Il modello di trapianto di fegato ortotopico del ratto è un potente strumento per studiare molteplici aspetti del trapianto di fegato. Da una risposta immunitaria sull'infezione, agli aspetti tecnici della procedura. I principali vantaggi di questa tecnica sono che può ridurre le complicanze, rappresentare meglio il trapianto di fegato comely e migliorare la sopravvivenza dei riceventi.
Questo protocollo modificato di trapianto di fegato ortotopico per topi imita da vicino aspetti del trapianto di fegato umano e fungerà da modello di ricerca variabile e clinicamente rilevante. Speriamo che attraverso la dimostrazione visiva, gli spettatori possano imparare tutti i dettagli e abbreviare la curva di apprendimento per padroneggiare l'abilità di microchirurgia richiesta per questa tecnica. Dopo aver iniettato 300 unità internazionali di sodio eparina nella vena cava inferiore intraepatica di un ratto anestetizzato di 12-14 settimane, fare un'incisione di cinque millimetri sotto la biforcazione del condotto biliare e inserire lo stent del condotto biliare nel condotto biliare comune.
Fissare lo stent con una legatura di seta 7-0, un millimetro sopra l'incisione e una legatura 10 millimetri sotto la biforcazione. Tagliare il condotto biliare tra le due cravatte ed esporre la corretta arteria epatica. Dividi l'arteria gastroduodenale tra due legature di seta 7-0 ed esponi l'arteria gastrica sinistra, l'arteria splenica e il tronco celiaco.
Quindi tagliare l'arteria gastrica sinistra, l'arteria splenica e il tronco celiaco tra le cravatte dell'arteria. Utilizzare una siringa da 20 millilitri dotata di un ago calibro 21,5 per iniettare lentamente 20 millilitri della soluzione di lattato di Ringer di quattro gradi Celsius nella vena del portale. Per preparare il fegato donatore, aprire la biforcazione del tronco celiaco, dell'arteria splenica e dell'arteria gastrica sinistra per formare un polsino a maniche arteriosa più grande e inserire lo stent arterioso calibro 24 di lunghezza 1,5 millimetri nella comune arteria epatica del donatore attraverso il polsino.
Quindi fissare lo stent con un 8-0 legatura in polipropilene e sciacquare lo stent con la soluzione di lattato di Ringer. Dopo aver esposto la vena porta di un ricevente di ratto di 12-14 settimane, dividere il condotto biliare ricevente a 0,5 centimetri sotto una biforcazione del tiler e inserire uno stent del condotto biliare nel condotto biliare comune distale. Esporre le arterie epatiche sinistra, centrale e destra e legare i vasi distali alla biforcazione dell'arteria epatica.
Tagliare le arterie vicino al fegato sopra le cravatte e posizionare un lungo pezzo sottile di garza dietro la vena cava inferiore super epatica. Posizionare un supporto vena cava intraepatico stampato in 3D dietro la vena cava intraepatica e utilizzare una sutura monofilamento non assorbibile Tenno per cucire insieme le estremità della maniglia stampata in 3D. Legare liberamente una legatura di seta 7-0 sotto sia il supporto stampato in 3D tra la vena cava intraepatica e la vena porta, sia bloccare la vena cava intraepatica appena sopra la vena renale destra sotto il supporto cava stampato in 3D.
Blocca la vena del portale appena sopra la vena pilorica e sotto il porta fotovoltaico stampato in 3D. Utilizzando una siringa da tre millilitri con un ago calibro 27 attaccato, sciacquare due millilitri della soluzione di lattato di 37 gradi Celsius Ringer attraverso la biforcazione della vena del portale e bloccare la vena cava super epatica sopra il fegato con un morsetto Kitzmiller. Quindi tagliare sotto il morsetto il più vicino possibile al fegato e tagliare sopra i supporti stampati in 3D sia per la vena portale che per la vena cava interepatica per rimuovere il fegato ricevente.
Per il trapianto di fegato del donatore, orientare attentamente il fegato donatore all'interno della cavità corporea del ricevente in modo tale da poter creare un'anastomosi di ciottoli superiore. Inserire il bracciale della vena del portale dal donatore nella vena porta ricevente e stringere la cravatta di seta 7-0. Rimuovere il morsetto atraumatico dalla vena cava super epatica e rimuovere la clip microvascolare per la vena porta.
Dopo aver re-perfusato il fegato con sangue caldo, inserire il bracciale vena cava intraepatico donatore nella vena cava intraepatica ricevente e fissare il vaso con la cravatta di seta 7-0. Quindi rimuovere la clip vena cava intraepatica del donatore prima di rimuovere la clip ricevente. Per eseguire un'anastomosi arteriosa, tagliare la porzione del tronco celiaco dal donatore che si estende oltre lo stent e bloccare la corretta arteria epatica del ricevente.
Tagliare la cravatta alla fine e qualsiasi tessuto extra che circonda il vaso. E usa la soluzione di lattato di Ringer per sciacquare i lumen delle estremità del donatore e del recipiente. Usando un ago curvo, posizionare una sutura di etilon 10-0 attraverso l'aspetto sinistro dell'arteria epatica del donatore, 2,5 millimetri sopra l'orifizio distale dello stent e fuori attraverso la fine dello stent.
Trafissire l'arteria epatica corretta del destinatario 0,5 millimetri sotto l'orifizio del vaso dal lato sinistro del vaso, al lato destro dell'arteria. Posizionare la sutura successiva attraverso la parete destra dell'arteria epatica donatrice dall'interno verso l'esterno, a una distanza dall'orifizio stent identico al punto originale, e tirare su sulle due estremità del monofilamento non assorbibile 10-0 per far scivolare l'arteria epatica corretta del ricevente e nello stent dell'arteria epatica. Quindi legare il monofilamento non assorbibile 10-0 con se stesso sull'arteria epatica donatrice.
Sciacquare sia i dotti biliari riceventi che donatrici e inserire i dotti biliari donatori nel condotto biliare ricevente. Quindi stringere la cravatta precedentemente posizionata attorno al condotto biliare ricevente. In questo esperimento rappresentativo, il modello di trapianto ortotopico di fegato ortotopico dell'arteria non epatica ha dimostrato tassi di sopravvivenza del 50 e 37,5%, rispettivamente a 21 giorni e 60 giorni, dopo l'operazione.
Al contrario, la procedura ottimizzata di riconnessione dell'arteria epatica ha aumentato significativamente la sopravvivenza a lungo termine. L'analisi istologica di un sottoinsieme rappresentativo di animali trapiantati senza riconnessione dell'arteria epatica ha rivelato segni di lesione epatica ipossica con necrosi lobulare centrale, al sesto e tredici giorni dopo il trapianto. La necrosi epatica estesa è stata associata a livelli tremendamente elevati di immuno transferees di alanina e aminotransferasi aspartato in questi animali.
Al contrario, i ratti trapiantati con riconnessione dell'arteria epatica non presentavano segni di lesioni epatiche e l'analisi istologica ha rivelato una normale struttura di parenchima epatico, con acini organizzati, lobuli, arterie e dotti biliari. Inoltre, l'analisi istologica dei fegati da ratti modello di riconnessione dell'arteria non epatica ha rivelato cambiamenti reattivi dopo lesioni epatiche ipossia. Compresa la proliferazione del condotto biliare di mercato, la fibrosi e l'infiammazione del portale peri e il parenchima epatico distorto.
Questo protocollo può essere adattato per studiare molti aspetti immunologici e chirurgici del trapianto di fegato e può servire come modello per testare nuovi interventi terapeutici rilevanti per i trapianti.
