이 연구의 주요 목표는 종이 기술과 아픈 냄비 기술을 블로팅하는 것과 같은 건조 루트 부패 질환 소의 상세한 방법론을 입증하는 것입니다. 이러한 기술은 병아리콩 식물과 리조토니아 바타티콜라 사이의 상호 작용을 연구하는 데 도움이 될 것입니다. 곰팡이 병원균 Rhizoctonia 바타티콜라와 병아리 식물 상호 작용을 이해하는 것은 농업적으로 중요합니다.
이를 위해서는 다재다능하고 재현 가능한 에세이가 필요합니다. 여기에서, 우리의 실험실에서 널리 사용되는 두 개의 assays가 입증됩니다. 그 중 하나는 종이 를 기반으로 얼룩지고, 다른 하나는 아픈 냄비 기반 분석이다.
블로팅 페이퍼 분석법을 실행하려면 경사 배트리 컬쳐에서 페트리 플레이트로 확장한 다음 액체 문화로 확장하여 Rhizoctonia 바타티콜라 곰팡이 무접종을 준비하십시오. 병아리콩 보육원을 준비하여 큰 냄비에 씨앗을 파종하십시오. 그들을 뿌리 뽑고 액체 접종에 넣고 얼룩진 종이에 놓습니다.
질병 증상, 즉 뿌리에 괴사, 뿌리 부패, 그리고 난간 황변 8 일 접종 후 8 일 관찰. 여기에 표시된 간단히 말해서, 종이 기술을 블로팅하는 단계입니다. 아픈 냄비 분석법을 실행하려면 곰팡이와 병아리 콩 식사를 접종하십시오.
15일 동안 섭씨 30도에서 잠복한 후, 아픈 문화를 얻습니다. 그런 다음, 그들을 분말냄비 믹스와 혼합. 제어 냄비와 아픈 냄비에 씨앗을 뿌리.
다음 날에는 파종 후 10일 후에, 뿌리, 뿌리 부패, 잎 황색등의 증상을 관찰한다. 아픈 냄비는 확장 될 수 있으며 대규모 검사에 사용할 수 있습니다. 여기에 아픈 냄비 기술의 단계의 간단히 한마디입니다.
리조토니아 바타티콜라는 발달병원균입니다. 이 곰팡이는 식물 감염 중 1 차적인 inuclum 역할을하는 최면및 미세 경화증을 일으킵니다. isolative 방법을 통해 적용 하는 순수한 문화는 에세이에 사용 됩니다.
이러한 성공적인 에세이의 핵심은 최적의 난교 부하입니다. 블로팅 용지 기술의 데모는 여기에서 시작됩니다. 액체 Rhizoctonia 바타티콜라 접종을 준비하기 위해, 3 일 된 신선한 접시 문화에서 곰팡이 한천 플러그와 500ml 국물을 접종하고 5 일 동안 28 섭씨에서 인큐베이터에 플라스크를 배양.
미세한 회색 곰팡이 균증을 미세한 것으로 필터링합니다. 자동 으로 중단된 물에 일시 중단하고 미디어를 제거합니다. 다시, 미셀리아를 걸기하고 몇 분 동안 미셀리아를 건조 하여 수분을 제거합니다.
잼 병에 자동 용수 200ml에 곰팡이 무분비 100 그램을 중단하고 제대로 섞습니다. 솔란트로 표면 살균 씨앗을 파종하여 병아리콩 보육을 개발합니다. 파종 후 8일 후에 식물을 뿌리 뽑고 씻어 내고 오토클레이브 RO로 헹구습니다. 얼룩이 있는 종이를 가지고 한 번 접고 그 절반을 트레이에 놓습니다.
오토클레이브 물로 젖어 두십시오. 간헐적으로 위아래로 움직이면서 식물을 데리고 접종에 30초 간담하십시오. 뿌리가 시트 내부에 덮여 있고 Folia가 밖으로 유지되는 방식으로 식물을 놓습니다.
나머지 절반을 접어서 용지를 구부립니다. 제어를 위해, 자동화 된 물에 식물을 찍어 8 일 동안 성장 챔버에 트레이를 유지합니다. 결과. 잎 황색, 뿌리 부패, 뿌리 괴사, 측면 루트 수의 감소와 같은 증상을 관찰한다.
아픈 냄비 기술의 데모는 여기에서 시작됩니다. 상업용 병아리콩 씨앗 1킬로그램을 섭취하십시오. 씨앗을 수돗물로 씻고 RO 물로 다시 씻으십시오.
씨앗을 5시간 동안 담그세요. 다시 말하지만, RO 물로 씨앗을 씻어 잼 병에 300 그램을 추가하십시오. 121 LVS에서 15분 동안 두 번 연속으로 오토클레이브를 사용해 보도록 합니다.
냉각 후, 라미나르 흐름을 통해 병을 전송합니다. 3개의 곰팡이 향이 나는 천으로 병을 접종하고 약 4mm 평방 사이즈를 연결하고 잘 흔들어 제대로 섞습니다. 병을 감싸고 인큐베이터에서 15일 동안 섭씨 30도에서 인큐베이터에 인큐베이션을 넣습니다.
병아리콩 씨앗 주위에 어두운 균사 성장병을 관찰하고 씨앗을 제거합니다. 실온에서 건조하고 분말. 리조토니아 바타티콜라 파우더를 솔로라이트와 섞어 5일 동안 실온에서 보관하십시오.
표면은 GT62 씨앗을 살균하고 2 센티미터 깊이로 뿌리세요. 결과. 아픈 냄비에 있는 90%의 사망률을 관찰하십시오. 파종 후 10일, 뿌리의 괴사 등의 증상을 관찰하고, 다음 날에는 횡근수와 잎황의 감소를 관찰한다.
아픈 냄비는 뿐만 아니라 필드 토양에서 제조 될 수있다. 가뭄과 리조토니아 바타티콜라 감염. 물을 원천징수하여 아픈 냄비에 가뭄 스트레스를 부과합니다.
여기에 제어, 가뭄, 병원균, 그리고 동시 가뭄과 병원균 스트레스를 받는 식물이 여기에 표시됩니다. 증상, 즉, 더 많은 괴사, 루트 부패, 및 측면 루트 수의 감소, 및 병원체 전용 치료에 비해 결합 된 스트레스 치료의 루트 길이를 관찰한다. 결론. 블로팅 용지 기술은 시험관 내 조건에서 수행 될 수있다.
아픈 냄비 기술은 생체 내 조건에서 실행될 수 있습니다. 아픈 포트에서, abiotic 긴장, 즉, 가뭄 스트레스는 병원체 감염과 함께 부과 될 수 있습니다. 이러한 기술을 사용하여 병원균 감염 패턴을 연구할 수 있습니다.
생리학적 변화의 대부분은 병아리콩-Rhizoctonia 바타티콜라 상호 작용 중에 발생하며, 또한 저항을 위한 병아리콩 유전자형을 검사합니다. 얼룩종이 분석법은 현미경 검사법과 분자 생물학 연구를 위한 질 견본을 생성하는 데 아주 유용합니다. 자연적인 감염 조건을 모방하는 아픈 냄비 분석은 병아리콩 세균을 선별하는 데 적용됩니다.
