Per iniziare, inserire una micropipetta nell'estrattore per micropipette e tirare un ago per microiniezione. Allineare la punta dell'ago con le divisioni del tavolino micrometrico sotto un cannocchiale da dissezione. Con il micrometro come guida alla misurazione, utilizzare un paio di pinze affilate per rompere l'ago a una dimensione del foro leggermente più grande del diametro della cella.
Utilizzando una siringa da 50 millilitri dotata di riempitrice per pipette, riempire completamente l'ago con l'olio minerale. Sull'apparecchio per il trapianto, ruotare il rubinetto a tre vie in modo che il suo braccio lungo sia rivolto verso la pompa a microsiringa. Premere lo stantuffo della siringa del serbatoio per eliminare tutte le bolle d'aria dalla linea idraulica.
Mantenendo una leggera pressione sullo stantuffo, ruotare il rubinetto a tre vie in modo che il braccio lungo sia ora rivolto verso la siringa del serbatoio. Quindi inserire l'ago nel supporto senza introdurre bolle d'aria. Regolare l'ago in modo che sia rivolto direttamente a sinistra con un angolo di 10-15 gradi rispetto all'orizzontale.
Utilizzando i micromanipolatori grossolani e fini, manovrare la punta dell'ago sotto l'obiettivo del microscopio per metterla a fuoco. Se il liquido scorre dentro o fuori dalla punta dell'ago, regolare la pressione utilizzando la pompa a siringa fino a quando non si osserva un menisco stabile tra l'olio e l'RPT. Se rimane una bolla d'olio, spostare l'ago verso destra per ritirare la punta dall'RPT, quindi di nuovo verso sinistra per il riposizionamento.
Sposta il tavolino verso destra fino a quando l'animale donatore non viene riportato in vista. Centra e concentrati sulle cellule da trapiantare, allineando l'ago con le cellule appena fuori dall'animale. Quindi, inserire l'ago nell'animale donatore e, se necessario, ristabilizzare il menisco dell'olio nella punta dell'ago con la microsiringa.
Posizionare la punta dell'ago contro le cellule di interesse e applicare un'aspirazione delicata con la micropompa. Dopo aver prelevato cellule adeguate, rimuovere l'ago dal donatore e ristabilizzare il materiale nella punta dell'ago. Riposizionare il tavolino per portare il primo animale ospite in vista/Centro e concentrarsi sull'area in cui devono essere posizionate le cellule e allineare l'ago con questa regione appena fuori dall'animale.
Quindi inserire l'ago nell'animale ospite e ristabilizzare il menisco dell'olio nella punta dell'ago. Posizionare la punta dell'ago nel sito di deposizione e applicare una leggera pressione con la microsiringa fino a quando il numero corretto di cellule del donatore non viene rilasciato dall'ago. Infine, rimuovi l'ago dall'ostia.
A 12 ore dal trapianto, un neurone donatore è stato osservato con successo nella regione anteriore del nucleo motore vago dell'ospite, mostrando segni di sporgenze neuritiche sane. Due giorni dopo il trapianto, il neurone trapiantato non solo era rimasto posizionato correttamente, ma aveva anche iniziato a estendere un nuovo assone verso il quarto arco faringeo, indicando una riuscita integrazione all'interno dell'ospite.
