L'obiettivo generale di questo video è quello di stabilire un modello murino di pancreatite acuta attraverso l'iniezione retrograda di taurocolato di sodio nel dotto biliopancreatico. Tutti gli esperimenti che coinvolgono animali sono stati approvati dal Comitato etico animale della Soochow University. Tutte le procedure chirurgiche sono state eseguite in anestesia completa.
Gli analgesici non sono stati utilizzati per non interferire con il decorso naturale della malattia, che è stato evidenziato da precedenti letterature e approvato dal Comitato etico animale dell'Università di Soochow. Velocizza il mouse da otto a 12 ore prima dell'intervento chirurgico. Preparare filtri in soluzione di taurocolato di sodio al 5% attraverso un microfiltro da 0,22.
Autoclave degli strumenti e dei materiali chirurgici, tra cui pinze, forbici, supporto per lame, portaago, clip emostatica, morsetti vascolari e teli sterili. La microsingetta è stata sterilizzata attraverso l'irradiazione. Con il topo, indurre un'anestesia generale con iniezione intraperitoneale di soluzione di sodio pentobarbital all'1% alla dose di 50 milligrammi per chilogrammo.
Fissare il mouse in posizione supina su una piastra piana in schiuma irradiata con il nastro. Rimuovere la pelliccia di un topo con una crema di depilazione dal livello del processo xifoide fino alla linea di collegamento della colonna iliaca superiore anteriore bilaterale, con i lati sinistro e destro paralleli alla linea ascellare anteriore. Pulire la pelle due o tre volte con lo 0,5% di iodoforo e lasciarla asciugare per uno o due minuti ogni volta.
Coprire il mouse con tende sterili. Tagliare lo strato di pelle aperto e quindi aprire per via sottocutanea. Fai un'incisione addominale mediana lunga circa due o tre centimetri.
Individuare il duodeno da sinistra a destra lungo lo stomaco. Estrarre delicatamente il duodeno e sul lato sinistro usando una pinza chirurgica e un batuffolo di cotone imbevuto di disinfettante per esporre il pancreas, il dotto biliopancreatico e la papilla duodenale. Utilizzare 8-0 suture per passare attraverso la connessione tra il duodeno e il pancreas intorno alla papilla, tirare la sutura sul lato sinistro del corpo del topo per fissare il duodeno.
Tirare delicatamente la pelle e il bordo inferiore del fegato da parte. Bloccare il dotto epatico comune. Perforare retrogradamente il microiniettore nel dotto biliopancreatico distale.
Fissare la punta dell'ago vicino alla papilla duodenale con un morsetto. Infondere 10 microlitri di taurocolato di sodio al 5% nel dotto biliopancreatico ad una velocità di 5 microlitri al minuto. Tenere chiuso il dotto biliopancreatico per 5 minuti per ottenere una pressione stabile.
Rimuovere i morsetti. Estrarre il microiniettore, rimuovere l'altro morsetto e fissare la sutura. Ripristinare il duodeno nella posizione anatomica originale e controllare il sanguinamento.
Chiudere la ferita con punti di sutura 6-0. Rimuovere il drappo sterile. Disinfettare l'incisione con lo 0,5% di iodoforo.
Recuperare gli animali dall'anestesia su un cuscinetto termico a 37 gradi Celsius. Somministrare 0,8 millilitri di 0,9% di soluzione salina per via sottocutanea per l'integrazione di liquidi. A 24 ore dopo l'operazione, anestetizzare il topo con pentobarbital sodico usando la stessa dose e via di iniezione.
Raccogliere il sangue intero dall'aorta addominale e girare a 1.500 x g per 15 minuti per isolare il siero per i test sierologici. Raccogliere il pancreas e i tessuti polmonari per la valutazione istologica. Immergere il pancreas in una soluzione di paraformaldeide al 4% per 24 ore.
Disidratare in una serie di concentrazioni di alcol e incorporare nella paraffina. Utilizzare un microtomo per preparare 5 sezioni di tessuto pancreatico micro spesso. Eseguire la colorazione H&E per la valutazione istologica del pancreas.
I topi erano leggermente inattivi e avevano perso peso a 24 ore dopo l'operazione rispetto alla pre-operazione. I tassi di sopravvivenza dei topi di controllo e SAP sono stati rispettivamente del 100% e del 72,7%, a 72 ore dopo l'operazione. Secondo i risultati della colorazione H & E dalle sezioni del pancreas, la necrosi pulpare del tessuto pancreatico potrebbe essere osservata nei topi SAP mentre non è stato possibile trovare cambiamenti significativi nei topi di controllo.
Inoltre, livelli significativamente aumentati di amilasi, lipasi, pancreas e attività MPO polmonare sono stati trovati nei topi SAP rispetto ai topi di controllo. Inoltre, sono stati trovati anche livelli significativamente elevati di indici epatici e renali tra cui ALT, AST, BUN e creatinina. Utilizzando l'iniezione retrograda di taurocolato di sodio nel dotto biliopancreatico, la pancreatite acuta grave potrebbe essere indotta nei topi.
Buona esposizione del dotto biliopancreatico per garantire il successo della puntura. Durante la puntura, assicurarsi l'angolo e la forza appropriati per evitare la perforazione del dotto biliopancreatico. Il modello SAP indotto da TC qui è un modello adatto per studiare i meccanismi coinvolti nella pancreatite acuta grave.
È un modello economico che utilizza reagenti meno costosi e questo video aiuta a formare più velocemente il chirurgo alle prime armi.
