שיטה זו מאפשרת הדמיה בזמן אמת של אירועים שונים, המתרחשים במח העצם של עכבר הגולגולת, כגון megakaryocytes, הרחבת פרופלטלטים בתוך כלי הסינוסואידים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא ניתוח קטין הדרוש למזעור התגובה הדלקתית, המאפשר הדמיה in vivo של אירועים בתנאי המפעל כמעט. כדי להתחיל, להעביר את העכבר לחדר ההדמיה.
הפעל את המיקרוסקופ והמחשב והגדר את הפרמטרים הנדרשים. לאחר העכבר יש לגמרי esthetized למקם את העכבר על צלחת מחוממת, מחומם ל 37 מעלות צלזיוס עבור כל המניפולציות הבאות, לגלח את הראש והגרון של העכבר ולהחיל את הג'ל על העיניים כדי למנוע יובש. מניחים את העכבר על גבו ומתקנים את הרגליים האחוריות עם סרט ניתוחי כדי למתוח את הגרון.
לאחר חיטוי הגרון, לעשות 0.7 עד 1 ס"מ חתכו על וריד הצוואר ימין או שמאל באמצעות מספריים ולמתוח את רקמת החיבור הסמוכה כדי לחשוף את וריד להטוטן החיצוני על גבי שריר החזה. ממלאים את הצנתר עם תמיסת מלח פיזיולוגית חמה וסטרילית. לחדור את הצנתר דרך שריר החזה ולאחר מכן להכניס את הקטטר לתוך הווריד.
הסר בעדינות את המחט, חבר את המזרק עם העוקבים הפלואורסצנטיים והזריק את הנפח המת של הצנתר. מניחים טיפה של דבק כירורגי כדי לייצב את הקטטר. החזר בזהירות את העכבר לעמדה נוטה.
לחטא את הקרקפת עם 70% אתנול עם מגבת נייר תוך הסרת השיער הרפוי. השתמש מספריים דקים סטריליים פינצטה כדי להפוך חתכים בצורת T בקו האמצע עד סנטימטר אחד בין האוזניים על הקרקפת כדי לחשוף את calvarium. לחשוף את הגולגולת עם פינצטה, ולאחר מכן להשתמש במספריים ופינצטה כדי להסיר בזהירות את periosteum.
השתמש ספוגית כותנה סטרילית ספוגה תמיסת מלח פיזיולוגית כדי להסיר את כל periosteum וכל פסולת או שיער אשר יכול לשנות את ההדמיה. לשטוף את הגולגולת עם מלוחים כדי להסיר כל עקבות דם ולייבש במהירות את העצם עם צמר גפן. החל את ג'ל הדבק על הטבעת, מניחים את הטבעת על העצם החשופה ושומרים עליה במשך כמה שניות כדי לאפשר לטבעת להיצמד בחוזקה לגולגולת.
להלח קלות את הגולגולת עם צמר גפן מלוח. הכן את הדבק הדנטלי סיליקון על ידי ערבוב זהיר של הרכיבים הכחולים והצהובים ביחס של אחד לאחד. לאטום את הטבעת על ידי החלת הדבק הדנטלי כדי למנוע דליפה במהלך הדמיה.
הסר בזהירות כל הדבק שיניים או דבק שאולי נכנס לטבעת. ואז למלא את הטבעת עם תמיסת מלח כדי לבדוק את הדליפה. מניחים את העכבר על התמיכה ומניחים דחיסה מקופלת מתחת לראש החיה כדי להרים את הראש ולמנוע ניתוק של הטבעת מהגולגולת כאשר הוא מחובר למחזיק.
לעזאזל עם הטבעת על מחזיק הבלוק. מקם את התמיכה ואת הרכבת העכבר בתא המיקרוסקופ המחומם. הגדר את אורכי הגל לייזר המתאימים לארבע הרביעיות שנבחרו והתאוששות של האורות הנפלטים.
באמצעות קטטר להטוטנים בין להטוטנים להזריק 50 microliters של 0.2 פתרון micromolar של נותב פלורסנט לתייג את כלי ההדבקה. מקם את שלב המיקרוסקופ עם התמיכה והעכבר תחת מטרת המיקרוסקופ. ודא כי הטבעת תמיד מלאה מלוחים ולמלא אותו במידת הצורך, ולטבול את המטרה מלוחה.
השתמש באפיפלואורסצנטיות כדי לאתר את כלי מח העצם ולהתבונן במגקריוציטים מיושרים לאורך כלי הסינוסואידים. לרכישות ארוכות, הגדירו רכישה תלת-ממדית של מרחב-זמן עם תמונה של 384 על 384 פיקסלים באמצעות סורק תהודה של שמונה קילו הרץ ומצב דו-כיווני. השתמש בממוצע שורה ברזולוציה טובה ולאחר מכן בחר את גודל שלב Z הממוטב והגדר את מרווח הזמן הדרוש לפני תחילת הרכישה.
עבור רכישות קצרות ומהירות, בחר מרחב, סוג רכישת זמן ומזער את גודל התמונה. במידת הצורך, התאם את התמונה לכלי השיט על-ידי סיבוב שדה ההדמיה. השתמש במהירות הסריקה הזמינה הגבוהה ביותר ובסרייקה דו-כיוונית.
מזער את הקו בממוצע כדי למצוא את הפשרה האופטימלית בין הגדרת תמונה ומהירות הרכישה. לרכוש תוכנית Z אחת בלבד ולמזער את מרווח הזמן לרכישה. למדידת מהירות טסיות הדם 10 עד 20 שניות של רכישה צריך להיות מספיק.
נותב הפלואורסצנטי נוהל תוך ורידי כדי לדמיין את כלי הסינוסואידים של מח העצם בגולגולת, עם כיוון הזרימה המתואר על ידי החץ. מהירות טסיות הדם הפלואורסצנטית נרשמה בכל ענף כלי שיט, ונצפתה שונות. כלי הסינוסואיד מציגים זרמים מורכבים עקב האנסטומיוזים, עם נוכחות של זרימת זרימה ואפילו קיפאון.
החצים הצביעו על כיוון הזרימה ההפוך בהיפוריקט. מהירות טסיות הדם נמדדה גם עבור ענפי כלי דם שמאליים וימנים הצביעו על אי סדירות לאורך זמן בכל ענף כלי שיט עם שלבי תאוצה, קיפאון והאטה. מורפולוגיות שונות של פרופלטלטים נצפו, כולל מפיץ עם שוליים לא סדירים, ואז en מרחיבים ארוכים ו proplatelets עבה וקצר.
כאשר megakaryocytes הרחיב את הנפצים באזורים של זרימות מורכבות, ההתפשטות הוזרמה מענף כלי אחד לשני, בהתאם לכיוון הזרימה. עם עצירת זרימת הדם, הנפיצים נרגעו והעכבר עבר דום לב באופן בלתי צפוי, הצביע על החשיבות של כוחות הידרודינמיים בהארכת ההרחבה. הרוחב והאורך של המפיץ נמדדו גם ברוחב ממוצע של 5.2 מיקרומטר ואורך מקסימלי ממוצע של כ 185 מיקרומטר נצפו.
התוויית אורך ההתפשטות כפונקציה של הזמן מאפשרת הדמיה של ההתנהגות של מפיץ במהלך שלבי התארכות, קיפאון, או אפילו נסיגה. מהירות התארכות ממוצעת של כ -10 מיקרומטר לדקה נצפתה. התקנת הצנתר, אפשרה הזרקת תרופות כדי לחקור את ההשפעות על היווצרות proplatelet או אירועים אחרים של עניין בזמן אמת.
