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Preparazione di colture organotipiche cerebellari per lo studio della risposta al danno del DNA nelle cellule di Purkinje

Trascrizione

Per iniziare, ottieni il cervelletto da un cucciolo di topo di 10 giorni in un tampone di dissezione a freddo. Dopo aver rimosso il tampone in eccesso, posizionare il cervelletto sulla piattaforma di taglio in orientamento verticale. Eseguire l'affettatura parasagittale con uno spessore della fetta di 350 micrometri.

Separare delicatamente le fette con una spatola di iris fine e metterle in un mezzo di dissezione freddo. Sotto il binocolo, usa due spatole a iride curve per separare accuratamente le fette di tessuto l'una dall'altra. Per le colture, utilizzare fette derivate dal verme cerebellare situato nella zona corticonucleare mediale dell'organo.

Utilizzando una spatola larga, trasferire ogni fetta di tessuto su un inserto di coltura. Spostare ciascun inserto che trasporta una fetta di tessuto in un pozzetto della piastra a sei pozzetti contenente il terreno preriscaldato. Durante l'incubazione, aspirare il terreno usato con una pipetta di vetro sterile.

Utilizzando una pipetta sierologica da cinque millilitri, aggiungere un millilitro di aquila media basale fresca con la punta della pipetta appoggiata alla parete del pozzetto senza disturbare il tessuto.

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