פרוטוקול חסכוני ויעיל לבידוד וגידול תאים דנדריטיים שמקורם במח העצם מעכברים

פרוטוקול חסכוני ויעיל של בידוד ויצירת תאים דנדריטיים שמקורם במח העצם מעכבר. נהלים המערבים נבדקים בעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לאתיקה של בעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית של נאנג'ינג.One.Introduction. עם העלייה במחקר חסינות הגידול, הביקוש לתאי DC עולה בהדרגה.

עם זאת, DCs הם נדירים בכל הרקמות. השיטה המסורתית של בעיקר גרימת ההבחנה של מח העצם לתוך DCs היא מסובכת ויקרה. שניים. בידוד מח העצם והכנת תאי BM אנו מקריבים עכברים ומתקבעים על שולחן הניתוחים של העכבר.

חתכו את עורם של השרירים החשופים השמאליים ואת עורק הירך. אין לחתוך את עורק הירך ישירות. אחרת, זה יגרום לדימום כבד ויזהם את שדה הראייה.

חותכים את כל השרירים סביב עצם הירך. למתוח לאט את הגפיים התחתונות של העכבר כלפי חוץ עד צניחת ראש הירך וניתן לראות אותו. להפריד את הגפיים התחתונות מהגוף.

חותכים את הרגל האחורית כדי להשיג עצם ירך חופשית ושלמה. הסר את השרירים באמצעות גזה. אין לקרוע את השרירים ישירות.

עצם הירך של העכברים שברירית. מניחים את עצם הירך ב-75% אלכוהול למשך שתיים עד חמש דקות. שלוש. תרבית הזרקה של BMDC לשטוף את שאריות האלכוהול עם PBS.

מהדקים את החלק האמצעי והתחתון של עצם הירך במלקחיים המוסטטיים, ומהדקים את הקצה התחתון של עצם הירך עם מלקחיים המוסטטיים נוספים. המלקחיים ההמוסטטיים מוחלים פשוטו כמשמעו על עצם הירך ועצם הירך נשברת מקו אפיפיזי. השתמש במזרק מ"ל אחד כדי לחדור את חלל מח העצם מקו האפיפיזיאלי.

השתמש בינוני שלם שני חלקים לשטוף את חלל מח העצם עד העצם הופך לבן. לאסוף נוזלי שטיפה. תוספת למדיום השלם המכיל GM CSF/IL-4 עד 24 מ"ל, וזרעים בצלחת של 6 בארות עם 4 מ"ל לבאר. ארבע.תוצאות.

לאחר יומיים, החלף את כל המדיום המכיל GM-CSF/IL-4. מחציתם החליפו את המדיום השלם המכיל GM-CSF/IL-4, ביום הרביעי והשישי והשמיני. מספר התאים הגיע לשיא ביום השביעי ואז ירד בהדרגה.

תאי DC יצרו מספר רב של סינפסות המציגות מורפולוגיה טיפוסית של תאי DC בוגרים. ניתוחי תת-מדד זרימה מראים כי היחס של CD11c הטיל מה 71% ביום השישי, יחס רחב עלה ל -96.1% ביום העשירי. הביטוי של CD11c, CD80 ו- MSC2, גדל בהדרגה עם הגדלת זמן הטיפוח. חמש.מסקנה.

בקיצור, יצרנו פרוטוקול חסכוני ויעיל לבידוד ולייצור של תאים דנדריטיים שמקורם במח עצם מעכברים, שלוקח לו רק 10 דקות להפריד בין תאי מח עצם. מספר גבוה של DCs בטוהר גבוה נקטף לאחר שישה עד שבעה ימים של תרבית עם 10ng לכל מ"ל, GM-CSF ו- IL-4.