L'obiettivo generale di questo paradigma è valutare l'efficacia di un potenziale farmaco anti-alcol usando modelli di roditori di disturbo da consumo di alcol. Il disturbo da consumo di alcol rappresenta una grave crisi della salute pubblica. I trattamenti attuali sono inefficaci ed è necessaria una ricerca preclinici in corso.
Il nostro protocollo ci consente di valutare la sicurezza e l'utilità di un potenziale trattamento e di dare un'occhiata alla neurobiologia sottostante del disturbo stesso. Iniziare la procedura riscaldando un coltello da utilità sul bruciatore Bunsen. Usando questo coltello, tagliare circa un pollice dalle estremità superiore e inferiore di una pipetta sierologica da 18 millilitri di plastica.
Quindi scaldare la pipetta sotto una pistola termica. Inserire il tubo del sipper cuscinetto a sfera nell'estremità inferiore della pipetta. Quindi, utilizzando una pistola a involucro termoretraibile disponibile in commercio, sigillare il tubo del setaccio in posizione con involucro termoretraibile.
Tappare l'altra apertura con un tappo in silicone. Per l'assunzione animale, all'arrivo, casa singola ogni topo nella gabbia standard in polisolfone in policarbonato con biancheria da letto, cibo e acqua e un piano in gabbia a griglia metallica. A partire dal quarto giorno della singola alimazione abitativa di una settimana, misurare e registrare il peso giornaliero del corpo e del cibo del topo.
Misurare l'assunzione d'acqua utilizzando le incisioni accanto alla bottiglia invertita, per registrare il punto più alto del menisco. Una volta che l'assunzione di acqua si è stabilizzata a più o meno 10% variabilità dalla media degli ultimi tre giorni, iniziare l'accesso all'etanolo con TBC o DID. Per condurre tbs, preparare la soluzione di etanolo al 10% in 1.000 millilitri aggiungendo 105,3 millilitri di etanolo di grano a prova di 190 a 894,7 millilitri di acqua, quindi scuoterlo accuratamente.
Dato che l'etanolo evapora rapidamente, sostituire la soluzione due volte a settimana. Il primo giorno di TBC, in ogni gabbia, svuotare una delle due bottiglie d'acqua e riempirla fino all'orlo con la soluzione di etanolo appena preparata. Dato che l'etanolo e l'acqua sono difficili da distinguere visivamente, etichettare chiaramente le bottiglie con il loro contenuto corrispondente.
Aggiungere altra soluzione alla bottiglia d'acqua in base alle esigenze. Quindi riposizionare la bottiglia nella gabbia, assicurandosi che il cappuccio sia chiuso in modo sicuro e privo di bolle d'aria o perdite dal beccuccio. Rimuovere eventuali bolle d'aria semplicemente toccando la bottiglia in modo che l'aria possa sfuggire alla bottiglia.
Alternare la posizione della bottiglia a giorni alterni in modo da correggere le influenze correlate alle preferenze del luogo condizionate nell'attività potabile. Registrare il livello di assunzione di etanolo e analizzare il rapporto di assunzione e preferenza del 10% di etanolo. Non appena l'assunzione di etanolo è diventata stabile, somministrare un'iniezione intraperitoneale di controllo a ciascun mouse durante la routine di misurazione giornaliera, per abituare il mouse all'iniezione.
Una volta ristabilita una linea di base di etanolo a bassa variabilità, dividere i topi in gruppi di controllo e sperimentali utilizzando i valori di assunzione di etanolo in modo che tutti i gruppi abbiano valori medi di assunzione di etanolo approssimativamente simili. Inizia il dosing giornaliero dei farmaci, per una durata acuta o di più giorni. Per condurre DID, in ogni giorno di accesso all'etanolo programmato, registrare le misurazioni per il volume dell'acqua, l'assunzione di cibo e il peso corporeo ed eseguire il dosing farmacologico.
Eseguire questa operazione durante un periodo preselezionato durante il ciclo di luce scelto in conformità con la farmacocinetica del farmaco in modo che il composto si avvicini alla massima concentrazione cerebrale durante il periodo di bere. Successivamente, preparare la soluzione di etanolo al 20% in 1.000 millilitri aggiungendo 210,5 millilitri di etanolo di grano a prova di 190 a 789,5 millilitri di acqua. Quindi scuotilo a fondo.
Riempire la bottiglia di etanolo prima dell'inizio della sessione di bevute in modo che non appena il DID inizia, la bottiglia d'acqua possa essere semplicemente sostituita con la bottiglia di alcol. Durante l'intera sessione DID, utilizzare un proiettore a luci rosse per non disturbare l'animale. All'inizio della sessione di bevute DID, che dovrebbe iniziare tre ore nel ciclo buio prima del ciclo della luce, registrare il volume di acqua per ogni mouse.
Quindi sostituire ogni bottiglia d'acqua con una bottiglia di soluzione di etanolo al 20% e registrare il volume iniziale di etanolo. Leggere e registrare il volume finale di etanolo due ore dopo alla fine della sessione di bevute nei giorni da uno a tre e quattro ore dopo il quarto giorno. Quindi analizzare l'assunzione di etanolo del 20%.
Successivamente, sostituire la bottiglia di etanolo con una bottiglia d'acqua e registrare il volume d'acqua. Questa cifra mostra la valutazione degli effetti di una dose acuta di moxidectina a cinque milligrammi per chilogrammo sull'assunzione e sulla preferenza di etanolo. Una singola dose di moxidectina ha ridotto significativamente l'assunzione di alcol superiore al 45% rispetto alle iniezioni di pre-moxidectina e la preferenza superiore al 30%10% di assunzione e preferenza di etanolo rimangono entrambe significativamente inferiori alla soluzione salina il giorno immediatamente successivo al trattamento MOX.
Qui, il binge drinking è stato modellato utilizzando la procedura DID. Ai topi è stata somministrata la soluzione salina nei giorni da uno a quattro con etanolo basale del 20% stabilito il quarto giorno. Nei giorni da uno a tre del secondo ciclo settimanale, tutti i topi hanno ricevuto un'altra iniezione salina giornaliera.
I valori di assunzione di etanolo del terzo giorno sono stati quindi utilizzati per dividere i topi in due gruppi che hanno successivamente ricevuto un'iniezione di moxidectina a cinque milligrammi per chilogrammo o salina il quarto giorno. La settimana seguente, tutti i topi hanno ricevuto iniezioni saline giornaliere nei giorni da uno a quattro e l'assunzione di etanolo è stata misurata ancora una volta il quarto giorno. La somministrazione acuta di MOX è stata analizzata e ha rilevato una significativa riduzione dell'assunzione di alcol superiore al 54% rispetto alle iniezioni pre-farmaco.
Tieni presente che gli esperimenti futuri che utilizzano questo protocollo devono essere fatti per valutare il meccanismo, il dosing e la tossicità di un potenziale farmaco, nonché per valutarne l'efficacia in relazione alle attuali opzioni di trattamento.
