Author Spotlight: A Streamlined Approach to Study Cell Death Initiation in Hypersensitive Response

כדי להתחיל, להעביר את צמחי תפוחי אדמה נגועים וירוס לתא גידול נשמר על 22 מעלות צלזיוס. בחרו צמח להשגחה והשתמשו בסרט הדבקה כדי לשתק לחלוטין את העלה המחוסן השני. לאחר מכן, חבר את המיקרוסקופ הדיגיטלי למחשב והפעל את תוכנת לכידת התמונה.

מניחים את העלה מתחת למיקרוסקופ. לאחר מכן השתמש בחוגה כדי להתמקד בפני השטח של העלה. כדי לכוונן את הגדרות המצלמה, לחץ על לחצן ההגדרות.

כעת הגדר את הבהירות ל- 64, את הניגודיות ל- 14 ואת הגוון לאפס. לאחר מכן, התאם את האיזון הלבן, ולאחר מכן הגדר את הרוויה ל 47, חדות לאפס וגמא לחמש. לחץ על סמל לכידת התמונה ובחר אפשרות וידאו שחלף זמן.

לאחר מכן, הגדר לכידת תמונה לכל 15 דקות למשך 24 שעות בסך הכל. לחץ על לחצן התחל כדי להתחיל בלכידת התמונה. לשמירת התמונות שצולמו, בחרו בכל התמונות ולחצו על סמל השמירה.

כעת בחר את אפשרויות הייצוא, ולאחר מכן הגדר נקודות לאינץ 'למקסימום. לאחר השמירה, מחק את כל התמונות מהתוכנית. כדי לערוך את התמונות, הפעל תוכנת עריכה כמו ImageJ.

לחץ על קובץ, לאחר מכן בחר ייבוא, ובחר רצף תמונות כדי לייבא את רצפי הזמן של תמונות משדה ראייה יחיד. הדבק את הנתיב של ספריית התמונות השמורות ולחץ על אישור. לאחר השלמת ההמרה, ImageJ תפעיל באופן אוטומטי נגן וידאו פנימי המציג את הסרטון המוגמר.

לחץ על קובץ ולאחר מכן שמור בשם ובחר את פורמט AVI לייצוא קובץ הווידאו. כאשר נפתח חלון קטן, הגדר את קצב המסגרות ל- 0.3 FPS ולאחר מכן לחץ בסדר כדי לשמור את הווידאו כקובץ AVI. צמחי תפוחי אדמה מחוסנים בני שלושה עד ארבעה שבועות עם לפחות שלושה עד ארבעה עלים מפותחים לחלוטין שימשו לניתוח מיקרוסקופי דיגיטלי.

אותו אזור על העלה המחוסן נצפה במרווחים של 15 דקות כדי לקבוע את הופעת הנגע והתפשטותו לאורך זמן. לאחר 14 שעות של תצפית לא נראה נגע. כ-90 דקות לאחר מכן נרשם נגע גלוי.

הנגע החל להתרחב כעבור שעתיים, והמשיך להתפשט בשמונה וחצי השעות הבאות.