Основная цель этого исследования заключается в том, чтобы продемонстрировать подробную методологию анализа заболеваний сухой корневой гнили, таких как blotting бумаги техники и больной горшок техники. Эти методы будут полезны для изучения взаимодействия между растением нута и Rhizoctonia bataticola. Понимание взаимодействия растения цыпленка с грибкового патогена Rhizoctonia bataticola является сельскохозяйственным важным.
Для этого необходимы универсальные и воспроизводимые анализы. Здесь демонстрируются два анализа, которые широко используются в нашей лаборатории. Один из них является blotting на бумажной основе, а другой больной горшок основе анализа.
Чтобы выполнить анализ бумаги blotting, подготовить Rhizoctonia bataticola грибок inoculum путем масштабирования от наклонной культуры До плиты Петри, а затем к жидкой культуре. Подготовка питомника нута путем, посев семян в большой горшок. Выкорчевать их и положить их в жидкий инокулум и поместить их на бумаге.
Наблюдайте за симптомами болезни, а именно, некрозом на корне, корневой гнилью и пожелтение листьев через восемь дней после прививки. Здесь показаны в двух словах, шаги в blotting бумаги техники. Для выполнения болезни горшок анализ, привить нута еды с грибком.
После инкубации при 30 градусах по Цельсию в течение 15 дней получается больная культура. Затем, порошок их и смешать с горшок смеси. Посеять семена на контроль горшок и больной горшок.
В последующие дни наблюдайте за симптомами, а именно некрозом на корне, корневой гнилью и пожелтения листьев на зараженных растениях, через 10 дней после посева. Больной горшок может быть расширен и может быть использован для крупномасштабных скринингов. Показано здесь в двух словах шагов в больной техники горшок.
Rhizoctonia bataticola является развивающимся патогеном. Этот грибок производит гифы и микросклероции, которые действуют в качестве первичного инклума во время инфекции растений. Чистая культура, применяемая с помощью изолированного метода, используется для анализа.
Ключевым моментом для этих успешных анализов является оптимальная инокулумная нагрузка. Демонстрация метода blotting бумаги начинается здесь. Для приготовления жидкой Rhizoctonia bataticola inoculum, привить 500 мл бульона с грибковой агарной вилкой из трехдневной свежей культуры пластины и инкубировать колбу в инкубаторе при 28 градусах по Цельсию в течение пяти дней.
Отфильтруй темно-серую грибковую мицелию с микросклеротью. Приостановить в автоматической воде и удалить средства массовой информации. Опять же, отфильтровать мизелии и удалить влагу помарке сушки mycelia в течение нескольких минут.
Приостановить 100 граммов грибкового инокулума в 200 мл автоматической воды в бутылке варенья и смешать его должным образом. Разработка питомника нута путем посева поверхности стерилизованных семян в подошве. Выкорчевывание растений через восемь дней после посева, мыть их и промыть их автоклавом RO. Возьмите бумагу и сложите ее один раз и поместите половину его на поднос.
Сделайте его влажным с автоклавной водой. Возьмите растения и окунуться в inoculum в течение 30 секунд с прерывистым вверх и вниз движения. Поместите растения таким образом, что корни покрыты внутри листа и фолии остается вне.
Сложите другую половину и согните бумагу. Для контроля окуните растения в автоклавную воду, держите лотки в камере роста в течение восьми дней. Результаты. Наблюдайте за такими симптомами, как пожелтения листьев, корневая гниль, некроз в корне и уменьшение бокового числа корней.
Демонстрация больной техники горшок начинается здесь. Возьмите один килограмм коммерческих семян нута. Вымойте семена водопроводной водой и снова мыть водой RO.
Замочите семена в течение пяти часов. Опять же, мыть семена с RO воды добавить 300 грамм в бутылке варенья. Автоклав их на 121 LVS в течение 15 минут два раза непрерывно.
После охлаждения перенесите бутылку через ламинарный поток. Привить бутылки с тремя грибковыми агар пробки примерно четыре миллиметра квадратных размеров и встряхнуть его хорошо, чтобы смешать правильно. Оберните бутылки и инкубировать их в инкубатор при 30 градусах по Цельсию в течение 15 дней.
Наблюдайте за бутылками с темным мицелиальным ростом вокруг семян нута и удалите семена. Высушите их при комнатной температуре и пудры их. Смешайте rhizoctonia бататикола порошок с солоритом и держать их при комнатной температуре в течение пяти дней.
Поверхность стерилизовать семена GT62 и посеять их на глубине двух сантиметров. Результаты. Наблюдайте за 90%-ной смертностью в больном горшке. Через 10 дней после посева наблюдайте за такими симптомами, как некроз корней и уменьшение количества бокового корня и пожелтения листьев в последующие дни.
Больной горшок может быть подготовлен в поле почвы, а также. Засуха и Rhizoctonia bataticola инфекции. Наложить засуху стресс в больной горшок, утаив воду.
Здесь показаны растения, подвергаемые контролю, засухе, патогену, а также одновременной засухе и патогенной стрессу. Наблюдайте за симптомами, а именно, больше некроза, корневой гнили, и уменьшение бокового числа корней, и длина корня в комбинированном лечении стресса по сравнению с патогеном только лечение. Выводы. Техника blotting бумаги может быть выполнена в условиях vitro.
Техника больного горшка может быть выполнена в условиях In Vivo. В больном порту, абиотический стресс, а именно, засуха стресс, могут быть введены вместе с патогенной инфекции. Используя эти методы, можно изучить модель патогенной инфекции.
Большинство физиологических изменений происходят во время взаимодействия нута-Ризоктония бататикола, а также экран генотипов нута для сопротивления. Анализ бумаги очень полезен для создания качественных образцов для микроскопии и молекулярной биологии исследований. Больной горшок анализ, который имитирует природные условия инфекции, применимо для скрининга нута зародышевой плазмы.
