spettrometro di massa di ionizzazione a sonda diretta e installare la sonda dell'ago di furto inossidabile che verrà utilizzata per la ionizzazione del campione. Chiudere saldamente il coperchio della camera per attivare automaticamente il dispositivo di sicurezza. Avviare il computer di bordo facendo clic sull'icona di avvio per analizzare, utilizzando i pannelli sullo schermo, applicare una tensione di 2,3 kilovolt all'ago per generare l'elettrospray e assicurarsi che la frequenza dell'ago sia di tre hertz.
Attendere 30 secondi per il completamento della misurazione. Dopo aver misurato ogni campione, smaltire la cartuccia e l'ago in uno smaltitore a rischio biologico. Per analizzare gli spettri di massa, aprire il software associato allo spettrometro di massa.
Fare clic sul file L-C-D nella finestra del browser dei file di dati del software. Scegliere di fare clic su un singolo picco della finestra dello spettro di massa e di rappresentare automaticamente un E-I-C. Controllare il T-I-C e l'E-I-C e fare clic sull'icona dello spettro medio per selezionare l'intervallo di tempo per generare lo spettro di massa.
Esportare i dati di testo spettrale di massa. Per analizzare i fluidi corporei, disegnare fino a 10 microlitri del campione di siero e disrogarlo in un microtubo da 1,5 millilitri. Aggiungere 190 microlitri di 50% di etanolo al tubo, quindi vortice per due minuti a temperatura ambiente.
Per eliminare tutti i globuli rossi, centrifugare il liquido a 15.000 volte G per uno o cinque minuti a quattro gradi Celsius. Trasferire 10 microlitri del supernatante nel pozzo della cartuccia e procedere a misurare sullo spettrometro di massa come in precedenza. Questo protocollo mostra la preparazione del campione per PESI-MS su campione solido, campione liquido e animale vivente.
Il carcinoma a cellule renali umane mostra picchi caratteristici di lipidi neutri. Ci sono stati picchi relativamente forti negli spettri al rapporto massa-carica di 900 dal tessuto carcinoma a cellule renali umane che non sono stati identificati nel tessuto non canceroso circostante. Questi picchi rappresentano principalmente il glicerolo triacile.
Esempi di dati acquisiti nei normali tessuti epatici, hanno raffigurato la lesione neoplastica di un paziente con epatite cronica e cirrosi epatica. Il siero umano di tre individui è stato analizzato usando PESI-MS, c'erano chiare differenze nei modelli spettrali tra gli individui. Per i cambiamenti metabolici in 5-FdU iniettati per via endovene nel vaso di coda di un topo, è stato ottenuto un rilevamento molto rapido e sensibile di 5-FdU con addotto di sodio nel fegato in situ.
Poiché la profondità della punta dell'ago dal sito del tessuto, svolge il ruolo più importante nella ionizzazione che legge l'acquisizione dei dati di successo, assicurati di seguire le istruzioni. È possibile identificare le specie molecolari esaminando il database commerciale. Questo è un modo per qualificare il meccanismo molecolare della malattia.
Molti ricercatori si sono interessati all'applicazione di questa tecnica per prevedere la prosperità della malattia ed è la prognosi. Soprattutto usando la biopsia di Ricket. Assicurati solo di non essere pungolato dall'ago della sonda.
Questo può essere semplicemente evitato con uno strumento specifico per rimuovere l'ago dalla macchina.
