Por lo tanto, se trata de espectrometría de masas ambientales única, especialmente adecuada para analizar muestras biológicas, tanto in vitro como in vivo. Como esto no requiere regularmente un pretratamiento especial de muestras, como la clasificación celular, el fraccionamiento y la concentración, puede analizar una muestra con una pérdida mínima de componentes biológicos, especialmente aquellas que existen como cantidad muy pequeña. Esta técnica le permite analizar las materias primas directamente en un minuto por espectrometría de masas.
La rapidez es un obstáculo en la robustez del sistema, principales ventajas inherentes a esta técnica. Todo lo que tienes que hacer es preparar sílice, 10 miligramos de tejido muestra, y 10 microlitros de proliferar. Y ponlos en un cartucho desechable.
Se establece en la máquina PESI-MS, y obtendrá el resultado en unos minutos. Al elegir el espectrómetro de masas adecuado, puede anotar la identidad molecular. Para comenzar, recupere el hígado o el tejido renal del congelador.
En una placa de corcho, corte la muestra de tejido a aproximadamente dos por dos por dos milímetros usando un bisturí o cuchillo. Alternativamente, perforar la muestra con el Trepan y recortar la longitud de la columna a dos milímetros. Si el tejido está contaminado con sangre, lave brevemente con solución salina con fosfato frío helado.
Coloque aproximadamente 10 miligramos de la muestra cortada o perforada en un microtubo de plástico y agregue 100 microlitros de 50% de etanol. Utilice una micropesta para homogeneizar la muestra. A continuación, con el pipetman, coloque 10 microlitros del homogeneizar en el pozo del cartucho del espectrómetro de masas.
Coloque el cartucho en la cámara de ionización del espectrómetro de masas de ionización directa de la sonda e instale la sonda de aguja de acero inoxidable que se utilizará para la ionización de la muestra. Cierre firmemente la tapa de la cámara para activar automáticamente el dispositivo de seguridad. Inicie el ordenador de a bordo haciendo clic en el icono de inicio para analizar, utilizando los paneles en pantalla, aplicar una tensión de 2,3 kilovoltas a la aguja para generar la electrospray y asegurarse de que la frecuencia de la aguja es de tres hercios.
Espere 30 segundos a que se complete la medición. Después de medir cada muestra, deseche el cartucho y la aguja en un eliminador de riesgo biológico. Para analizar los espectros de masa, abra el software asociado con el espectrómetro de masas.
Haga clic en el archivo L-C-D en la ventana del navegador de archivos de datos del software. Al elegir, haga clic en un único pico de la ventana del espectro de masas y para representar automáticamente un E-I-C. Marque el T-I-C y el E-I-C, y haga clic en el icono del espectro promedio para seleccionar el rango de la ventana de tiempo para generar el espectro de masas.
Exporte los datos de texto espectral de masa. Para analizar los fluidos corporales, extraiga hasta 10 microlitros de la muestra de suero y prescinda en un microtubo de 1,5 mililitros. Añadir 190 microlitros de 50% etanol al tubo, luego vórtice durante dos minutos a temperatura ambiente.
Para eliminar todos los glóbulos rojos, centrifuga el líquido a 15.000 veces G durante uno a cinco minutos a cuatro grados centígrados. Transfiera 10 microlitros del sobrenadante al pozo del cartucho y proceda a medir en el espectrómetro de masas como anteriormente. Este protocolo muestra la preparación de muestras para PESI-MS en muestras sólidas, muestras líquidas y animales vivos.
El carcinoma de células renales humanas muestra picos característicos de lípidos neutros. Hubo picos relativamente fuertes en los espectros en la relación masa-carga de 900 de tejido de carcinoma de células renales humanas que no fueron identificados en el tejido no canceroso circundante. Estos picos representan principalmente glicerol triacílico.
Ejemplo de datos adquiridos en tejidos hepáticos normales, representa la lesión neoplásica de un paciente con hepatitis crónica y cirrosis hepática. Suero humano de tres individuos fue analizado usando PESI-MS, había claras diferencias en los patrones espectrales entre los individuos. Para los cambios metabólicos en 5-FdU inyectado intravenosamente en el vaso de cola de un ratón, se logró una detección muy rápida y sensible de 5-FdU con aducto de sodio en el hígado in situ.
Como la profundidad de la punta de la aguja desde el sitio del tejido, juega el papel más importante en la ionización que lee la adquisición exitosa de datos, asegúrese de seguir las instrucciones. Puede identificar las especies moleculares examinando la base de datos comercial. Esta es una manera de calificar el mecanismo molecular de la enfermedad.
Muchos investigadores se han interesado en la aplicación de esta técnica para predecir la prosperidad de la enfermedad y su pronóstico. Especialmente usando la biopsia de Ricket. Sólo asegúrese de no ser pinchado por la aguja de la sonda.
Esto se puede evitar simplemente con un instrumento específico para extraer la aguja de la máquina.
