שיטה זו תקל על מחקר על רבייה מינית בארבידופסיס בכך שתאפשר תצפית על אינטראקציות גמטופיטים ביעילות גבוהה ועם מספר דגימה גבוה לכל מפגש הדמיה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא על ידי שמירה על הביציות על המחיצה, כמות ופתיחות של הביציות גדל מאוד על פני שיטות קודמות. טכניקת הדיסקציה יכולה להיות קשה בתחילה ודורשת יד יציבה.
לכן, מומלץ להתאמן כמה פעמים על פיסטולות מסולקות לפני תחילת הניסוי. התחל בהכנת אמצעי נביטת האבקה כפי שמוסבר בטקסט. לאחר שהאגר נמס לחלוטין, פיפטה 130 מיקרוליטר של המדיום לתוך באר 14 מ"מ של צלחת תחתית זכוכית 35 מ"מ.
מסובבים את המנה עד שהמדיום מכסה את הבאר. שואפים 40 מיקרוליטר של מדיום ממרכז המנה באמצעות פיפטה, ומשאירים מאחור 90 מיקרוליטר של מדיום. כדי להבטיח קירור אחיד של המדיום, קררו את הכלי על גוש אלומיניום בתא לחות לפני אחסון הצלחות בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה.
בבוקר שלפני ההדמיה, בחרו צמחי ארבידופסיס בריאים שהחלו לאחרונה לייצר כתורמי מחיצה ותורמי סטיגמה. הסר את הפרחים הישנים יותר על התפרחת לפני הסרת שלושת השלבים 12B תורם פרחים תורם 12B ו 12 שלב 12B סטיגמה תורם פרחים על ידי הסרת אבקנים, גביעים, עלי כותרת ועלי הכותרת שלהם. בבוקר 24 שעות לאחר מכן, להאביק את תורמי הסטיגמה עם פרחי תורם האבקה כי הם משירים אבקה בקלות.
ההאבקה מושלמת כאשר הסטיגמות מכוסות כמעט לחלוטין באבקה. 30 דקות לאחר ההאבקה, הסר פיסטיל תורם מחיצה בריא ובוגר על הפדיקל והניחו אותו בסרט דביק דו-צדדי טרי המורכב על מגלשת זכוכית כאשר הצלקת מבצבצת ממש מקצה הקלטת. הצמידו את הפיסטיל היטב לסרט על ידי לחיצה עדינה על הדוקרן ולאורך השחלה באמצעות החלק האחורי של מחט מזרק אינסולין חדשה.
הסר את שאריות עלי הגביע, עלי הכותרת והאבקנים שנותרו מהכריתה. תחת סטריאוסקופ, השתמש במחט מזרק אינסולין כדי לבצע שני חתכים לכל קרפל בצומת השחלה הסגנון-שחלה ובצומת השחלה. לאחר מכן לבצע חתכים רדודים לאורך המחיצה של כל קרפל ולקלף בחזרה את קירות השחלה על קלטת, לחשוף את הביציות.
החליקו את המחט בעדינות בין שתי הספטות כדי לחתוך את הרפלום לכל אורך הפיסטיל מבלי להפריע לביציות. לאחר מכן חותכים את המחיצה העליונה ליד הסגנון כך שכל המחיצה מתרוממת. לאחר מכן, להסיר את המחיצה מן pedicle באמצעות מלקחיים.
מניחים את המחיצה שטוחה ככל האפשר על המדיום עם micropiles של הביציות פונה כלפי מעלה. לאחר מכן לחץ על המחיצה בעדינות עד הביציות מוטבעות מעט בתווך. הניחו את הפיסטיות של תורם הסטיגמה המואבק על סרט דביק טרי ודו-צדדי המורכב על מגלשת זכוכית כך שהצומת בסגנון השחלה נמצא מחוץ לקצה הקלטת.
חתכו את הסגנון ישר למטה באמצעות סכין גילוח והרימו אותו עם הסטיגמה המחוברת ללהב. הסר את הצלקת מהלהב עם מחט מזרק אינסולין ומניחים אותו שטוח כ 250 עד 300 מיקרומטר מן הביציות. מעבירים עד 12 סטיגמות, ומניחים שתיים מכל צד של כל מחיצה.
לאחר הדגירה בתא לחות במיקרוסקופ שנשמר בלחות יחסית של 92% ב-21 מעלות צלזיוס, המנה מוכנה להדמיה. הביאו את הדגימות למיקוד תחת שדה בהיר בעוצמת תאורה חלשה, ולאחר מכן עברו לאור פלואורסצנטי. לאחר מכן, סמן את אזורי הדגימה בסקירת הבמה שיש לצלם.
לאחר שתסיים, התחל הדמיה באמצעות סכימת רכישה רב-שלבית עם פונקציית מיקוד אוטומטי בתחילת כל אזור סקירה. כשבע עד תשע שעות לאחר הדגירה, בדקו שצינורות האבקה נמשכו אל הביציות וקלטו אותן. קליטה מוצלחת של צינור האבקה מראה פרץ נפץ של צינור האבקה במיקרופיל של הביציות.
בסיום, עצור את הרכישה. שמונה העתקים טכניים של שיטת הביציות הנכרתו למחצה במבחנה נערכו וקיבלו ניקוד עבור קליטה מוצלחת של צינור אבקה. ריבועים ירוקים מראים קליטה מוצלחת וריבועים אדומים מראים קליטה פגומה.
ניסויים אלה גילו כי כ -28% מהביציות מראות פיצוץ של צינור אבקה, וכתוצאה מכך יעילות שנעה בין כ -10 ל -50% באמצעות שיטת Semi in vitro cum septum, ניתן היה להבקיע הרבה יותר ביציות אייל ועד 40 מקרים של קליטה מוצלחת של צינור אבקה נרשמו במפגש הדמיה אחד כפי שניתן לראות בביציות עם ריבועים ירוקים. חמישה שכפולים טכניים של שיטה זו הראו כי כ -79% מהביציות המושכות צינורות אבקה מראות פיצוץ של צינור אבקה, וכתוצאה מכך יעילות הנעה בין 70 ל -100% עם קרע צינור האבקה, גרעין הסינרגיד הקולט נצפה מתפרק בו זמנית ברזולוציה של דקה אחת. לאחר הקאריוגמיה נראתה נדידה של גרעין תא הביצה לכיוון המיקרופייל.
הן הסינרגידים השמאלי והן הימני הצליחו לשמש כסינרגיד הקולט. גורמים קריטיים שיש לשים לב אליהם להצלחה בשיטה זו הם בימוי, שימוש במדיום טרי, הטבעה של הביציות בתווך, שמירה על לחות גבוהה והבטחת רעילות אור נמוכה. ניתן גם לשלב טכניקה זו עם הדמיית עירור של שני פוטונים לצורך התבוננות מקרוב בשינויים פיזיולוגיים וציטולוגיים המתרחשים במהלך אינטראקציות גמטופיטים.
אפשר גם לשדך זאת למיקרוסקופ אלקטרונים על ידי קיבוע הביציות.
