Yani, bu eşsiz ortam kütle spektrometresi, özellikle biyolojik numuneleri analiz etmek için uygundur, hem in vitro hem de in vivo. Bu, hücre ayrışdırma, fraksiyon ve konsantrasyon gibi numunelerin düzenli olarak özel bir ön muamelesigerektirmediği için, en az biyolojik bileşen kaybı olan bir numuneyi, özellikle de çok az miktarda bulunannumuneyi analiz edebilir. Bu teknik, kütle spektrometresi ile ham doku maddelerini doğrudan bir dakika içinde analiz etmenizi sağlar.
Bu tekniğin doğasında olan başlıca avantajları olan sistemin sağlamlığında hızlılık engeldeğildir. Yapmanız gereken tek şey sadece silika hazırlamak için, dokuların örnek 10 miligram, ve çoğalır 10 mikrolitre. Ve onları tek kullanımlık kartuşa koyun.
Bu PESI-MS makine ayarlanır ve birkaç dakika içinde sonuç alırsınız. Uygun kütle spektrometresini seçerek moleküler kimliğe açıklama ekleyebilirsiniz. Başlamak için, dondurucudan karaciğer veya böbrek dokusunu alın.
Bir mantar plakası üzerinde, bir neşter veya bıçak kullanarak doku örneğini yaklaşık ikişer ikişer ikimilimetre ye kesin. Alternatif olarak, Trepan ile örnek dışarı yumruk ve iki milimetre sütunun uzunluğu kırpma. Doku kan ile kontamine ise, buz gibi fosfat tamponlu tuzlu ile kısa bir süre yıkayın.
Plastik bir mikrotüp içine kesilmiş veya delinmiş örnek yaklaşık 10 miligram yerleştirin ve% 50 etanol 100 mikrolitre ekleyin. Numuneyi homojenize etmek için bir mikroteksle kullanın. Sonra pipetman ile, kütle spektrometre kartuş kuyusuna homojen 10 mikrolitre yerleştirin.
Kartuşun doğrudan prob iyonizasyon kütle spektrometresinin iyonizasyon odasına yerleştirin ve numune iyonizasyonu için kullanılacak paslanmaz çalma iğne sondasını tökezle. Güvenlik cihazını otomatik olarak etkinleştirmek için oda kapağını sıkıca kapatın. Analiz etmek için start simgesine tıklayarak yerleşik bilgisayarı başlatın, ekrandaki panelleri kullanarak, elektrospreyi oluşturmak ve iğnenin frekansının üç hertz olduğundan emin olmak için iğneye 2,3 kilovoltluk bir voltaj uygulayın.
Ölçümün tamamlanması için 30 saniye bekleyin. Her numuneyi ölçtükten sonra, kartuş ve iğneyi biyolojik tehlike bertaraf layıcıya atın. Kütle spektrumlarını analiz etmek için, kütle spektrometresi ile ilişkili yazılımı açın.
Yazılımın veri dosyası tarayıcı penceresindeki L-C-D dosyasına tıklayın. Kitle spektrum penceresinin tek bir tepe noktasına tıklayın ve otomatik olarak bir E-I-C tasvir etmek için. T-I-C ve E-I-C'yi kontrol edin ve kütle spektrumu oluşturmak için zaman aralığını seçmek için ortalama spektrum simgesine tıklayın.
Kütle spektral metin verilerini dışa aktarın. Vücut sıvılarını analiz etmek için, serum örneğinden 10 mikrolitreye kadar çekin ve 1,5 mililitrelik bir mikrotüp içine verin. Tüpe 190 mikrolitre %50 etanol ekleyin, sonra oda sıcaklığında iki dakika girdap.
Tüm kırmızı kan hücrelerini ortadan kaldırmak için, sıvıyı 15,000 kez G'de santrifüj edin ve 4 santigrat derecede 1-5 dakika bekleyin. Süpernatantın 10 mikrolitresini kartuşun kuyuya aktarın ve daha önce olduğu gibi kütle spektrometresini ölçmeye devam edin. Bu protokol, katı numune, sıvı numune ve canlı hayvan üzerinde PESI-MS için numune hazırlama gösterir.
İnsan renal hücreli karsinom nötr lipidlerin karakteristik zirvelerini gösterir. Spektrumlarda, insan renal hücreli karsinom dokusundan 900'ün kütle-şarj oranında nispeten güçlü zirveler vardı ve bu oran çevredeki kanserli olmayan dokuda tanımlanamadı. Bu zirveler esas triasil gliserol temsil eder.
Normal karaciğer dokularında elde edilen verilere örnek olarak kronik hepatit ve karaciğer sirozu olan bir hastadan alınan neoplastik lezyon gösterilmiştir. Üç kişiden alınan insan serumu PESI-MS kullanılarak incelendi, bireyler arasında spektral desenlerde belirgin farklılıklar vardı. Bir farenin kuyruk damarına intravenöz olarak enjekte edilen 5-FdU'daki metabolik değişiklikler için, 5-FdU'nun sodyum addüktüile çok hızlı ve hassas tespiti karaciğerde yerinde sağlandı.
Doku bölgesinden iğne ucu derinliği olarak, başarılı veri toplama okur iyonizasyon en önemli rol oynar, talimatları takip emin olun. Ticari veritabanına bakarak moleküler türleri tanımlayabilirsiniz. Bu hastalığın moleküler mekanizması nitelemek için bir yoldur.
Birçok araştırmacı hastalığın refah tahmin etmek için bu tekniğin uygulanması ilgi haline gelmiştir ve prognoz' s. Özellikle raşitizm biyopsisi kullanarak. Sonda iğnesi tarafından iğnelenmediğinden emin ol.
Bu sadece makineden iğne kaldırmak için belirli bir alet ile önlenebilir.
