L’objectif principal de cette étude est de démontrer une méthodologie détaillée des analyses sèches de la maladie de pourriture des racines, telles que la technique du papier buvard et la technique du pot malade. Ces techniques seront utiles pour étudier l’interaction entre la plante de pois chiches et rhizoctonia bataticola. Comprendre l’interaction des plantes d’herbe à chiches avec l’agent pathogène fongique Rhizoctonia bataticola est d’importance agricole.
Pour cela, des analyses polyvalentes et hautement reproductibles sont nécessaires. Ici, deux essais qui sont largement utilisés dans notre laboratoire sont démontrés. L’un d’eux est gonflé à base de papier, et l’autre est malade pot à base d’analyse.
Pour exécuter l’analyse de papier buvard, préparer Rhizoctonia bataticola champignon inoculum en s’haussant de la culture oblique à la plaque Petri, puis à la culture liquide. Préparer la pépinière de pois chiches par, semer des graines dans une grande casserole. Déraciner et les mettre dans l’inoculum liquide et les placer sur du papier buvard.
Observez les symptômes de la maladie, à savoir la nécrose sur la racine, la pourriture des racines et le jaunissement des feuilles huit jours après l’inoculation. Montré ici est un mot, les étapes dans la technique de papier buvard. Pour exécuter l’analyse de pot malade, inoculer le repas de pois chiches avec le champignon.
Après incubation à 30 degrés Celsius pendant 15 jours, la culture malade est obtenue. Ensuite, poudrez-les et mélangez avec le mélange de pot. Semer des graines sur le pot de contrôle et le pot malade.
Les jours suivants, observez les symptômes, à savoir la nécrose sur la racine, la pourriture des racines et le jaunissement des feuilles sur les plantes infectées, 10 jours après le semis. Le pot malade peut être mis à l’échelle et peut être utilisé pour des dépistages à grande échelle. Montré ici est un mot d’étapes dans la technique pot malade.
Rhizoctonia bataticola est un pathogène en développement. Ce champignon produit de l’hyphae et de la microscléotie, qui agissent comme inuclum primaire pendant l’infection végétale. La culture pure qui s’applique par la méthode isolative est utilisée pour les analyses.
Le point clé pour ces analyses réussies est la charge optimale d’inoculum. La démonstration de la technique du papier buvard commence ici. Pour préparer l’inoculum liquide rhizoctonia bataticola, inoculer le bouillon de 500 ml avec le bouchon d’agar fongique de trois jours de culture de plaques fraîches et incuber le flacon dans un incubateur à 28 degrés Celsius pendant cinq jours.
Filtrer les mycélies fongiques gris foncé avec la microscléotie. Suspendre dans l’eau autoclavée et retirer les supports. Encore une fois, filtrer le mycélie et enlever l’humidité en séchant les mycélia pendant quelques minutes.
Suspendre 100 grammes d’inoculum fongique dans 200 ml d’eau autoclavée dans une bouteille de confiture et mélanger correctement. Développer la pépinière de pois chiches en semant des graines stérilisées de surface en solerant. Déraciner les plantes huit jours après le semis, les laver et les rincer à l’aide d’un RO autoclavé. Prenez un papier buvard et pliez-le une fois et placez-en la moitié sur le plateau.
Faites-le mouiller avec de l’eau autoclavée. Prenez les plantes et plongez dans l’inoculum pendant 30 secondes avec des mouvements intermittents de haut en bas. Placez les plantes de manière à ce que les racines soient couvertes à l’intérieur de la feuille et que les fœlias restent à l’extérieur.
Pliez l’autre moitié et pliez le papier. Pour le contrôle, tremper les plantes dans de l’eau autoclavée, garder les plateaux dans une chambre de croissance pendant huit jours. Résultats. Observez les symptômes tels que le jaunissement des feuilles, la pourriture des racines, la nécrose de la racine et la réduction du nombre latéral de racines.
La démonstration de la technique du pot malade commence ici. Prenez un kilogramme de graines commerciales de pois chiches. Laver les graines avec de l’eau du robinet et laver à nouveau avec l’eau RO.
Faire tremper les graines pendant cinq heures. Encore une fois, laver les graines avec de l’eau RO ajouter 300 grammes dans une bouteille de confiture. Autoclavez-les à 121 LVS pendant 15 minutes deux fois en continu.
Après refroidissement, transférer la bouteille à travers le flux laminaire. Inoculer les bouteilles avec trois bouchons d’agar fongique d’environ quatre millimètres carrés et bien les secouer pour bien mélanger. Enveloppez les bouteilles et incubez-les dans un incubateur à 30 degrés Celsius pendant 15 jours.
Observez pour les bouteilles avec la croissance mycéliale foncée autour des graines de pois chiches et enlevez les graines. Séchez-les à température ambiante et poudrez-les. Mélanger la poudre de rhizoctonia bataticola avec le solorite et les garder à température ambiante pendant cinq jours.
La surface stérilise les graines GT62 et les sème à deux centimètres de profondeur. Résultats. Observez la mortalité de 90% dans le pot malade. 10 jours après le semis, observez les symptômes tels que la nécrose des racines et la réduction du nombre de racines latérales et du jaunâtrement des feuilles dans les jours suivants.
Pot malade peut être préparé dans le sol du champ ainsi. Sécheresse et infection à rhizoctonia bataticola. Imposer le stress de sécheresse dans le pot malade en retenant l’eau.
On y voit les plantes soumises à la lutte, à la sécheresse, à l’agent pathogène et à la sécheresse et au stress pathogène simultanés. Observez pour les symptômes, à savoir, plus de nécrose, pourriture des racines, et la réduction du nombre de racines latérales, et la longueur des racines dans le traitement combiné de stress par rapport au traitement pathogène seulement. Conclusions. La technique du papier blotting peut être effectuée dans des conditions in vitro.
La technique du pot malade peut être exécutée dans des conditions In Vivo. Dans les ports malades, le stress abiotique, c’est-à-dire le stress dû à la sécheresse, peut être imposé avec l’infection pathogène. En utilisant ces techniques, on peut étudier le modèle d’infection pathogène.
La plupart des changements physiologiques se produisent au cours de l’interaction pois chiches-Rhizoctonia bataticola, et aussi l’écran des génotypes de pois chiches pour la résistance. L’analyse de papier buvard est très utile pour générer des échantillons de qualité pour la microscopie et les études de biologie moléculaire. L’essai de pot malade, qui imite les conditions normales d’infection, est applicable pour le criblage du germplasme de pois chiches.
