Per iniziare, scaricare i programmi a impulsi NMR nella directory del computer che utilizza lo spettrometro NMR e regolare la versione di TopSpin. Scaricare gli impulsi a forma di NMR nella directory e verificare che la versione di TopSpin sia aggiornata di conseguenza. Dopo aver determinato le larghezze spettrali e i tempi di acquisizione appropriati, digitare edc nel software TopSpin in una nuova directory per copiare l'esperimento HSQC.
Per aprire i parametri della sequenza di impulsi di tipo ased, fare clic sui tre punti accanto al parametro PULPROG per modificare il programma di impulsi in esperimento azot-15 R1 rho. Fare doppio clic sul programma a impulsi, fare clic su Imposta PULPROG sul set di dati e confermare con OK. Digitare ased per aprire i parametri della sequenza di impulsi. Inserire tutte le intensità e le lunghezze del gradiente mancanti come indicato nella sequenza di impulsi.
Quindi, inserire per il contatore di loop L3 metà della voce azoto-15 TD nella finestra dei parametri di acquisizione. Inserire per il contatore di loop L6 il numero di punti dati di rilassamento registrati per l'adattamento della curva di rilassamento. Impostare il TanhTan_half adiabatico.
nl come la forma dell'impulso di azoto-15 SP8. Quindi impostare il TanhTan_half2nd adiabatico. nl come la forma dell'impulso di azoto-15 SP9.
Assicurarsi che la lunghezza dell'impulso sia sufficientemente lunga per l'adiabaticità con P8 impostato su 3.000 microsecondi. Quindi impostare il ritardo di recupero dell'interscansione, D1, su almeno due secondi o più. Impostare le scansioni fittizie su almeno 64.
Come punto di partenza, impostare il numero di scansioni su quattro e utilizzare multipli di quattro se il rapporto segnale/rumore è troppo basso. Impostare l'O1 sulla frequenza portante calibrata, l'O2P su 176 parti per milione e copiare l'O3P dall'esperimento HSQC dell'azoto protonico-15. Ora, impostare la lunghezza dell'impulso P7 sulla lunghezza dell'impulso di 90 gradi calibrata in precedenza.
Quindi copiare il livello di potenza dell'impulso a 90 gradi su PLW3 e PLW7. Successivamente, impostare le lunghezze dell'impulso P1 e P19 sulla lunghezza dell'impulso del protone di 90 gradi. Imposta il numero di incrementi nella dimensione indiretta, TD è uguale a L3 per due per L6. Quindi, impostare l'impulso sagomato SP5 su una forma I-BURP2 e la lunghezza dell'impulso P15 su 2.000 microsecondi.
Quindi aprire la visualizzazione dello strumento Forma facendo clic sulla E accanto all'impulso a forma di I-BURP2 nella finestra dei parametri della sequenza di impulsi TopSpin. Per simulare l'impulso sagomato, fare clic sul pulsante Avvia simulazione NMR. Controllare la lunghezza dell'impulso sagomato e l'angolo di rotazione nella finestra di simulazione e fare clic su Avvia SIM NMR per procedere.
Controllare l'intervallo di eccitazione nella simulazione e selezionare la lunghezza dell'impulso I-BURP2 appropriata per coprire la dispersione spettrale del protone evitando l'eccitazione dell'acqua. Impostare P15 sulla lunghezza dell'impulso sagomato dalla finestra di simulazione con il miglior impulso I-BURP2. Ora, impostare SPOFFS5 per regolare la frequenza portante dell'impulso I-BURP2, spostando l'intervallo di eccitazione a sinistra o a destra per evitare disturbi da magnetizzazione dell'acqua.
Quindi aprire lo strumento Bruker Shape e fare clic su Avvia simulazione NMR per determinare il livello di potenza appropriato dell'impulso sagomato. Impostare la lunghezza dell'impulso I-BURP2 sulla lunghezza dell'impulso sagomato e notare la lunghezza dell'impulso del protone rettangolare morbido di 90 gradi mostrata nella finestra di simulazione. Digita calcpowlev per calcolare la differenza di livello di potenza in decibel tra l'impulso protonico duro a 90 gradi e l'impulso protonico rettangolare morbido a 90 gradi.
Copiare il livello di potenza dell'impulso protonico duro a 90 gradi su SPW5 e regolare aggiungendo la differenza memorizzata in decibel. Per determinare il livello di potenza dello spin-lock, calcolare la corrispondente lunghezza dell'impulso di azoto-15 a 90 gradi. Usa calcpowlev per calcolare la differenza di potenza in decibel tra la potenza di spin-lock e l'impulso di azoto-15 a 90 gradi.
Copiare il livello di potenza dell'impulso di azoto-15 a 90 gradi su PLW7 e regolare il livello di potenza di blocco della rotazione PLW8 aggiungendo la differenza di potenza calcolata. Copiare il livello di potenza dello spin-lock PLW8 nei livelli di potenza SPW8 e SPW9. Per determinare il livello di potenza del disaccoppiamento dell'azoto-15, utilizzare calcpowlev per calcolare la differenza di potenza tra la potenza dell'impulso di disaccoppiamento dell'azoto-15 a 90 gradi e l'impulso duro dell'azoto-15 a 90 gradi.
Copiare il livello di potenza dell'impulso duro di azoto-15 a 90 gradi PLW7 nel livello di potenza di disaccoppiamento PLW31 e regolare aggiungendo la differenza di potenza calcolata in decibel. Per la compensazione della temperatura, includere la linea di definizione TEMP_ nel programma a impulsi. Impostare P18 sulla durata massima dello spin-lock utilizzato nell'esperimento rho azoto-15 R1.
Nel caso dell'azoto-15, i campioni marcati con carbonio-13 includono la linea di definizione LABEL_CN nel programma a impulsi. Impostare P4 sulla lunghezza dell'impulso calcolata. Utilizzare calcpowlev per calcolare la differenza di potenza in decibel tra P4 e l'impulso duro di carbonio-13.
Copiare il livello di potenza dell'impulso duro al carbonio-13 in PLW4 e aggiungere la differenza di potenza calcolata in decibel. Copiare PLW4 in PLW2. Per determinare i ritardi di rilassamento appropriati per il campionamento, eseguire i primi otto decadimenti di induzione liberi, o FID, ed elaborarli.
Scegliere le voci vplist in cui l'intensità di picco dell'esperimento con ritardo più lungo diminuisce ad almeno uno su e, ma non inferiore al 25% rispetto all'esperimento con ritardo più breve. Digita rga nella riga di comando per determinare il guadagno del ricevitore. Avvia un test dell'esperimento azot-15 R1 rho digitando zg nella riga di comando.
Verificare che il segnale dell'acqua sia soppresso per tutti i ritardi. Inoltre, controllare l'incremento nove, il secondo incremento dello schema di rilevamento in quadratura.
