El objetivo principal de este estudio es demostrar una metodología detallada de los ensayos de la enfermedad de la podredumbre de la raíz seca, como la técnica del papel hinchado y la técnica de la olla enferma. Estas técnicas serán útiles para estudiar la interacción entre la planta de garbanzos y Rhizoctonia bataticola. Comprender la interacción de la planta de garbanzos con el patógeno fúngico Rhizoctonia bataticola es de importancia agrícola.
Para ello, se necesitan ensayos versátiles y altamente reproducibles. Aquí, se demuestran dos ensayos que son ampliamente utilizados en nuestro laboratorio. Uno de ellos está hinchado en papel, y el otro es un ensayo basado en la olla enferma.
Para ejecutar el ensayo de papel hinchado, prepare Rhizoctonia bataticola honggus inoculum ampliando desde el cultivo inclinado a la placa Petri y luego al cultivo líquido. Preparar el vivero de garbanzos, sembrando semillas en una olla grande. Desarraigalos y colóquelos en el inóculo líquido y colóquelos en papel hinchado.
Observe los síntomas de la enfermedad, a saber, necrosis en la raíz, pudrición de la raíz y coloración amarillenta de las hojas ocho días después de la inoculación. Aquí se muestra una pocas palabras, los pasos en la técnica de papel hinchado. Para ejecutar el ensayo de la olla enferma, inocular la comida de garbanzo con hongos.
Después de la incubación a 30 grados centígrados durante 15 días, se obtiene cultivo enfermo. Luego, mételos en polvo y mezcle con la mezcla de olla. Sembrar semillas en la olla de control y en la olla enferma.
En los días siguientes, observe los síntomas, a saber, necrosis en la raíz, pudrición de la raíz y coloración amarillenta de las hojas en las plantas infectadas, 10 días después de la siembra. La olla enferma se puede ampliar y se puede utilizar para exámenes a gran escala. Aquí se muestra una pocas palabras de pasos en la técnica de la olla enferma.
La rizoctonia bataticola es un patógeno en desarrollo. Este hongo produce hifas y microsclerotia, que actúan como inuclo primario durante la infección de la planta. La cultura pura que se aplica a través del método aislado se utiliza para los ensayos.
El punto clave para estos ensayos exitosos es la carga óptima de inóculo. La demostración de la técnica del papel hinchado comienza aquí. Para preparar el líquido Rhizoctonia bataticola inoculum, Inocular el caldo de 500 ml con el tapón de agar fúngico de tres días de edad de cultivo de placas frescas e incubar el matraz en una incubadora a 28 grados centígrados durante cinco días.
Filtra el micelio fúngico gris oscuro con microsclerotia. Suspenda en agua autoclavada y retire el soporte. Una vez más, filtrar el micelio y eliminar la humedad por la mancha secar el micelio durante unos minutos.
Suspenda 100 gramos de inóculo fúngico en 200 ml de agua autoclavada en una botella de mermelada y mezcle correctamente. Desarrollar vivero de garbanzos mediante la siembra de semillas esterilizadas superficiales en solerant. Desarraigue las plantas ocho días después de la siembra, lávelas y enjuáguelas con RO autoclave. Tome un papel hinchado y dóblelo una vez y colóquelo la mitad en la bandeja.
Hazlo mojado con agua autoclavada. Tome las plantas y sumérjase en el inóculo durante 30 segundos con un movimiento intermitente hacia arriba y hacia abajo. Colocar las plantas de tal manera que las raíces estén cubiertas dentro de la hoja y folia se mantenga fuera.
Dobla la otra mitad y dobla el papel. Para el control, sumergir las plantas en agua autoclavada, mantener las bandejas en una cámara de crecimiento durante ocho días. Resultados. Observe los síntomas tales como coloración amarillenta de la hoja, pudrición de la raíz, necrosis en la raíz, y la reducción en el número de raíz lateral.
La demostración de la técnica de la olla enferma comienza aquí. Tome un kilogramo de semillas comerciales de garbanzos. Lave las semillas con agua del grifo y lave de nuevo con el agua RO.
Remoje las semillas durante cinco horas. Una vez más, lavar las semillas con agua RO añadir 300 gramos en una botella de mermelada. Autoclave a 121 LVS durante 15 minutos dos veces continuamente.
Después de enfriar, transfiera la botella a través del flujo laminar. Inocular las botellas con tres tapones de agar fúngico de aproximadamente cuatro milímetros de tamaño cuadrado y agitar bien para mezclar correctamente. Envuelva las botellas e incubarlas en una incubadora a 30 grados centígrados durante 15 días.
Observe las botellas con crecimiento micelial oscuro alrededor de las semillas de garbanzo y retire las semillas. Secarlos a temperatura ambiente y en polvo. Mezclar Rhizoctonia bataticola en polvo con solorita y mantenerlos a temperatura ambiente durante cinco días.
La superficie esteriliza las semillas GT62 y las siembra a dos centímetros de profundidad. Resultados. Observar la mortalidad del 90% en la olla enferma. 10 días después de la siembra, observe los síntomas como necrosis en las raíces y reducción del número de raíz lateral y amarillento de las hojas en los días siguientes.
La olla enferma también se puede preparar en tierra de campo. Infección por sequía y rizoctonia bataticola. Imponer estrés por sequía en la olla enferma mediante la retención del agua.
Aquí se muestran las plantas sometidas a control, sequía, patógenos y sequía simultánea y estrés patógeno. Observe los síntomas, a saber, más necrosis, pudrición de la raíz, y la reducción en el número de raíz lateral, y la longitud de la raíz en el tratamiento de estrés combinado en comparación con el tratamiento solo patógeno. Conclusiones. La técnica del papel de goteo se puede llevar a cabo en condiciones In Vitro.
La técnica de la maceta enferma se puede ejecutar en condiciones in Vivo. En el puerto enfermo, el estrés abiótico, a saber, el estrés por sequía, se puede imponer junto con la infección por patógenos. Usando estas técnicas, uno puede estudiar el patrón de infección de patógenos.
La mayoría de los cambios fisiológicos ocurren durante la interacción entre garbanzo y rizoctonia bataticola, y también examinan los genotipos de garbanzos para detectar resistencia. El ensayo de papel hinchado es muy útil para generar muestras de calidad para estudios de microscopía y biología molecular. El ensayo de la olla enferma, que imita las condiciones naturales de infección, es aplicable para el cribado del germoplasma de garbanzos.
