L'obiettivo generale di questo pretrattamento è quello di generare topi e che i canali TRPV1 siano desensibilizzati nelle regioni sovraspinali. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo neurofarmacologico. Il vantaggio principale di questa tecnica è che la desensibilizzazione selettiva sopraspinale TRPV1 può essere indotta in un modo abbastanza semplice.
Per iniziare questa procedura, anestetizzare un topo con sodio pentobarbitale intraperitonealmente e verificare la perdita del riflesso di destra. Per il trattamento sottocutaneo, iniettare RTX a 20 microgrammi per millilitro nella parte posteriore del collo con un volume di 0,1 millilitro per 10 grammi di peso corporeo. Per il gruppo di controllo, iniettare il veicolo nello stesso modo.
Passa un ago monouso calibro 27 attraverso un tubo metallico per esporre la punta dell'ago da 3 a 3,5 millimetri. Quindi tenere saldamente le ossa squamose del mouse con le dita. Spostare l'ago lateralmente sul cuoio capelluto e trovare la sutura sagittale mentre la punta dell'ago è agganciata sulla sutura.
Spostare la punta di circa un millimetro verso destra, quindi spostare la punta rostralmente per trovare la sutura coronale. Successivamente, inserire l'ago lentamente e verticalmente. Iniettare la soluzione RTX per 10 secondi e tenerla per altri 10 secondi dopo.
Successivamente, ritirare lentamente l'ago e riportare il mouse nella gabbia di casa. Una settimana dopo l'iniezione RTX, almeno 60 minuti prima del test, trasferire il mouse nella sala prove. Almeno 30 minuti prima della prova, posizionare il mouse in una gabbia di plexiglass per consentirgli di acclimatarsi all'ambiente.
Quindi, 20 minuti prima del test, somministrare acetaminofene a 300 milligrammi per chilogrammo al mouse per via intraperitoneale. Tenere il mouse liberamente in una piccola borsa di stoffa e inserire un ago calibro 30 nel tallone della zampa posteriore destra. Far avanzare l'ago per via sottocutanea verso il cuscinetto da passeggio e iniettare 20 microlitri di soluzione RTX a 0,05 microgrammi per millilitro.
Successivamente, misurare il periodo di leccare e mordere il comportamento nella regione glabro della zampa interessata in ogni blocco di cinque minuti. Una settimana dopo l'iniezione RTX, trasferire il mouse nella sala prove. Posizionare il mouse in una gabbia di plexiglass.
Contrassegnare le macchie a 1,5 e 2,5 centimetri dalla base della coda. Quindi, tenere il mouse liberamente in un piccolo sacchetto di stoffa e applicare pressione sulle macchie con una sonda smussata. Si prega di notare che viene imposta una pressione di taglio di 250 grammi per evitare danni ai tessuti.
Determinare la pressione necessaria per suscitare il comportamento di fuga e calcolare la soglia nocicettiva calcolando la media della pressione determinata nei due punti. Ripetere le procedure ogni 15 minuti. Dopo aver ottenuto la linea di base, somministrare acetaminofene a 300 microgrammi per chilogrammo al mouse per via intraperitoneale, quindi ripetere il test di pressione della coda ogni 15 minuti fino a raggiungere i 90 minuti.
Queste due cifre mostrano la reattività dei topi trattati con SC o ICV all'iniezione intraplantare di RTX. Il comportamento leccare e mordere dei topi trattati con veicoli è stato notevole nei primi 10 minuti. Sebbene i topi pretrattati SC non mostravano affatto un comportamento leccare e mordere, i topi pretrattati ICV normalmente rispondevano all'iniezione plantare di RTX.
Inoltre, la somministrazione intraperitoneale di acetaminofene ha ridotto il comportamento leccare e mordere dei topi trattati con ICV del veicolo, ma non nei topi trattati con ICV RTX. Questo grafico mostra gli effetti analgesici dell'acetaminofene a 300 microgrammi per chilogrammo nel test di pressione della coda. Acetaminofene ha ridotto la risposta nocicettiva dei topi pretrattati del veicolo in entrambi i test, ma gli effetti analgesici dell'acetaminofene sono stati inibiti nei topi che sono stati pretrattati ICV con RTX.
Una volta padroneggiata, questa tecnica di iniezione ICV può essere applicata per altri farmaci. Non dimenticare che lavorare con resiniferatoxina può essere estremamente pericoloso e assicurarsi di utilizzare guanti e occhiali di gomma per la protezione durante la manipolazione.
