Das Hauptziel dieser Studie ist es, eine detaillierte Methodik der Trockenwurzelfäule-Krankheit Assays zu demonstrieren, wie Blotting Papiertechnik und KrankentopfTechnik. Diese Techniken werden hilfreich sein, um die Wechselwirkung zwischen Kichererbsenpflanze und Rhizoctonia bataticola zu studieren. Das Verständnis der Wechselwirkung von Kichererbsen mit dem Pilzerreger Rhizoctonia bataticola ist landwirtschaftlich wichtig.
Dazu werden vielseitige und hochreproduzierbare Assays benötigt. Hier werden zwei Assays gezeigt, die in unserem Labor weit verbreitet sind. Der eine von ihnen ist das Blotting auf Papierbasis, und der andere ist ein kranker Topf-basierter Assay.
Um den Blotting-Papier-Test auszuführen, bereiten Sie Den Rhizoctonia bataticola Pilz inoculum vor, indem Sie von der schrägen Kultur zur Petriplatte und dann zur flüssigen Kultur aufsteigen. Bereiten Sie Kichererbsen-Kindergarten durch, Saat Samen in einem großen Topf. Entwurzeln Sie sie und legen Sie sie in das flüssige Inokulum und legen Sie sie auf Fleckpapier.
Achten Sie auf Krankheitssymptome, nämlich Nekrose an der Wurzel, Wurzelfäule, und Blattvergilbung acht Tage nach der Impfung. Hier ist eine Nussschale, die Schritte in der Blotting-Papier-Technik. Um den kranken Topf Assay auszuführen, impfen Kichererbsenmehl mit Pilz.
Nach der Inkubation bei 30 Grad Celsius für 15 Tage wird eine Krankheitskultur erlangt. Dann pulverieren und mit Topfmischung mischen. Säen Sie Samen auf Kontrolltopf und Krankentopf.
Beachten Sie an den folgenden Tagen 10 Tage nach der Aussaat die Symptome, nämlich Nekrose an der Wurzel, Wurzelfäule und Blattvergilbung auf den infizierten Pflanzen. Der Kranke Topf kann verkleinert und für großflächige Screenings verwendet werden. Hier ist eine Nussschale der Schritte in der Krankentopftechnik.
Rhizoctonia bataticola ist ein sich entwickelnder Erreger. Dieser Pilz produziert Hyphen und Mikrosklerotie, die während der Pflanzeninfektion als primäres Inuclum fungieren. Die reine Kultur, die durch die isolative Methode angewendet wird, wird für die Assays verwendet.
Der Schlüsselpunkt für diese erfolgreichen Assays ist die optimale Inokulumbelastung. Hier beginnt die Demonstration der Blotting-Papiertechnik. Um flüssige Rhizoctonia bataticola inoculum zuzubereiten, impfen Sie die 500 ml Brühe mit dem Pilzagar-Stecker aus drei Tagen alten frischen Tellerkultur und bebrüten den Kolben in einem Brutkasten bei 28 Grad Celsius für fünf Tage.
Filtern Sie die dunkelgraue Pilzmycelia mit Mikrosklerotie heraus. Setzen Sie in autoklaviertem Wasser und entfernen Sie die Medien. Wieder filtern Sie die Mycelia heraus und entfernen Sie Feuchtigkeit, indem Sie die Myzelelie für ein paar Minuten trocknen.
100 Gramm Pilzinokulum in 200 ml autoklaviertem Wasser in einer Marmeladenflasche aussetzen und richtig mischen. Entwickeln Sie Kichererbsen-Kinderzimmer durch Aussaat von Oberflächen sterilisierten Samen in Solerant. Entwurzeln Sie die Pflanzen acht Tage nach der Aussaat, waschen Sie sie und spülen Sie sie mit autoklavierten RO. Nehmen Sie ein Blotting-Papier und falten Sie es einmal und legen Sie die Hälfte davon auf das Tablett.
Machen Sie es nass mit autoklaviertem Wasser. Nehmen Sie Pflanzen und tauchen Sie in das Inokulum für 30 Sekunden mit intermittierenden Auf- und Abbewegung. Legen Sie die Pflanzen so, dass Wurzeln im Blatt bedeckt sind und Dielien draußen bleiben.
Falten Sie die andere Hälfte und biegen Sie das Papier. Zur Kontrolle tauchen Sie die Pflanzen in autoklaven Wasser, halten Sie die Schalen acht Tage lang in einer Wachstumskammer. Ergebnisse. Beachten Sie die Symptome wie Blattvergilbung, Wurzelfäule, Nekrose in der Wurzel und Verringerung der seitlichen Wurzelzahl.
Hier beginnt die Demonstration der Krankentopftechnik. Nehmen Sie ein Kilogramm kommerzielle Kichererbsensamen. Die Samen mit Leitungswasser waschen und mit dem RO-Wasser wieder waschen.
Die Samen fünf Stunden einweichen. Erneut die Samen mit RO-Wasser waschen 300 Gramm in einer Marmeladenflasche hinzufügen. Autoklavieren Sie sie bei 121 LVS für 15 Minuten zweimal kontinuierlich.
Nach dem Abkühlen die Flasche durch den laminaren Fluss übertragen. Impfen Sie die Flaschen mit drei Pilzagar-Steckern etwa vier Millimeter quadratische Größen und schütteln Sie es gut, um richtig zu mischen. Die Flaschen einwickeln und 15 Tage lang in einem Brutkasten bei 30 Grad Celsius bebrüten.
Beobachten Sie für die Flaschen mit dunklem mycelialwachstum um die Kichererbsensamen und entfernen Sie die Samen. Trocknen Sie sie bei Raumtemperatur und pulverisieren Sie sie. Rhizoctonia bataticola Pulver mit Solorit mischen und fünf Tage bei Raumtemperatur aufbewahren.
Oberfläche sterilisieren die GT62 Samen und säen sie in zwei Zentimeter Tiefe. Ergebnisse. Beobachten Sie die 90%-Sterblichkeit im Krankentopf. 10 Tage nach der Aussaat, beobachten Sie die Symptome wie Nekrose in den Wurzeln und Verringerung der seitlichen Wurzelzahl und Blattvergilbung in den folgenden Tagen.
Krankentopf kann auch im Feldboden zubereitet werden. Dürre und Rhizoctonia bataticola Infektion. Stellen Sie Dürrestress im Krankentopf auf, indem Sie das Wasser zurückhalten.
Hier sind die Pflanzen zu sehen, die der Kontrolle, Trockenheit, Krankheitserreger und gleichzeitiger Dürre und Krankheitserregerstress ausgesetzt sind. Beachten Sie die Symptome, nämlich mehr Nekrose, Wurzelfäule und Reduktion der lateralen Wurzelzahl und Wurzellänge in kombinierter Stressbehandlung im Vergleich zur rein pathogenen Behandlung. Schlussfolgerungen. Blotting Papiertechnik kann In Vitro Bedingungen durchgeführt werden.
Kranke Topftechnik kann unter In-Vivo-Bedingungen ausgeführt werden. Im kranken Hafen kann abiotischer Stress, nämlich Dürrestress, zusammen mit der Krankheitserreger-Infektion auferlegt werden. Mit diesen Techniken kann man das Infektionsmuster des Erregers untersuchen.
Die meisten physiologischen Veränderungen treten während der Kichererbsen-Rhizoctonia Bataticola Interaktion auf, und auch die Kichererbsen-Genotypen auf Resistenz zu überprüfen. Der Blotting-Papier-Assay ist sehr nützlich, um Qualitätsproben für Mikroskopie- und molekularbiologische Studien zu generieren. Der Kranke Topf-Assay, der die natürlichen Infektionsbedingungen imitiert, ist für das Screening von Kichererbsen-Keimplasma anwendbar.
