Таким образом, это уникальная эмбиентная масс-спектрометрия, особенно подходящая для анализа биологических образцов, как in vitro, так и in vivo. Поскольку это не требует регулярной предварительной обработки образцов, таких как сортировка клеток, фракционация и концентрация, он может анализировать образец с минимальной потерей биологических компонентов, особенно тех, которые существуют как очень небольшое количество. Этот метод позволяет анализировать сырье непосредственно в минуту с помощью масс-спектрометрии.
Быстрота заключается в надежности системы, главных преимуществах, присущих этой технике. Все, что вам нужно сделать, это просто подготовить кремнезем, 10 миллиграммов образцов тканей, и 10 микролитров размножаться. И положить их в одноразовый картридж.
Он установлен на машину PESI-MS, и вы получите результат в течение нескольких минут. Выбрав соответствующий масс-спектрометр, можно аннотировать молекулярную идентичность. Для начала извлечения печени или почечной ткани из морозильной камеры.
На пробковой пластине, вырезать образец ткани примерно на два на два миллиметра с помощью скальпеля или ножа. Кроме того, пробить образец с Trepan и обрезать длину колонны до двух миллиметров. Если ткань загрязнена кровью, промойте ее ледяным фосфатно-буферным солевым раствором.
Поместите около 10 миллиграммов вырезанного или проборезаного образца в пластиковую микротрубку и добавьте 100 микролитров 50% этанола. Используйте микропестл для гомогенизации образца. Затем с пипетщиком поместите 10 микролитров гомогената в колодец картриджа масс-спектрометра.
Поместите картридж в ионизационные камеры масс-спектрометра Direct Probe Ionization и установите зонд иглы из нержавеющей палочки, который будет использоваться для ионизации образца. Закройте крышку камеры твердо, чтобы автоматически активировать устройство безопасности. Запустите бортовой компьютер, нажав значок старта для анализа, используя экранные панели, применить напряжение 2,3 киловольты к игле для создания электроспрей и убедитесь, что частота иглы составляет три герц.
Подождите 30 секунд, пока измерение будет завершено. После измерения каждого образца, утилизировать картридж и иглу в биоопасных утилизатора. Для анализа масс-спектров откройте программное обеспечение, связанное с масс-спектрометром.
Нажмите на файл L-C-D в окне браузера файла данных программного обеспечения. Выбор нажмите на один пик окна массового спектра, и автоматически изобразить E-I-C. Проверьте T-I-C и E-I-C, и нажмите на значок среднего спектра, чтобы выбрать диапазон времени окно для генерации спектра массы.
Экспорт данных массового спектрального текста. Чтобы проанализировать жидкости организма, нарисуйте до 10 микролитров образца сыворотки и раздайте его в микротрубку объемом 1,5 миллилитров. Добавьте в трубку 190 микролитров 50%этанола, затем вихрь в течение двух минут при комнатной температуре.
Чтобы устранить все эритроциты, центрифуга жидкости при 15000 раз G в течение одной-пяти минут при четырех градусах цельсия. Перенесите 10 микролитров супернатанта в колодец картриджа и приступайте к измерению на масс-спектрометре, как и раньше. Этот протокол показывает подготовку образца для PESI-MS на твердом образце, жидком образце, и живом животном.
Карцинома почечных клеток человека показывает характерные пики нейтральных липидов. Были относительно сильные пики в спектрах при соотношении массы к заряду 900 от ткани почечной клетки человека, которые не были выявлены в окружающих нераковой ткани. Эти пики в основном представляют собой триатилглицерол.
Пример данных, полученных в нормальных тканях печени, изображал неопластическое поражение у пациента с хроническим гепатитом и циррозом печени. Человеческая сыворотка от трех особей была проанализирована с помощью PESI-MS, были явные различия в спектральных моделях среди индивидуумов. При метаболических изменениях в 5-ФЗ, внутривенно вводимых в хвостовой сосуд мыши, в печени на месте было достигнуто очень быстрое и чувствительное обнаружение 5-ФЗ с натрием аддука.
Как глубина кончика иглы от места ткани, играет наиболее важную роль в ионизации, которая читает успешное получение данных, убедитесь, что следовать инструкциям. Вы можете определить молекулярный вид, заи взглядом в коммерческую базу данных. Это способ квалифицировать молекулярный механизм заболевания.
Многие исследователи заинтересовались применением этого метода для прогнозирования процветания болезни и ее прогноза. Особенно с помощью биопсии Рикет. Просто убедитесь, что не кололи иглой зонда.
Этого можно просто избежать с помощью конкретного инструмента для удаления иглы из машины.
