Per iniziare, mescola i componenti A e B del polidimetilsilossano, o PDMS, in un rapporto di 10 a uno. Dopo aver mescolato bene il composto, versare il composto in uno stampo master. Posizionare lo stampo PDMS sotto una pressione di una libbra per pollice quadrato per 15 minuti per rimuovere le bolle d'aria.
Polimerizzare lo stampo PDMS a 60 gradi Celsius per due ore. Sformare per ottenere lo stampo di produzione del microago. Quindi, pulire lo stampo di produzione con acqua ultra pura prima dell'uso.
Quantificare il contenuto proteico della soluzione di esosoma preparata utilizzando un kit di dosaggio BCA. Aggiungere una quantità appropriata di DPBS alla soluzione di esosoma. Ora, prepara una soluzione di 200 milligrammi per millilitro di trealosio usando DPBS come solvente.
Mescolare per 20 minuti per garantire la completa dissoluzione. Successivamente, preparare una soluzione di acido ialuronico e polivinilpirrolidone, o PVP, utilizzando rispettivamente DPBS ed etanolo come solvente. Mescolare per una notte per garantire la completa dissoluzione.
Mescolare la soluzione di esosoma e la soluzione di trealosio in un rapporto uguale. Aggiungere un volume uguale di soluzione di acido ialuronico e mescolare accuratamente per ottenere la soluzione della punta. Utilizzando un detergente al plasma, lavorare la superficie dello stampo PDMS per 30 secondi a bassa gradazione per migliorarne l'idrofilia.
Aggiungere 40 microlitri della soluzione della punta allo stampo PDMS. Centrifugare a 3.000 G per tre minuti a temperatura ambiente per assicurarsi che il liquido riempia lo strato dell'ago dello stampo. Rimuovere il liquido in eccesso dallo stampo e asciugare a temperatura ambiente in un forno di essiccazione sottovuoto per un giorno.
Quindi, aggiungere 200 microlitri di soluzione PVP allo stampo PDMS. Centrifugare a 3.000 g per tre minuti a temperatura ambiente per assicurarsi che il liquido riempia lo strato di supporto dello stampo. Dopo aver asciugato lo stampo per un giorno, sformare per ottenere il cerotto del microago caricato con esosoma.
