Questo metodo può aiutare a rispondere a domande sullo stato efficace o motivazionale degli animali in diverse condizioni di dolore. È un passo importante per migliorare la traduzione della ricerca preclinica. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è relativamente veloce e facile da eseguire, ma valuta ancora motivazioni complesse che influenzano il comportamento legato al dolore.
Inizia costruendo le pareti laterali, il pavimento e il soffitto della camera uno usando un acrilico bianco opaco di tre millimetri di spessore. Per la parete frontale, utilizzare un acrilico trasparente di tre millimetri di spessore. Attaccare il coperchio della camera uno con una cerniera in modo che i topi possano essere facilmente posizionati e recuperati dalla camera.
Quindi fissare il nastro autoadesivo a diodi emettitori di luce sulla superficie interna del coperchio per fornire un'illuminazione di circa 4.800 lux. Far scorrere un foglio acrilico opaco dentro e fuori posizione per chiudere la camera uno dal resto del dispositivo MCA. Successivamente, costruisci una camera non illuminata lunga 270 millimetri due, la camera di prova MCA, utilizzando acrilico rosso scuro traslucido su tutti i lati con un coperchio incernierato sulla parte superiore.
Quindi posizionare una griglia 13 x 31 con due fori millimetrici sul pavimento della camera attraverso i quali può sporgere una serie di sonde smussate con punte di diametro 0,5 millimetri. Regolare l'altezza delle sonde posizionando fogli acrilici aggiuntivi sotto la piastra di base della sonda. Utilizzando questo approccio, configurare il dispositivo con altezze della sonda pari a zero, due e cinque millimetri.
In alternativa ai perni smussati della mappa o materiali simili, utilizzare i file della stampante 3D per stampare il pavimento della camera due e la piastra della sonda con un materiale lavabile e biocompatibile come la plastica nylon 12. Infine, costruisci una camera scura tre usando acrilico rosso scuro traslucido su tutti i lati con un coperchio incernierato simile alle camere uno e due. Posizionalo all'estremità opposta della camera uno per fungere da area di fuga oscurata dalle sonde meccaniche nella camera due.
Un giorno prima di programmare il test di base, acclimatare i topi all'unità MCA per 5-15 minuti con i loro compagni di gabbia per facilitare l'esplorazione sociale dell'intero dispositivo. Assicurarsi che i LED nella camera uno siano spenti, che la barriera tra le camere uno e due sia mantenuta aperta e che le sonde non sporgano attraverso il pavimento della camera due. Quindi, configura una videocamera in grado di registrare filmati da 1080 pixel su un treppiede con una vista laterale dell'intero dispositivo MCA.
Regolate il campo visivo in modo che l'MCA riempia l'immagine registrata. Una volta iniziata la registrazione, tenere una scheda di cancellazione a secco portatile nella vista sul campo della telecamera per etichettare l'inizio del video con informazioni identificative sull'esecuzione dei test dell'animale. Per la prima corsa, impostare l'altezza della sonda su zero e trasferire il mouse da testare dalla sua gabbia di casa a quella della camera con la porta a barriera in posizione.
Avvia un timer visibile nel metraggio registrato. Dopo 10 secondi, accendere la camera un LED. Dopo che il mouse è rimasto nella camera illuminata per 20 secondi, ritirare la barriera tra le camere uno e due.
Osserva l'animale per due minuti e misura le latenze o i tempi di permanenza con un cronometro mentre il test è in corso. Registrare la latenza alla prima entrata nella camera due, la latenza all'attraversamento di più della metà della camera due, il tempo di permanenza totale nella camera due, la latenza per raggiungere la camera tre e il tempo di permanenza totale in ciascuna camera entro due minuti e convertirli in proporzioni. Una volta completato il test, riportare il mouse nella sua gabbia di casa.
Pulire le camere MCA con etanolo al 70% e lasciarlo asciugare completamente. Dopo aver eseguito tutti i topi della coorte con l'altezza della sonda impostata a zero, inserire un foglio di acrilico da tre millimetri sotto la piastra di base della sonda meccanica e ripetere la corsa con un'altezza della sonda di due millimetri. Dopo aver eseguito tutti i mouse con l'altezza della sonda impostata su due millimetri, inserire un altro foglio di acrilico da tre millimetri sotto la piastra di base della sonda e ripetere la corsa con un'altezza della sonda di cinque millimetri.
Eseguire una pulizia finale con un disinfettante alla fine della sessione di test. Nel modello completo del dolore infiammatorio indotto dall'adiuvante di Freund, un'iniezione salina non cambia la latenza di fuga rispetto al basale. I topi iniettati con l'adiuvante hanno mostrato un aumento significativo della latenza di fuga quattro giorni dopo l'iniezione, ma solo quando l'altezza della sonda è stata aumentata a cinque millimetri.
Questo aumento della latenza non è stato osservato nei topi che hanno ricevuto carprofene 90 minuti prima dell'inizio dei test. Il modello di lesione nervosa risparmiata del dolore neuropatico ha aumentato significativamente la latenza per sfuggire rispetto al basale quando l'altezza della sonda è stata impostata su cinque millimetri. Questo aumento è stato impedito dalla somministrazione dell'analgesico oppioide buprenorfina 90 minuti prima del test.
L'aumento della latenza di fuga è stato osservato anche nei topi che non sono stati sottoposti a un ciclo basale di test MCA prima della lesione del nervo. L'aumento della latenza di fuga nei topi con lesioni nervose risparmiate a cinque millimetri è stato impedito dal gabapentin somministrato 90 minuti prima del test. Nel modello di frattura o fusione, la latenza per sfuggire dalla camera uno aumentava proporzionalmente all'altezza della sonda prima della lesione.
Dopo l'infortunio, la latenza è rimasta invariata a zero millimetri, ma è aumentata significativamente all'altezza della sonda di due millimetri e cinque millimetri per i maschi e all'altezza della sonda di cinque millimetri per le femmine rispetto al basale. La cosa più importante da ricordare quando si tenta questa procedura è assicurarsi che tutti i topi siano abituati al dispositivo MCA e mantenere una corretta randomizzazione e accecamento durante lo studio. Questo metodo può essere utilizzato insieme ad altre misure di sensibilità al dolore tra cui von Frey o preferenza di luogo condizionale.
