L'obiettivo principale di questo studio è dimostrare una metodologia dettagliata dei test della malattia del marciume delle radici secche, come la tecnica della carta assorbente e la tecnica del vaso malato. Queste tecniche saranno utili per studiare l'interazione tra pianta di ceci e Rhizoctonia bataticola. Comprendere l'interazione della pianta di ceci con l'agente patogeno fungino Rhizoctonia bataticola è di importanza agricola.
Per questo, sono necessari saggi versatili e altamente riproducibili. Qui vengono dimostrati due saggi ampiamente utilizzati nel nostro laboratorio. Uno di questi è a base di carta assorbente, e l'altro è un saggio a base di erba malata.
Per eseguire il saggio di carta assorbente, preparare Rhizoctonia bataticola fungus inoculum scalando dalla coltura inclinata alla piastra di Petri e quindi alla coltura liquida. Preparare il vivaio di ceci, seminando semi in una grande pentola. Sradicarli e metterli nell'inoculo liquido e metterli su carta assorbente.
Osservare per i sintomi della malattia, vale a dire necrosi sulla radice, marciume radicale e ingiallimento delle foglie otto giorni dopo l'inoculazione. Mostrato qui è un guscio, i passaggi nella tecnica della carta assorbente. Per eseguire il saggio del vaso malato, inoculare il pasto di ceci con il fungo.
Dopo l'incubazione a 30 gradi Celsius per 15 giorni, si ottiene una coltura malata. Quindi, polverizzarli e mescolare con il mix di pentole. Semina semi su vaso di controllo e pentola malata.
Nei giorni seguenti, osservare i sintomi, vale a dire necrosi sulla radice, marciume radicale e ingiallimento delle foglie sulle piante infette, 10 giorni dopo la semina. Il vaso malato può essere scalato e può essere utilizzato per screening su larga scala. Mostrato qui è un guscio di passaggi nella tecnica del vaso malato.
Rhizoctonia bataticola è un agente patogeno in via di sviluppo. Questo fungo produce ife e microsclerotia, che agiscono come inuclum primario durante l'infezione vegetale. La coltura pura che si applica attraverso il metodo isolativo viene utilizzata per i saggi.
Il punto chiave per questi test di successo è il carico ottimale dell'inoculo. La dimostrazione della tecnica della carta assorbente inizia qui. Per preparare il liquido Rhizoctonia bataticola inoculum, Inoculare il brodo da 500 ml con il tappo di agar fungino della coltura di piastra fresca di tre giorni e incubare il pallone in un'incubatrice a 28 gradi Celsius per cinque giorni.
Filtrare la micelia fungina grigio scuro con microsclerotia. Sospendere in acqua autoclavata e rimuovere il supporto. Ancora una volta, filtrare la mielia e rimuovere l'umidità asciugando la micelia per alcuni minuti.
Sospendere 100 grammi di inoculo fungino in 200 ml di acqua autoclavata in una bottiglia di marmellata e mescolarlo correttamente. Sviluppare vivaio di ceci seminando semi sterilizzati superficiali in solerante. Sradicare le piante otto giorni dopo la semina, lavarle e risciacquarle con RO autoclavato. Prendi una carta assorbente e piegala una volta e posiziona metà di essa sul vassoio.
Bagnarlo con acqua autoclavata. Prendere le piante e immergersi nell'inoculo per 30 secondi con movimento intermittente su e giù. Posizionare le piante in modo tale che le radici siano coperte all'interno del foglio e folia rimanga fuori.
Piegare l'altra metà e piegare la carta. Per il controllo, immergere le piante in acqua autoclavata, tenere i vassoi in una camera di crescita per otto giorni. Risultati. Osservare per i sintomi come ingiallimento delle foglie, marciume radicale, necrosi nella radice e riduzione del numero di radice laterale.
La dimostrazione della tecnica del vaso malato inizia qui. Prendi un chilogrammo di semi di ceci commerciali. Lavare i semi con acqua del rubinetto e lavare di nuovo con l'acqua RO.
Immergere i semi per cinque ore. Ancora una volta, lavare i semi con acqua RO aggiungere 300 grammi in una bottiglia di marmellata. Autoclave a 121 LVS per 15 minuti due volte ininterrottamente.
Dopo il raffreddamento, trasferire la bottiglia attraverso il flusso laminare. Inoculare le bottiglie con tre tappi di agar fungino di circa quattro millimetri quadrati e scuoterlo bene per mescolare correttamente. Avvolgere le bottiglie e incubarle in un'incubatrice a 30 gradi Celsius per 15 giorni.
Osservare per le bottiglie con crescita miceliale scura intorno ai semi di ceci e rimuovere i semi. Asciugarli a temperatura ambiente e polverizzarli. Mescolare la polvere di Rhizoctonia bataticola con la solorite e conservarle a temperatura ambiente per cinque giorni.
La superficie sterilizza i semi GT62 e seminali a una profondità di due centimetri. Risultati. Osservare per il 90% di mortalità in vaso malato. 10 giorni dopo la semina, osservare per i sintomi come la necrosi nelle radici e la riduzione del numero di radici lateralmente e dell'ingiallimento delle foglie nei giorni successivi.
La pentola malata può essere preparata anche nel terreno di campo. Siccità e infezione da Rhizoctonia bataticola. Imporre lo stress da siccità nella pentola malata trattenendo l'acqua.
Qui sono mostrate le piante sottoposte a controllo, siccità, patogeno e siccità simultanea e stress patogeno. Osservare per i sintomi, vale a dire, più necrosi, marciume radicale e riduzione del numero di radici laterale e lunghezza della radice nel trattamento combinato dello stress rispetto al trattamento solo patogeno. Conclusioni. La tecnica della carta assorbente può essere eseguita in vitro.
La tecnica del vaso malato può essere eseguita in condizioni In Vivo. Nel porto malato, lo stress abiotico, vale a dire lo stress da siccità, può essere imposto insieme all'infezione patogena. Usando queste tecniche, si può studiare il modello di infezione patogena.
La maggior parte dei cambiamenti fisiologici si verificano durante l'interazione ceci-rhizoctonia bataticola e schermano anche i genotipi di ceci per la resistenza. Il saggio di carta assorbente è molto utile per generare campioni di qualità per studi di microscopia e biologia molecolare. Il saggio del vaso malato, che imita le condizioni naturali di infezione, è applicabile per lo screening del germoplasma dei ceci.
