אנו מציגים מסות בסיסיות, אך מבוקשות מאוד לגידול מסה, תצפיות ומחקרים מולקולריים תוך שימוש במסות טורטריקס מזיקות רציניות, כדי לחקור את הביולוגיה שלהם. עד כה, המבנה של ביצי החרקים מנע ניתוח נוסף. יש לציין כי אפשרנו לחקור ביצים דקות, רכות ושבריריות המכוסות בהפרשת אימהות.
ישנן טכניקות פשוטות הצפויות להיות ישימות למחקר נוסף על טורטריקס, ניסיון של חרקים אחרים וטקסונים אחרים. התחילו בהנחת נקבה ושני זכרים בכוס פלסטיק של 120 מיליליטר עם פיסת נייר פרפין כדי ליצור קו מאטרה. פורסים כ-60 גרם של דיאטות מלאכותיות באמצעות פומפיה לגידול המוני.
מניחים את מסת הביצית המלאה בעוברים בוגרים על התזונה המלאכותית הפרוסה במיכל פלסטיק. מניחים ניירות פרפין על מסת הביצה עם הדיאטות הפרושות. הניחו 15 זכרים ו-10 נקבות בקופסת פלסטיק להזדווגות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס.
אספו ביצים כל חמישה עד שבעה ימים וחזרו על שלבי גידול המוני לכל דור. השרו את מסת הביצה ב-1000 מיקרוליטרים של תמיסה מימית של 1.2% נתרן היפוכלוריט למשך 10 דקות או לתוך 1000 מיקרוליטרים של חמישה תמיסה מימית של אשלגן הידרוקסיד טוחן למשך 30 דקות כדי להפריד בין הביצים. שטפו את הביצים המופרדות ב-1000 מיקרוליטרים של PBSt.
השרו ביצים בתערובת של 500 מיקרוליטרים של 100% הפטאן ו-500 מיקרוליטרים של תמיסת 4% Paraformaldehyde PBSt. מערבבים במשך 10 דקות ב-1500 סיבובים לדקה באמצעות מערבל מערבולת. השרו את הביצים לתערובת של 500 מיקרוליטרים של 100% הפטאן ו-500 מיקרוליטרים של 100% מתנול.
יש לערבב במשך 10 דקות ב-1500 סיבובים לדקה. שטפו את הביצים פעמיים עם 1000 מיקרוליטרים של 100% מתנול ואחסנו אותן בארבע מעלות צלזיוס ב-100% מתנול. השרו את הביצים ברצף ב-99%70% ו-50% אתנול ו-PBSt במשך חמש דקות כל אחת לצורך הידרופיליזציה.
לשטוף את הביצים עם PBSt. לטבול את הביצים במיקרוגרם אחד לכל מיליליטר DAPI פתרון במשך חמש דקות, ולאחר מכן לשטוף את הביצים עם PBS פעמיים. משרים את הביצים ב-20 מיקרוליטרים של תמיסת 1.25% לקטית, אצטית או CN, כדי לדמיין את ההטרוכרומטין עד שהגרעין מפגין צבע אדום בוהק.
העבירו את הביצים הוויטראז'יות באמצעות פיפטה למגלשת זכוכית, ואז הקיפו אותן בריאגנט נגד דהייה וזכוכית כיסוי. לחלץ את Ferrate, Amonamagnetama ו- Adoxophyes honmai זחלים ממסות הביצים באמצעות מלקחיים. לנתח את הזחלים על מגלשת הזכוכית.
לתקן את הרקמות עם תערובת של אחד עד שלושה 99.7% חומצה סגפנית ב 100% מתנול במשך חמש דקות. הכתימו את אלה עם משקל של 1.25% לפי משקל תמיסה לקטית, סגפנית או CN עד שהגרעינים מוכתמים. קבע את המין של כל דגימה על ידי התבוננות בנוכחות הטרוכרומטין לנקבות או היעדרות לזכרים תחת מיקרוסקופ.
כדי לחלץ דנ"א ורנ"א מזחלי פראט שנקבעו על ידי המין, מאגר 12 המינים קבע זחלי פראט זכריים או נקביים, והוסיף את מאגר תזזית התא או ריאגנטים להפקת RNA לצינור אחד של 1.5 מיליליטר. שלבי הקיבוע, ה-Permeabilization וההכתמה מאפשרים הדמיה חזותית של גרעינים באמצעות תמיסת DAPI. צביעה לקטית, סגפנית או CN באמצעות זחלי Ferrate המנותחים גילתה כי הנקבות מציגות הטרוכרומטין כנקודה, אך לזכרים אין את ההטרוכרומטין.
הפרוטוקולים ששונו באמצעות עמודת ספין שיפרו את איכות הרנ"א המייצר 900 עד 1500 ננוגרם של מוצר עם יחס של 260 עד 200 של 1.9 עד 2.1, ויחס של 260 עד 280 של 1.9 עד 2.3. יחס ריכוז הרנ"א של הפרוטוקול שהשתנה היה מתחת ל-1.2, ועמד בדרישות האיכות לריצוף הדור הבא. שלמותו של הרנ"א שהופק ממין קבעה את זחלי Ferrate באמצעות הפרוטוקול המתוקן אושרה באמצעות אלקטרופורזה של שבב.
הספריות המוכנות אושרו כמניבות קריאות ציון גבוהות ברבעון ה-30. המסר שלנו תורם למחקרי חרקים בסיסיים ולכלי הדברה. יתר על כן, לפרוטוקולים שלנו יש פוטנציאל לשמש להערכת חומרי הדברה כימיים יעילים או מיקרובים בין-תאיים במהלך embryogenesis.
