Gli autori desiderano ringraziare Eugenio Vivas, Kurt Heungens, Eric Martens, Charles Cowles, Darby Zucchero, Eric Stabb, e Todd Ciche per il loro contributo allo sviluppo di questo protocollo e gli strumenti usati. KEM e JMC sono stati sostenuti dal National Institutes of Health (NIH) Premio Nazionale Servizio di Ricerca T32 (AI55397 &quot;Microbi nella salute e nella malattia&quot;). JMC è stato supportato da una National Science Foundation (NSF) Graduate Research Fellowship. Questo lavoro è stato sostenuto dalle concessioni dal National Science Foundation (IOS-0920631 e IOS-0950873).

<ol>
	<li>Holterman, M., van der Wurff, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylum-wide+analysis+of+SSU+rDNA+reveals+deep+phylogenetic+relationships+among+nematodes+and+accelerated+evolution+toward+crown+clades.">Phylum-wide analysis of SSU rDNA reveals deep phylogenetic relationships among nematodes and accelerated evolution toward crown clades.</a> Mol. Biol. Evol. 23, 1792-1800 (2006).</li><li>Lambshead, P. J. D., Boucher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+nematode+deep-sea+biodiversity+-+hyperdiverse+or+hype.">Marine nematode deep-sea biodiversity - hyperdiverse or hype.</a> J. Biogeogr. 30, 475-485 (2003).</li><li>Poinar, G. O. J., Thomas, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+Achromobacter+nematophilus+Poinar+and+Thomas+(Achromobacteraceae:+Eubacteriales)+in+the+development+of+the+nematode,+DD-136+(Neoaplectana+sp.+Steinernematidae).">Significance of Achromobacter nematophilus Poinar and Thomas (Achromobacteraceae: Eubacteriales) in the development of the nematode, DD-136 (Neoaplectana sp. Steinernematidae).</a> Parasitol. 56, 385-390 (1966).</li><li>Herbert, E. E., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Friend+and+foe:+the+two+faces+of+Xenorhabdus+nematophila.">Friend and foe: the two faces of Xenorhabdus nematophila.</a> Nat. Rev. Microbiol. 5, 634-646 (2007).</li><li>Kaya, H. K., Gaugler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entomopathogenic+nematodes.">Entomopathogenic nematodes.</a> Annu. Rev. Entomol. 38, 181-206 (1993).</li><li>Bird, A. F., Akhurst, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nature+of+the+intestinal+vesicle+in+nematodes+of+the+family+Steinernematidae.">The nature of the intestinal vesicle in nematodes of the family Steinernematidae.</a> Int. J. Parasitol. 13, 599-606 (1983).</li><li>Martens, E. C., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Steinernema+carpocapsae+intestinal+vesicle+contains+a+subcellular+structure+with+which+Xenorhabdus+nematophila+associates+during+colonization+initiation.">The Steinernema carpocapsae intestinal vesicle contains a subcellular structure with which Xenorhabdus nematophila associates during colonization initiation.</a> Cell. Microbiol. 7, 1723-1735 (2005).</li><li>Snyder, H. A., Stock, S. P., Kim, S. K., Flores-Lara, Y., Forst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+colonization+and+release+process+of+Xenorhabdus+nematophila+and+the+morphology+and+ultrastructure+of+the+bacterial+receptacle+of+its+nematode+host,+Steinernema+carpocapsae.">New insights into the colonization and release process of Xenorhabdus nematophila and the morphology and ultrastructure of the bacterial receptacle of its nematode host, Steinernema carpocapsae.</a> Appl. Environ. Microbiol. 73, 5338-5346 (2007).</li><li>Abebe, E., Abebe-Akele, F., Morrison, J., Cooper, V., Thomas, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insect+pathogenic+symbiosis+between+a+Caenorhabditis+and+Serratia.">An insect pathogenic symbiosis between a Caenorhabditis and Serratia.</a> Virulence. 2, 158-161 (2011).</li><li>Abebe, E., Jumba, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entomopathogenic+Caenorhabditis+briggsae.">An entomopathogenic Caenorhabditis briggsae.</a> J. Exp. Biol. 213, 3223-3229 (2010).</li><li>Torres-Barragan, A., Suazo, A., Buhler, W. G., Cardoza, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+entomopathogenicity+and+bacterial+associates+of+the+nematode+Oscheius+carolinensis.">Studies on the entomopathogenicity and bacterial associates of the nematode Oscheius carolinensis.</a> Biol. Control. 59, 123-129 (2011).</li><li>Ye, W. M., Torres-Barragan, A., Cardoza, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscheius+carolinensis+n.+sp+(Nematoda:+Rhabditidae),+a+potential+entomopathogenic+nematode+from+vermicompost.">Oscheius carolinensis n. sp (Nematoda: Rhabditidae), a potential entomopathogenic nematode from vermicompost.</a> Nematology. 12, 121-135 (2010).</li><li>Zhang, C., Liu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterorhabditidoides+chongmingensis+gen.+nov.,+sp.+nov.+(Rhabditida:+Rhabditidae),+a+novel+member+of+the+entomopathogenic+nematodes.">Heterorhabditidoides chongmingensis gen. nov., sp. nov. (Rhabditida: Rhabditidae), a novel member of the entomopathogenic nematodes.</a> J. Invertebr. Pathol. 98, 153-168 (2008).</li><li>Martens, E. C., Heungens, K., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+colonization+events+in+the+mutualistic+association+between+Steinernema+carpocapsae+nematodes+and+Xenorhabdus+nematophila+bacteria.">Early colonization events in the mutualistic association between Steinernema carpocapsae nematodes and Xenorhabdus nematophila bacteria.</a> J. Bacteriol. 185, 3147-3154 (2003).</li><li>Ciche, T. A., Ensign, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+the+insect+pathogen,+Photorhabdus+luminescens,+which+end+of+a+nematode+is+out.">For the insect pathogen, Photorhabdus luminescens, which end of a nematode is out.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69, 1890-1897 (2003).</li><li>Ciche, T. A., Kim, K. S., Kaufmann-Daszczuk, B., Nguyen, K. C., Hall, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+invasion+and+matricide+during+Photorhabdus+luminescens+transmission+by+Heterorhabditis+bacteriophora+nematodes.">Cell invasion and matricide during Photorhabdus luminescens transmission by Heterorhabditis bacteriophora nematodes.</a> Appl. Environ. Microbiol. 74, 2275-2287 (2008).</li><li>Easom, C. A., Joyce, S. A., Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+genes+involved+in+the+mutualistic+colonization+of+the+nematode+Heterorhabditis+bacteriophora+by+the+bacterium+Photorhabdus+luminescens.">Identification of genes involved in the mutualistic colonization of the nematode Heterorhabditis bacteriophora by the bacterium Photorhabdus luminescens.</a> BMC Microbiol. 10, 45 (2010).</li><li>Somvanshi, V. S., Kaufmann-Daszczuk, B., Kim, K. S., Mallon, S., Ciche, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photorhabdus+phase+variants+express+a+novel+fimbrial+locus,+mad,+essential+for+symbiosis.">Photorhabdus phase variants express a novel fimbrial locus, mad, essential for symbiosis.</a> Mol. Microbiol. 77, 1021-1038 (2010).</li><li>Martens, E. C., Russell, F. M., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Xenorhabdus+nematophila+metabolic+mutants+yields+insight+into+stages+of+Steinernema+carpocapsae+nematode+intestinal+colonization.">Analysis of Xenorhabdus nematophila metabolic mutants yields insight into stages of Steinernema carpocapsae nematode intestinal colonization.</a> Mol. Microbiol. 51, 28-45 (2005).</li><li>Sugar, D. R., Murfin, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+variation+and+host+interactions+of+Xenorhabdus+bovienii+SS-2004,+the+entomopathogenic+symbiont+of+Steinernema+jollieti+nematodes.">Phenotypic variation and host interactions of Xenorhabdus bovienii SS-2004, the entomopathogenic symbiont of Steinernema jollieti nematodes.</a> Env. Microbiol. 14, 924-939 (2012).</li><li>Cowles, C. E., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Xenorhabdus+nematophila+nilABC+genes+confer+the+ability+of+Xenorhabdus+spp.+to+colonize+Steinernema+carpocapsae+nematodes.">The Xenorhabdus nematophila nilABC genes confer the ability of Xenorhabdus spp. to colonize Steinernema carpocapsae nematodes.</a> J. Bacteriol. 190, 4121-4128 (2008).</li><li>Heungens, K., Cowles, C. E., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Xenorhabdus+nematophila+genes+required+for+mutualistic+colonization+of+Steinernema+carpocapsae+nematodes.">Identification of Xenorhabdus nematophila genes required for mutualistic colonization of Steinernema carpocapsae nematodes.</a> Mol. Microbiol. 45, 1337-1353 (2002).</li><li>Goetsch, M., Owen, H., Goldman, B., Forst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+PixA+inclusion+body+protein+of+Xenorhabdus+nematophila.">Analysis of the PixA inclusion body protein of Xenorhabdus nematophila.</a> J. Bacteriol. 188, 2706-2710 (2006).</li><li>Bhasin, A., Chaston, J. M., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutational+Analyses+Reveal+Overall+Topology+and+Functional+Regions+of+NilB,+a+Bacterial+Outer+Membrane+Protein+Required+for+Host+Association+in+a+Model+of+Animal-Microbe+Mutualism.">Mutational Analyses Reveal Overall Topology and Functional Regions of NilB, a Bacterial Outer Membrane Protein Required for Host Association in a Model of Animal-Microbe Mutualism.</a> J. Bacteriol. 194, 1763-1776 (2012).</li><li>Ciche, T. A., Goffredi, S. K., Reddy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in General and Molecular Microbiology. , 394-419 (2007).</li><li>Goodrich-Blair, H., Clarke, D., Grewal, P. S., Ciche, T. A., Stock, S. P., Boemare, N., Vandenberg, J., Glazar, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Insect Pathogens, Molecular Approaches and Techniques. , 239-269 (2009).</li><li>Stock, S. P., Goodrich-Blair, H., Lacey, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Techniques in Invertebrate Pathology. , 375-425 (2012).</li><li>Martens, E. C., Gawronski-Salerno, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenorhabdus+nematophila+requires+an+intact+iscRSUA-hscBA-fdx+locus+to+colonize+Steinernema+carpocapsae+nematodes.">Xenorhabdus nematophila requires an intact iscRSUA-hscBA-fdx locus to colonize Steinernema carpocapsae nematodes.</a> J. Bacteriol. 185, 3678-3682 (2003).</li><li>Vivas, E. I., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenorhabdus+nematophilus+as+a+model+for+host-bacterium+interactions:+rpoS+is+necessary+for+mutualism+with+nematodes.">Xenorhabdus nematophilus as a model for host-bacterium interactions: rpoS is necessary for mutualism with nematodes.</a> J. Bacteriol. 183, 4687-4693 (2001).</li><li>White, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+obtaining+infective+nematode+larvae+from+cultures.">A method for obtaining infective nematode larvae from cultures.</a> Science. 66, 302-303 (1927).</li><li>Ciche, T. A., Ensign, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+the+insect+pathogen+Photorhabdus+luminescens,+which+end+of+a+nematode+is+out.">For the insect pathogen Photorhabdus luminescens, which end of a nematode is out.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69, 1890-1897 (2003).</li><li>Sicard, M., Brun, N. L. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+native+Xenorhabdus+on+the+fitness+of+their+Steinernema+hosts:+contrasting+types+of+interaction.">Effect of native Xenorhabdus on the fitness of their Steinernema hosts: contrasting types of interaction.</a> Parasitol. Res. 91, 520-524 (2003).</li><li>Lambertsen, L., Sternberg, C., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mini-Tn7+transposons+for+site-specific+tagging+of+bacteria+with+fluorescent+proteins.">Mini-Tn7 transposons for site-specific tagging of bacteria with fluorescent proteins.</a> Environ. Microbiol. 6, 726-732 (2004).</li><li>Miller, W. G., Leveau, J. H., Lindow, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+gfp+and+inaZ+broad-host-range+promoter-probe+vectors.">Improved gfp and inaZ broad-host-range promoter-probe vectors.</a> Mol. Plant Microbe Int. 13, 1243-1250 (2000).</li><li>Teal, T. K., Lies, D. P., Wold, B. J., Newman, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiometabolic+stratification+of+Shewanella+oneidensis+biofilms.">Spatiometabolic stratification of Shewanella oneidensis biofilms.</a> Appl. Environ. Microbiol. 72, 7324-7330 (2006).</li><li>Bao, Y., Lies, D. P., Fu, H., Roberts, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+Tn7-based+system+for+the+single-copy+insertion+of+cloned+genes+into+chromosomes+of+Gram-negative+bacteria.">An improved Tn7-based system for the single-copy insertion of cloned genes into chromosomes of Gram-negative bacteria.</a> Gene. 109, 167-168 (1991).</li><li>Woodring, J. L., Kaya, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steinernematid+and+Heterorhabditid+Nematodes:+A+Handbook+of+Biology+and+Techniques.">Steinernematid and Heterorhabditid Nematodes: A Handbook of Biology and Techniques.</a> Southern Cooperative Series Bulletin 331. , (1988).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il protocollo qui descritto fornisce un metodo per la rilevazione ottica di batteri all&#39;interno di un host nematode (Figura 1). Questo metodo sfrutta la trasparenza ottica di nematodi e la capacità di etichetta fluorescente batteri, consentendo l&#39;analisi in vivo di batteri all&#39;interno dell&#39;ospite nematode (Figura 3). In particolare, questo approccio identifica localizzazione batterica all&#39;interno del suo ospite. Contando una popolazione di nematodi e scorin...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> Lipid Agar (Sterile) </td><td></td><td></td><td> 8 grammi di brodo di coltura, 15 grammi di agar, 5 grammi di estratto di lievito, 890 ml di acqua, 10 ml 0,2 g / ml MgCl2. 6H 2 0, 96 ml di sciroppo di mais soluzione *, 4 ml di olio di mais * Mescolare i media versando piastre * Aggiungere ingrediente sterile dopo la sterilizzazione in autoclave </td></tr><tr><td> Mais Sciroppo Soluzione (Sterile) </td><td></td><td></td><td> 7 ml di sciroppo di mais, 89 ml di acqua mix e autoclave </td></tr><tr><td> Egg Solution </td><td></td><td></td><td> 16,6 ml di ipoclorito di sodio al 12%, 5 ml KOH 5M, 80 ml di acqua </td></tr><tr><td> Lisogenia Brodo (Sterile) </td><td></td><td></td><td> 5 grammi di estratto di lievito, 10 triptone grammi, 5 grammi di sale, 1 litro di acqua mix e autoclave </td></tr><tr><td> Microcentrifugare </td><td> Pescatore </td><td> 13-100-675 </td><td> Qualsiasi microcentrifuga che contiene i tubi microcentrifuga funziona </td></tr><tr><td> Centrifuga </td><td> Beckman </td><td> 366802 </td><td> Dimensioni piano centrifuga tabella che contiene 15 ml e 50 ml provette coniche </td></tr><tr><td> Sterile 60 mm x 15 millimetri Petri </td><td> Pescatore </td><td> 0875713 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml per centrifuga tubi </td><td> Pescatore </td><td> 05-539-6 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml per centrifuga tubi </td><td> Pescatore </td><td> 05-531-6 </td><td></td></tr><tr><td> Sterile 100 millimetri x 20 mm Petri </td><td> Pescatore </td><td> 0875711Z </td><td> Più profondo rispetto ai normali piastre di Petri </td></tr><tr><td> 24-pozzetti </td><td> Greiner Bio-One &lt;/ Td&gt; <td> 662000-06 </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio </td><td></td><td></td><td> Il microscopio ha bisogno di capacità fluorescenti compatibile con il fluoroforo </td></tr><tr><td> Paraformaldeide </td><td> Scienze della microscopia elettronica </td><td> 15710 </td><td></td></tr><tr><td> PBS (Sterile) </td><td></td><td></td><td> 8 g NaCl 0,2 g KCL 1,44 g di Na 2 HPO 4 0,24 g KH 2 PO 4 1 L di acqua Un pH di 7,4 e acqua a 1 L e autoclave </td></tr><tr><td> Provette per microcentrifuga </td><td> Pescatore </td><td> 05-408-138 </td><td> 2 ml o 1.5 ml tubi </td></tr><tr><td> Shaker </td><td></td><td></td><td> Qualsiasi shaker che fa sì che il liquido per spostare delicatamente funziona </td></tr><tr><td> Acido Diaminopimelic </td><td> Sigma </td><td&gt; D-1377 </td><td> Se necessario, integrare i media ad una concentrazione o 1 mM </td></tr></tbody></table>

visualizing bacteria in nematodes using fluorescent microscopy

Simbiosi, la convivenza di due o più organismi, sono diffusi in tutti i regni della vita. Come due dei microrganismi più diffusi sulla terra, nematodi e batteri formano una vasta gamma di associazioni simbiotiche che vanno dal vantaggioso per patogeni 1-3. Una tale associazione è il rapporto di reciproco beneficio tra i batteri e nematodi Xenorhabdus Steinernema, che è emerso come un sistema modello di simbiosi 4. Nematodi Steinernema sono entomopatogeno, usando il loro simbionte batterico per uccidere gli insetti 5. Per la trasmissione tra gli host di insetti, i batteri colonizzano l&#39;intestino dello stadio infettivo del nematode del giovanile 6-8. Recentemente, diverse specie di nematodi altri hanno dimostrato di utilizzare i batteri per uccidere insetti 9-13, ed indagini hanno iniziato a esaminare le interazioni tra i nematodi e batteri in questi sistemi &lt;sup&gt; 9. Si descrive un metodo per la visualizzazione di un simbionte batterico all&#39;interno o su un host nematode, sfruttando la trasparenza ottica di nematodi quando visti al microscopio. I batteri sono progettati per esprimere una proteina fluorescente, consentendo loro visualizzazione mediante microscopia a fluorescenza. Sono disponibili molti plasmidi che portano geni che codificano proteine ​​che reagiscono a lunghezze d&#39;onda differenti (verde o rossa), e la coniugazione dei plasmidi da un ceppo di Escherichia coli in un donatore simbionte destinatario batterica è successo per una vasta gamma di batteri. I metodi descritti sono stati sviluppati per indagare l&#39;associazione tra Steinernema carpocapsae e Xenorhabdus nematophila 14. Metodi simili sono stati utilizzati per studiare altri nematodi batterio associazioni 9, 15-18 e l&#39;approccio è quindi generalmente applicabile. La method consente la caratterizzazione della presenza di batteri e localizzazione all&#39;interno nematodi a diversi stadi di sviluppo, fornendo approfondimenti sulla natura dell&#39;associazione e il processo di colonizzazione 14, 16, 19. Analisi microscopica rivela sia colonizzazione frequenza all&#39;interno di una popolazione di batteri e localizzazione per ospitare tessuti 14, 16, 19-21. Questo è un vantaggio rispetto ad altri metodi di monitoraggio batteri all&#39;interno popolazioni di nematodi, come sonicazione 22 o molatura 23, che possono fornire livelli medi di colonizzazione, ma non può, per esempio, discriminare popolazioni con una frequenza elevata di bassi carichi simbionti da popolazioni con una bassa frequenza di carichi elevati simbionti. La discriminazione della frequenza e del carico di batteri colonizzatori può essere particolarmente importante quando lo screening o la caratterizzazione di mutanti batterici fenotipi colonizzazione 21, 24. Infatti, microscopia a fluorescenza è stato utilizzato in screening ad alta di mutanti batterici per difetti di colonizzazione 17, 18, ​​ed è meno laborioso rispetto ad altri metodi, compreso sonicazione 22, 25-27 e dissezione nematode individuale 28, 29.

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Visualizing Bacteria in Nematodes using Fluorescent Microscopy

Per studiare il mutualismo tra<em&gt; Xenorhabdus</em&gt; Batteri e<em&gt; Steinernema</emNematodi&gt;, i metodi sono stati sviluppati per monitorare la presenza di batteri e posizione all&#39;interno nematodi. L&#39;approccio sperimentale, che può essere applicata ad altri sistemi, comporta batteri ingegneria per esprimere la proteina fluorescente verde e visualizzazione, utilizzando batteri microscopia a fluorescenza all&#39;interno del nematode trasparente.

Visualizzare batteri nei nematodi usando la microscopia a fluorescenza

 
Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

visualizing-bacteria-in-nematodes-using-fluorescent-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

18.6K Views.  University of Wisconsin-Madison. Per studiare il mutualismo tra Xenorhabdus Batteri e Steinernema, i metodi sono stati sviluppati per monitorare la presenza di batteri e posizione all'interno nematodi. L'approccio sperimentale, che può essere applicata ad altri sistemi, comporta batteri ingegneria per esprimere la proteina fluorescente verde e visualizzazione, utilizzando batteri microscopia a fluorescenza all'interno del nematode trasparente.