Un protocollo efficiente per l'analisi CUT&RUN di cellule satelliti di topo isolate da FACS

Da oltre 20 anni, il nostro laboratorio si interessa al ruolo fisiopatologico dei recettori nucleari. Per decifrare la loro funzione in vivo, abbiamo ingegnerizzato un modello murino che consente il controllo spaziale e temporale della loro espressione. Parallelamente, abbiamo sviluppato tecniche all'avanguardia per studiare la loro funzione molecolare nei tessuti di topo.

Il nostro interesse scientifico ci ha recentemente portato a determinare la segnalazione dei recettori secosteroidi e steroidei in vari tessuti, tra cui il muscolo scheletrico. Recentemente abbiamo dimostrato che il recettore degli androgeni nelle miofibre che differenziano le cellule del muscolo scheletrico è strumentale alle loro funzioni contrattili e metaboliche. I nostri recenti risultati forniscono una comprensione più profonda delle dinamiche fisiopatologiche del muscolo scheletrico che è fondamentale per sviluppare trattamenti efficaci per i disturbi associati ai muscoli.

Abbiamo sviluppato questo protocollo per poter eseguire l'analisi del cistroma su cellule staminali muscolari in vivo. Tutti i protocolli precedenti utilizzavano modali in vitro, il che dissocia completamente l'indagine da un contesto di intero organismo. Oltre ad essere a basso costo ed efficiente in termini di tempo, questo protocollo fornisce un ambiente sperimentale efficace per studiare il reclutamento del fattore di trascrizione e il paesaggio della cromatina nelle cellule progenitrici del muscolo scheletrico.

La cromatina preparata da questo protocollo ha fornito la prima analisi dell'intero genoma della cistroma AR nelle cellule satelliti e faciliterà i futuri studi sulla regolazione genica. Tra i tanti, il nostro obiettivo futuro sarebbe quello di estendere queste indagini ad altri recettori degli ososteroidi ed esplorare i loro specifici co-regolatori nei vari tipi di cellule coinvolte nel processo di rigenerazione nel muscolo scheletrico.