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In questo articolo

  • Riepilogo
  • Abstract
  • Introduzione
  • Protocollo
  • Risultati
  • Discussione
  • Divulgazioni
  • Riconoscimenti
  • Materiali
  • Riferimenti
  • Ristampe e Autorizzazioni

Riepilogo

Molti modelli di endometriosi di roditori sono limitati dalla complessità tecnica, dalla riproducibilità e / o dalla necessità di animali immunocompromessi o topi reporter speciali. Presentiamo un sistema semplificato di induzione della lesione utilizzando qualsiasi topo sperimentale con un sistema di punteggio oggettivo verificabile in modo indipendente e senza necessità di ovariectomia o chirurgia di sopravvivenza.

Abstract

L'endometriosi è una delle principali cause di dolore pelvico e infertilità. È definito dalla presenza di tessuto endometriale in posizioni extrauterine. Lo sviluppo di nuove terapie e strumenti diagnostici per l'endometriosi è stato limitato a causa in parte delle sfide nello studio della malattia. Al di fuori dei primati, pochi mammiferi hanno le mestruazioni e nessuno sviluppa endometriosi spontanea. I modelli di roditori sono popolari ma richiedono l'induzione artificiale dell'endometriosi, con molti che utilizzano topi immunocompromessi o malattie indotte chirurgicamente. Recentemente, è stata data maggiore attenzione ai modelli che coinvolgono l'iniezione intraperitoneale. Presentiamo un modello murino di endometriosi che integra diverse caratteristiche dei modelli di endometriosi esistenti in un nuovo sistema semplificato che si basa sulla quantificazione microscopica al posto della classificazione soggettiva. In questo modello, eseguiamo la stimolazione ormonale dei topi donatori, l'iniezione intraperitoneale, l'indagine addominale sistematica e la raccolta dei tessuti e la quantificazione istologica che può essere eseguita e verificata in qualsiasi momento dopo l'autopsia. Questo modello richiede risorse e formazione minime; non richiede competenze da parte di tecnici di laboratorio nella chirurgia murina di sopravvivenza o nell'identificazione di lesioni endometriotiche grossolane; può essere usato in topi immunocompromessi, immunocompetenti e/o mutanti; e crea in modo affidabile lesioni endometriotiche che sono istologicamente coerenti con la malattia endometriotica umana.

Introduzione

L'endometriosi è una malattia enigmatica del tratto riproduttivo femminile con significativi oneri finanziari e sanitari per le donne1,2. L'eziologia dell'endometriosi non è completamente compresa e sono state proposte molteplici spiegazioni tra cui metaplasia celomica, riposi mülleriani embrionali, reclutamento di cellule progenitrici derivate dal midollo osseo e mestruazioni retrograde3. Mentre possono essere coinvolti molteplici aspetti di questi meccanismi proposti, e nessuna singola spiegazione può spiegare tutte le forme della malattia, il modello principale di patogenesi dell'end....

Protocollo

NOTA: L'uso di animali in questo studio è stato approvato dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) presso il Cleveland Clinic Lerner Research Institute. Tutti gli standard di cura e utilizzo degli animali disponibili al pubblico sono stati eseguiti seguendo le linee guida del National Institutes of Health. Questa procedura utilizza tecniche asettiche. La capsula di Petri è sterile. Il PBS/soluzione salina utilizzato è sterile. Gli strumenti chirurgici per l'autopsia e la dissezione tissutale vengono sterilizzati in autoclave. Usiamo il 70% di EtOH sugli strumenti tra custodie di animali (se più di uno per sessione) per ridurre la contaminazione.

Risultati

Per un esperimento iniziale di prova del concetto, l'endometrio donatore di topi RFP è stato iniettato in topi riceventi wildtype. La colorazione H&E ha rivelato la conferma istopatologica dell'architettura classica della lesione dell'endometriosi (Figura 3A). La microscopia fluorescente ha confermato che la lesione osservata in questione proveniva dal donatore (Figura 3B).

Il secondo esperimento è stato eseguito utilizzando 10 dona.......

Discussione

Il nostro studio dimostra che l'endometriosi può essere indotta in modo affidabile nei topi senza richiedere l'uso di ovariectomia e / o chirurgia di sopravvivenza e che le lesioni endometriali ectopiche possono essere identificate e quantificate utilizzando un'indagine standardizzata dell'addome e un'analisi istologica.

Molti studi murini di endometriosi utilizzano l'endometriosi indotta chirurgica.......

Divulgazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da divulgare.

Riconoscimenti

Vorremmo ringraziare i membri del laboratorio Reizes per la loro revisione critica e le intuizioni durante la preparazione del manoscritto, così come i nuclei di imaging e istologia del Lerner Research Institute per la loro assistenza nella raccolta e nell'analisi dei dati. Questo lavoro è stato sostenuto attraverso un finanziamento interno attraverso il Comitato del programma di ricerca presso la Cleveland Clinic e da una sovvenzione esterna attraverso la Society for Reproductive Investigation e Bayer. La ricerca nel Laboratorio Reizes è finanziata anche attraverso VeloSano Bike to Cure, Centro di eccellenza della ricerca nel cancro ginecologico, e attraverso la Laur....

Materiali

NameCompanyCatalog NumberComments
Supplies for injecting PMSG into donor mouse
1 mL Tuberculin syringe with 27G needleFisher Scientific14-826-87
Pregnant mare serum gonadotropinSigma-Aldrich9002-70-4
Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing
6” serrated forceps, curved tipElectron Microscopy Sciences72993-6C
70% ethanol solutionPharmco33000HPLCCS4L70% solution dilute ethyl acetate 200 proof
Analytical balanceMettler ToledoME54TE
Carbon dioxideTriGas Supplier
Dissecting trayFisher ScientificS14000
No. 10 disposable scalpelFisher ScientificNC9999403
Scissors, curvedElectron Microscopy Sciences72941
Scissors, straightElectron Microscopy Sciences72940
Stereo microscopeLeica MicrosystemsLeica SE 4For tissue dissection
Sterile phosphate buffered saline (PBS)Institutional core facility supplies
Surgical instrument sterilization trayElectron Microscopy Sciences66112-02
Tissue culture dishesFisher Scientific08-772E
Weighing dishesFisher Scientific02-202-103
Supplies for injecting into recipient mouse
1 cc syringeBD Biosciences301025
18 G needleFisher Scientific148265d
200 uL pipette tipFisher Scientific02-707-422
Double distilled waterInstitutional core facility supplies
Latex bulbFisher Scientific03-448-21
Micro cover glass slipVWR48366-067
Microscope slideFisher Scientific12-544-7
Standard light microscopeLeica MicrosystemsDM ILFor evaluating vaginal cytology smears
Supplies for harvesting tissue from recipient mouse
10% Buffered formalinFisher ScientificSF100-4
Biopsy foam padsFisher Scientific22-038-222
Precision Digital CalipersElectron Microscopy Sciences62065-40
Processing/embedding cassettesFisher Scientific22-272416

Riferimenti

  1. Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A. Endometriosis. England Journal of Medicine. 382 (13), 1244-1256 (2020).
  2. Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis a....

Ristampe e Autorizzazioni

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